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1、基于LC-MS/MS测定人体类固醇激素的研究进展2023摘要类固醇激素是一类具有环戊烷多氢菲结构的化合物,是由细胞色素P450酶催化形成的,在调节机体代谢、促进性器官发育等方面起着重要作用。临床上将类固醇激素水平作为肾上腺疾病和精神类疾病的诊断指标。液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)联用技术因具有高灵敏度、高通量和高专属性的特点,成为临床类固醇分析测定的首选方法。本文综述了LC-MS/MS在内源性类固醇激素测定中的应用,特别是在样品前处理、色谱条件和质谱条件方面的研究进展,为临床上类固醇激素的诊断检测提供了参考。在人体内,内分泌系统、神经系统、免疫系统共同担负生命持续的重要责任。激素则是内
2、分泌系统实现协调作用的物质基础。类固醇激素(Steroidhormone)又称苗体激素,属于激素中的一大类,其合成过程以胆固醇为前体,通过各种代谢酶的参与,在人体的肾上腺皮质、胎盘细胞的线粒体、平滑内质网和性腺中合成,产生化学结构不同的21C,19CJ8C的骨架,合成过程示于图1。根据药理作用,类固醇激素主要分为孕激素、皮质激素、性激素,它们在人体的生长、发育、生殖、以及维持体内环境稳定等方面都起着重要的调节作用。激素是通过在人体靶细胞上与受体结合而发挥作用,具有极高的专属性。当体内类固醇激素水平下降或缺乏时,机体会产生严重的症候群,甚至危及生命。因此,临床上将类固醇激素水平作为较多疾病的诊断
3、指标,如先天性肾上腺增生、库欣综合征、原发性醛固酮增多症、以及一些精神状态类疾病,示于图2o由于大多数激素在体内的含量极微,且化学性质差异较大,寻找一种准确、特异的分析方法成为临床疾病诊断的首要任务。图1类固醇激素在人体内的合成路径图2类固醇激素含量变化引起的临床疾病多囊卵巢 综合症5口还原酶 缺乏症先天性 忏腺皮质 增生症性胴症 发固多 原醛增在人体内,内源性类固醇激素含量一般为nmolL（皮质醇、脱氢表雄酮等）和pmolL（睾酮、雌酮等）量级,并且根据个体差异而变化,因此,低浓度类固醇激素的准确测定面临巨大挑战。目前,检测人体中类固醇激素的方法包括放射免疫测定法、酶联免疫吸附法(ELlSA
4、)、化学发光免疫测定法、气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)和液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)。其中,质谱法在检测灵敏度和准确度方面具有明显优势，凭借高灵敏度和特异性的固有优势,LC-MS/MS可以与高通量相结合，使该分析技术成为常规诊断的理想工具。近年来,关于LC-MS法的激素检测类综述侧重点不同。GraVitte等综述了LC-MS/MS在内源性性激素定量中的应用;HaWIey等对基于LC-MS/MS测量内源性糖皮质激素进行综述,特别提到了血清、尿液和唾液皮质醇;徐玲燕等综述了LC-MS/MS在临床内源性类固醇激素分析方面的应用及进展,特别是样品前处理、色谱及质谱条件方面,并简要
5、阐述了该方法在肾上腺皮质激素及性激素测量方面的特点;金陈飞等综述了LC-MS/MS用于先天性肾上腺皮质增生症患者诊治的研究进展,明确了LC-MS/MS有避免非特异性物质干扰,解决免疫分析法的高假阳性,检测标本多样化及能够快速进行类固醇代谢谱分析的优点;鹿倩等归纳对比了近几年血液中类固醇激素常用的分析方法,为类固醇激素水平的准确测定提供了思路。本文将从样品前处理方法、色谱条件、质谱条件,以及质谱新技术进行综述,探究色谱-质谱联用技术在测定人体内类固醇激素方面的研究进展,为肾上腺相关疾病的诊断检测提供参考。1样品前处理质谱技术在临床监测中具有许多优势,但由于样本基质的复杂性,血液、尿液和头发等生物
6、样本不能直接送入质谱仪分析,需要去除样品中的大分子干扰物。因为在这些干扰物中,蛋白质会导致仪器堵塞,由盐和磷脂引起的基质效应会影响电离效率。为了减少基质干扰、净化样品,生物样本必须经过一系列的前处理过程以减少目标分析物在提取过程中的损耗,提高分析方法的准确性和灵敏度。目前,常用的样品前处理方法有蛋白质沉淀（PPT）、液液萃取（LLE）和固相萃取（SPE）。随着技术的发展,近年来出现了一些新的前处理方法,如分散液液萃取、超声波辅助提取法和超分子萃取等。为了得到高回收率,将多种前处理方法相结合已逐渐受到关注。在前处理方法选择上,应考虑分析物和样本基质的性质、衡量方法的可行性、以及前处理所需的时间和
7、成本等因素。1.1 蛋白沉淀PPT是通过在生物样品中加入沉淀剂的方式使蛋白质变性沉淀,然后将目标分析物从样品中提取出来的方法。有机溶剂（甲醇、乙睛或丙酮）,酸（三氯乙酸、高氯酸、偏磷酸和铝酸）,盐（氯化铝）和金属离子（硫酸锌）等被认为是PPT中最常用的沉淀齐IJ。有机溶剂会干扰蛋白质的分子内疏水相互作用,同时减少水合作用（水化程度较低的蛋白质不易溶解）,可溶性蛋白质通常具有被亲水表面包围的疏水中心,这些蛋白质的电离状态可以通过添加酸或碱来改变。Ionita等采用LC-MS/MS法检测人血浆中皮质醇、可的松和泼尼松,该方法具有较高的特异性,准确度和精密度也均在15.0%以内。OWen等利用LC-
8、MS/MS法分析血清皮质醇,该方法适用于常规临床应用,采用硫酸锌沉淀蛋白的前处理方法,血清样本中添加皮质醇后的平均回收率为99.0%,通过与2种商业免疫测定法对比,该方法具有较高的准确度和精密度。POlSon等对比了有机溶剂、酸、盐和金属离子4种蛋白质沉淀剂,以评估不同种类沉淀剂的蛋白质去除效率,在血清与沉淀剂体积比为2：1时,乙睛、三氯乙酸、硫酸锌可分别去除92.0%、91.0%、96.0%的血清蛋白,因此认为这3种沉淀剂具有较好的沉淀效果。PPT法简单、快速,但由于提取物的灵敏度和纯净度较低,需要在方法验证阶段反复验证。对于皮质醇或者脱氢表雄酮硫酸盐,它们在人体内的含量相对较高,在前处理阶
9、段不需要考虑样本被沉淀试剂稀释的问题;相反的,对于人体中含量较少的雌二醇或者醛固酮等化合物,沉淀剂沉淀不完全会对结果产生较大影响。此外,对于某些小分子化合物,该方法并不能很好地消除基质效应,反而会产生较强的基质效应而影响质谱信号。随着前处理技术的飞速发展,PPT已作为大多数前处理程序的第一步,后续将结合LLE或SPE纯化和浓缩来实现高灵敏度。液液萃取1.LE是利用待测物在两相溶液中溶解度的不同,通过涡旋、超声、振荡等手段实现目标物的提取方法,因样品制备简单而被广泛应用。在该方法中,萃取剂的选择非常重要,关键在于所选溶剂对目标化合物的溶解度大,且不与目标物发生反应,常用的萃取剂有乙醛、叔丁基甲基
10、酸、乙酸乙酯、正己烷等有机溶剂,以及它们的混合溶剂。采用LC-MS/MS法检测类固醇激素含量时,朱宇清等和马晓斐等均选择叔丁基甲醛作为提取剂考察血清中皮质激素的提取效果,方法回收率分别为84.5%90.4%和86.6%102.7%;SChOfield等采用LC-MS/MS法测定血清中雌二醇和睾酮,使用正己烷和乙酸乙酯混合溶液作为萃取剂进行样品前处理,2种分析物的日内精密度和日间精密度均小于7.0%,且回收率在97.5%107.3%之间,具有较高的灵敏度,适用于临床上对人体性激素的测定;KeSki-RahkOnerl等使用2-甲基丁烷、二乙醛、正己烷和叔丁基甲醛进行LLE实验,对比不同提取溶剂对
11、雄激素和孕激素的提取效率，结果表明,用叔丁基甲醛作为提取剂对所有类固醇激素均能产生最佳的萃取回收率,为103.0%113.0%,二乙酸对孕烯醇酮、孕酮和17-羟基孕酮的提取效率均低于87.5%,而孕酮分别用正己烷和2-甲基丁烷萃取后的提取效率小于80.0%oLLE具有回收率高、基质效应小等特点,但萃取后容易产生乳化现象,使水相与有机相界面分层模糊,导致方法的回收率和重复性较差,不利于自动操作。13固相萃取SPE是20世纪后期发展起来的一项分离技术,是利用填装吸附材料将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离,再用洗脱液洗脱,以达到分离和富集的目的,其适用于各种极性化合物的提取。
12、固相萃取柱的填料主要有离子交换、正相和反相等吸附材料,其中，类固醇激素在血清基质中常用反相萃取柱以达到良好的分离效果。Fanelli等采用叔丁基甲基酸结合C18固相萃取柱的前处理方法,应用质谱法准确定量了脱氧皮质酮、皮质醇等9种类固醇激素,开发并验证了同位素稀释液相色谱-串联质谱法,并将其与常规免疫测定法进行比较,此外,还建立了416名健康人群类固醇激素的参考范围。在线固相萃取可以减少样品量,提高样品回收率和处理通量,能够实现一部分的样品前处理自动化,且处理后的样品基质效应小,但对检测设备的要求较高。Li等将在线固相萃取与高分辨质谱检测器耦合同时测定血清中18种糖皮质激素,先用乙睛作为血清样品
13、的萃取剂,然后选择乙酸钱作为负载溶剂,在合成的整体柱上实现在线SPE,利用该技术测得的精密度小于12.1%,回收率在71.9%89.2%之间,该方法可用于临床手术前后类固醇激素含量的监测。目前,常用的固体吸附剂有有机聚合物、键和硅胶类、键和氧化物硅胶等,其中QaSiSHLB有机聚合物固相萃取柱在类固醇激素检测中的应用最广泛,回收率可达67.0%109.0%。近年来固相微萃取(SPME)技术也在蓬勃发展,与传统的样品前处理相比,SPME集采样、萃取、浓缩、进样于一体,减少了分析检测时间,其在测定人体类固醇激素方面的应用也在逐渐增多。SPME技术的优点是对受试者的损伤和生物体取血量较少,但因为该技
14、术的选择性差,且涂层纤维价格昂贵,目前没有得到广泛应用。总之,与PPT相比,SPE的步骤复杂;与LLE相比,SPE有着更广泛的适用性,但色谱柱成本昂贵,所以选择PPT时要综合考虑经济和时间因素。虽然SPE能够提供高回收率和良好的色谱峰,但需要更多的时间和步骤来执行,是半自动的,有时还需要使用强酸或强碱洗脱高极性分析物以获得高回收率,这不适用于质谱等检测器系统。1.4 多种前处理方法相结合类固醇激素及其代谢物是一类复杂的内源性物质,不同激素的化学性质和极性差别较大。为了降低基质效应、提高灵敏度,前处理阶段将PPT、LLE和SPE结合使用,非常适合临床复杂样本的检测。Broccardo等采用甲醇沉
15、淀蛋白结合固相萃取技术对血清样品进行前处理,利用新型微流体色谱装置结合LC-MS/MS定量分析人血清中睾酮、二氢睾酮、孕酮、皮质醇和可的松等5种类固醇激素,方法的绝对回收率大于60.0%,消除了基质效应;Taylor等通过乙睛蛋白沉淀后,用乙酸乙酯作为萃取剂,采用LC-MS/MS法分析血清中皮质醇、可的松、Il-脱氧皮质酮等13种类固醇激素,绝对提取回收率为50.0%,内标校正后评估的相对提取回收率在90.0%110.0%之间,具有较好的激素萃取效率;CarOn等采用LLE、衍生化和SPE相结合的方法,利用GC-MS/MS法同时定量分析孕激素、脱氢表雄酮等10种内源性类固醇,该方法不仅有较好的
16、重现性,而且能够在有限体积的血清中同时测定10种类固醇,有助于保存现有生物库中的重要临床样本。通过将不同的前处理方法相结合,彼此互补,最大程度地去除基质效应,可以在样品数量较少时考虑采用此方法。1.5 化学衍生法类固醇激素结构的特异性导致了电离效率和灵敏度降低。化学衍生法是在分析物上加入易电离基团,使更多的分析物带上电荷而进入质谱，提高了离子化效率,可获得更高的特异性和更好的灵敏度。对于电离效率较低的雌激素,常用丹磺酰氯作为衍生化试剂,用叱咤酸衍生化雄激素,采用LC-MS/MS分析衍生化后的雌激素和雄激素,其检测限均可达到10ngL以下。羟胺溶液衍生化反应是唯一能同时衍生化皮质激素、雌激素、雄
17、激素和孕激素的衍生化试剂,尽管会出现同分异构体干扰、灵敏度降低等情况,但其可用于类固醇激素的高通量检测,且相比于非衍生化有着灵敏度方面的优势。Keski-Rahkonen等将150L血清样品经LLE后,以盐酸羟胺溶液作为衍生化试剂,7种类固醇激素的选择性和灵敏度均显著提高。此外,还有其他的衍生化试剂,如烷基化、硅烷化、2-脱基口比D定化等,生物样本发生衍生化后用LC-MS/MS检测,其检测限可提高到IOng/L水平。1.6 基于新型材料的前处理方法近年来,新型材料的多元化发展成功地应用于人体内代谢物质、神经递质、癌症和药物的检测,各种材料吸附剂已被用于提取类固醇激素,包括分子印迹聚合物(MlP
18、)、二氧化硅、多壁碳纳米管(MWCNTS)和金属有机框架(MoFS)。其中,MOFs是由金属离子和有机配体配位构成的一类晶体多孔材料,示于图3,因为MOFs具有金属的活性、官能团的选择性以及特殊的配位空间结构,其形成的特定框架结构为MOF材料的广泛应用提供了基础条件。与传统的多孔材料相比,MOFs具有比表面积高、孔径可调和表面易功能化等优点,因此,MOFs及其复合材料在气体吸附、储存与分离、催化、生物医学成像、生物传感、药物递送等方面拥有广阔的应用前景。Tan等建立了超声辅助乳化微萃取和涡流辅助微固相萃取相结合的两步提取工艺,用MIL-IOl(Cr)型多孔MOFS作为吸附剂,采用LC-MS/M
19、S法检测真实环境水样中的雌酮,相对回收率在85.4%120.8%之间。LU等原位合成了三维介孔石墨烯(3D-MG)和错基MOFs的复合材料MG1JiO-66,在表面辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(SALDI-TOFMS)中作为吸附剂和基质,3种类固醇激素的检出限和定量限分别为315nmolL和1020nmolL,回收率在79.3%97.2%之间。Zhang等合成了纳米乙二胺功能化铝基金属有机骨架(MlL-IOl-ED),并将其用于血清样品中蛋白质的一步去除和抗精神病药物的提取,与传统提取方法相比,MIL-101-ED预处理步骤具有操作简便等优点。MOFs这类新型材料已经在体内代谢、药毒物检测等
20、关键领域崭露头角,未来新型材料的发展也会与类固醇激素的检测融合得越来越紧密。Cr(NO3)3 9H2O+COOHCOOH H2BDCTime/minHPLC-DAD-analysis MIL-IOl-EDCentrifugal Desorption Centrifugal AdsorptionAntipsychotic drugsProtein图3MIL-101-ED和D-SPE的制备2LC-MS/MS应用于类固醇激素的检测质谱技术的不断发展,高准确度、高灵敏度、高通量的定量分析类固醇的优势已使其逐渐替代传统的免疫法,越来越广泛的应用于临床检测中，为疾病诊断提供了参考。质谱检测方法主要包括GC
21、-MS/MS和LC-MS/MS,其中,LC-MSMS用于类固醇激素检测通常不需要衍生化,可以缩短前处理时间、减少样品损耗。Koal等以试剂盒形式评估了一种新标准化的LC-MS/MS法,可用于常规测定人类血清样本中16种类固醇激素,与免疫法相比,其定量分析类固醇激素的准确度在88.3%115.5%之间,定量下限为0.0132gL,证明了标准化1.C-MS/MS在临床诊断中分析综合类固醇激素的潜力。与高效液相色谱(HPLC)相比,超高效液相色谱(UPLC)适用于粒径小于2m的填料，可以提高耐压能力、增加柱效,使样本在高流速、短时间内被完全分析,UPLC的分离度和分析速度是HPLC的1.7倍和8倍,
22、在既要满足高通量分析又要适用于各种复杂基质方面,UPLC-MS/MS比HPLC-MS/MS更具优势。近年来,基于LC-MS/MS测定类固醇激素的方法列于表1。表1基于LC-MS/MS测定人体类固醇激素的方法分析_AaalyiuSamUr，*5我*w法lroncpMCuluum第初和MoUkEGNtIjmwWkuuuq级-Linear“F安不工IttRvkrncHCM.T我X发M蟹*U汽窟sr2urbx*SBHny!KapidR、RlUIigHTculuv2.1IncUCJOOBiml及M1mL矶松2隰LttM0.5K/L九5*-20麻，LMlMZ/*pr)f卜卜，MXCH4rlyi*CCmen
23、X2.ImM水-MZ11g.,.7.8依io.i%osa12.5700012，妣,二M血Rsr,sCltr*r*ephterr4utM本(含*多，乙睛帝摘9M1MmIr-M-nc.MI-IlXCBfZdL三MS-M)4I17HM*km.X&嫁mmmIBN版不取CS4XSbCKCVktlA(50BtmX92.1ibuX1.8IBnj水(6a恪Xwet)M(ta5K中陂)。8，一0.$，1dCK-2力L137之M.M.!H,MMX&M二5TKJl假发M.POM3惴午IMA9TL椎区取AKVPhEvm,3RP1痴mmX4.RbmJ三m)2C;.MTM-Ma2“WI,K3fH.4e-S拿I分卜_AMh
24、rU好押。5ttWwU;HvdnalnwMRImcHOtraakMCKrapter：CmmXZ1mm4GB11.1.KI-W*八.ISJ.sm.aw.C,MM枪uaQSUt-1.ESI-I114cIMmAak1Srf*S6wnMkdwithHEH(111，Q刎NA1)M.sttACli57.I.I-SOK/LcUfrKLMNOItlM11残题草版AKI.VvrwTMR、67PUKCllvturxMIM，心，U01IlVr*LI(Wym,L；/*KLMNONrttityBEHCltoaltma1awml：./第ImmUL11102,L“5-WMWLM.11-IUa三*e武LMArCrKfXXtn
25、tVlitoIrwtmMUBMB*-HI(ctfmCh，l.2fmlhiodine.if*2.1 色谱条件色谱条件包括仪器、色谱柱、流动相、进样量和柱温等,其中,最重要的是色谱柱和流动相的选择。大多数方法利用C8和C18键合硅胶反相色谱柱实现了类固醇激素的完全分离。Marcos等开发并验证了基于LC-MS/MS定量分析67种内源性类固醇激素的方法,大多数类固醇能够显著分开,且回收率高于80.0%;在3个浓度水平下评估的日内精密度均小于20.0%,并且多数分析物未见显著的基质效应,证实了该方法和色谱柱的适用性。临床测定工作需要分离一些同分异构体,普通的色谱柱无法达到完全分离的目的,因此,Hype
26、rcarb色谱柱、ZOrbaX-SBPhenyl色谱柱和Eurokat聚合物色谱柱等快速发展。这些色谱柱具有较宽的PH值耐受范围和稳定的机械性能,可用于极性化合物、同分异构体、糖类的分离。Ionita等使用Zorbax-SBPhenyl色谱柱将1对同分异构体进行良好地分离。此外,最新发展的UPLC运用2m的小粒径填料可以提高耐压能力并增加柱效,同时也有利于待测物色谱峰分辨率和灵敏度的提高。临床分析工作中,通常通过改变流动相组成实现色谱柱选择性的提高,流动相分为水相和有机相,水相通常使用水,有机溶剂常选择甲醇或乙睛。甲醇作为质子型溶剂,能够促进M+H+离子的形成。然而,当与水混合时,其粘度增加,
27、从而导致较高的柱压。自从UPLC出现以来,使用亚2m颗粒柱已成为一种趋势,它们可以提高峰的分辨率。然而,当受到较高的压力时,粒径小于2m的色谱柱容易迅速降解，可能导致色谱无法正常分离,通常需要使用低流速,从而增加了从进样到分析的时间o在这种情况下,可以用乙睛代替甲醇,乙睛与水混合时的粘度较低,产生的压力较低;然而,作为一种非质子溶剂,乙睛不会促进MH离子的形成,价格通常高于甲醇。此外,流动相添加剂（如甲酸、醋酸镂或氯化钱）的选择对色谱分离及灵敏度有较大影响,在正电离模式下,甲酸可以提供丰富的质子供应,有利于M+H+离子的形成;而对于非极性化合物（如雌二醇等）,可以通过形成加合物（如氯化锭）或加
28、入醋酸镇来增强内电离。2.2 质谱条件串联质谱在临床检测中占据主导地位,常用于类固醇激素分析的离子源包括电喷雾离子源（ESI）、大气压光化学电离离子源（APPI）和大气压化学电离离子源（APCl）等,其中以ESl应用最为广泛。在ESI中,柱洗脱液进入施加电压的不锈钢毛细管中,加热的气体（通常为氮气）沿着毛细管传递,导致洗脱液雾化和带电液滴产生。这些液滴经历库仑裂变,在进入质谱仪前通过解吸和解溶转化为稳定的离子。APCI依靠加热的雾化器对柱洗脱液进行汽化,目标分析物随后被电晕放电针电离,然后产生稳定的离子进入质谱仪。Ray等使用固相萃取进行样品纯化,并在MS/MS检测前使用APQ将分析物转化为离
29、子,开发了一种同时测定皮质醇、可的松和地塞米松的高灵敏度方法。事实上,Taylor等提出,APQ会导致标记的内标的氢原子与水的氢原子之间的交换,从而影响定量的准确性;KUShnir等认为,仪器的差异性影响了分析物的电离。APPl是一种新的方法,可作为APCI和ESI的补充,其使用紫外光照射柱洗脱液,非极性物质通过光化学作用完成质子转移和电荷交换,从而引发一连串反应，在形成稳定离子的过程中,这些离子被导入质谱仪。ESLAPCI和APPI减少基质效应和检测过程中的不确定性都是通过选择性电离实现的。在实际样本的检测过程中,由于有机盐、无机盐、糖等化合物会与分析物在离子化时发生竞争,导致目标物响应值变
30、化,进而影响方法的灵敏度和特异性。为了校正实验过程中的基质效应和样品损失,通常使用同位素内标法。对于复杂的类固醇类物质检测,通常是添加待测物的定代同位素内标面于它的化学性质、存在环境和目标物类似,能够同步抵消实验过程中产生的损失,校正样品和检测过程中的不确定性,保证LC-MS/MS定量结果的高准确度和高稳定性。2.3 新质谱技术的发展在LC-MS/MS临床应用中,常用串联三重四极杆(QQQ)质谱仪、离子阱质谱仪、高分辨质谱仪等。其中,QQQ灵敏度强、重现性好,通常作为人体内源性物质定量测定的首选仪器;而离子阱质谱仪由于仪器简单、灵敏度高等优点,也可用于测量复杂样品中的小分子疾病标志物。近年来，
31、高分辨质谱仪也在蓬勃发展,如轨道阱质量分析器(Orbitr叩)、磁质谱质量分析器、飞行时间质谱仪、傅里叶变换离子回旋共振质量分析器等,它们可获得待测物的分子离子信息和碰撞后的碎片离子信息,通过浏览质谱数据库,实现对整个类固醇激素代谢通路的定性分析。QExactiveTM是ThermofisherScientific发布的基于OrbitraP技术的液相色谱-质谱仪,能够达到10-7级质量精度和10000半峰高处的全峰宽以上的超高分辨率。该质谱仪的优点是拥有超高分辨率、超高质量精度以及高定量能力,但仪器价格昂贵,且定量灵敏度逊于三重四极杆，目前在临床上的应用较少。如果将高分辨质谱与三重四极杆相结合
32、,可以提高高分辨质谱的定量灵敏度,有望逐渐应用于临床上内源性激素的分析。3总结与展望类固醇激素在调节机体代谢、促进性器官发育等方面起着重要作用,因此,测量人体多种类固醇激素在临床上具有重要意义。为了更好地进行色谱分离和检测,本文概括了样本前处理技术,对比了PPT、LLE和SPE的优缺点,考虑了多种前处理方法相结合,同时还介绍了新型材料技术，为后期的临床检测提供了更准确的信息。此外,与免疫分析法和GC-MS/MS法相比,LC-MSMS因具有高灵敏度和高特异性已成为临床上测定复杂基质中类固醇激素水平的金标准,在今后的检测工作中，离子源及质量分析器的选择,液质仪器硬件的发展是LC-MS/MS实现高通量和高灵敏度的关键,也是LC-MS/MS技术开发的重点和难点。未来随着仪器性能的优化和检测精度的提高,LC-MSMS将会广泛应用于临床检测中。本文引用来源：万薇,谢洁,屈子裕等.基于LC-MS/MS测定人体类固醇激素的研究进展JOL.质谱学报:1-152024
