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1、国家标准化妆品中阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因的测定液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）编制说明一、工作简况1.任务来源本标准是根据国标委发202310号“国家标准化管理委员会关于下达2023年第一批推荐性国家标准计划及相关标准外文版计划的通知”制定,项目名称化妆品中阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因的测定液相色谱-串联质谱法，计划编号：20230285-T-607。起草单位：天津海关动植物与食品检测中心。项目周期：18个月，计划应完成时间为2024年9月。2.制定背景卡因类化合物可能添加于晒后修复、祛斑、祛痘、去角质、去皱、抗衰老等化妆品中，以达到减轻疼痛等皮肤不适的作用，同时具有抗皱、抗衰老作用，但
2、由于其具有中枢神经毒性和心血管毒性，化妆品中的卡因类化合物可以通过皮肤毛细血管被吸收并进入血液循环，对人体健康造成危害，欧盟化妆品法规明确将普鲁卡因等卡因类化合物列为化妆品禁用组分。我国化妆品安全技术规范2015年版将阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因等10种卡因类化合物列为禁用物质。目前阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因3种卡因类化合物目前还没有标准检测方法，给行政执法及进出口贸易监管带来不便。因此，建立准确、快速、灵敏、易推广的化妆品中禁用的阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因标准分析方法对于化妆品的实际检测工作和产品质量控制十分必要。3 .主要工作过程起草阶段：标准立项前已经开展了卡因类化合物检测方法的文献
3、检索工作，分析比较了国内外文献方法的优缺点，优化了阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因的质谱采集参数、色谱流动相等液相色谱-质谱分析条件，并对液态水剂类、霜膏类、乳液类、固态粉类化妆品的样品处理方法进行了优化，形成草案。2023年3月项目立项后，为了考察方法的适用性，通过对不同基质、不同水平的加标回收试验对检测方法反复论证，考差了方法的线性、检出限、定量限、特异性、回收率、精密度等指标，并邀请长春海关技术中心、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心、秦皇岛海关技术中心三个实验室对方法进行实验室间验证，在此基础上于2024年3月形成了征求意见稿及其编制说明。4 .主要参加单位和工作组成员等本标准由天津海关
4、动植物与食品检测中心起草。本标准主要起草人：陈旭艳、马兴、章骅、赵孔祥、常春艳、李淑静。所做的工作:陈旭艳任起草工作组组长,收集相关标准,确立技术指标和相关检测方法，全面协调标准起草工作，并负责对各阶段标准的审核。起草组其他人员协助收集、分析国内外相关技术文献和资料、对指标和方法提出修改意见，参与标准验证、起草编写标准文本、组织起草小组会议、归纳分析反馈意见及建议、其他材料的编制等。二、标准制修原则和主要内容1 标准的制修原则本标准按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则和GB/T20001.4-2015标准编写规则第4部分：试验方法标准给出的规则起草，并
5、参考了国家食品药品监督管理总局发布的化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范。2 确定各项技术内容的依据卡因类化合物是临床常用的局部麻醉药，可能添加于晒后修复、祛斑、祛痘、去角质、去皱、抗衰老等化妆品中，以达到减轻疼痛等皮肤不适的作用，同时具有抗皱、抗衰老作用，但由于其具有中枢神经毒性和心血管毒性,化妆品中的卡因类化合物可以通过皮肤毛细血管被吸收并进入血液循环，对人体健康造成危害，欧盟化妆品法规明确将普鲁卡因等卡因类化合物列为化妆品禁用组分。我国化妆品安全技术规范2015年版将戊胺卡因、阿米卡因、贝托卡因、布坦卡因、对乙氧卡因、普莫卡因、辛可卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因10种卡因类化
6、合物列为禁用物质。目前，化妆品安全技术规范2015版理化检验方法2.23规定了普鲁卡因胺、普鲁卡因、氯普鲁卡因、苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、辛可卡因7种卡因类物质的液相色谱检测方法。SN/T4147-2015规定了化妆品中利多卡因、丁卡因、辛可卡因的标准检测方法。GB/T40895-2021规定了化妆品中丁卡因及其盐类的离子色谱标准检测方法。化妆品安全技术规范2015版禁用的阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因3种卡因类化合物目前还没有标准检测方法，给行政执法及进出口贸易监管带来不便。化妆品中布坦卡因的测定在现有文献中也没有检索到。因此，建立准确、快速、灵敏、易推广的化妆品中禁用的阿米卡因、布坦卡因、
7、普莫卡因标准分析方法对于化妆品的实际检测工作和产品质量控制十分必要。3 检测方法的建立3.1 质谱条件的优化3.1.1 质谱采集参数的优化阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因都属于极性化合物，在电喷雾离子源（ESI）下均有较高响应，因此选用大气压电喷雾离子源（ESI）在多反应监测（MRM）模式下对目标化合物进行分析。阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因浓度均为001gmL的混合标准溶液通过蠕动泵注入离子源，分别在正离子和负离子模式下进行全扫描，三个化合物均在正离子模式下响应更高，因此采用电喷雾离子源（ESD正离子扫描模式，在母离子扫描模式下确定了阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因的母离子分别为236.1、255.0
8、和294.1。在子离子扫描模式下，调节碰撞能量，扫描确定母离子产生的响应最高的23个子离子。在多反应监测（MRM）模式下，根据前面选出的母离子和子离子组建MRM离子对，对MRM离子对优化去簇电压和碰撞能量，从而获得响应最高的MRM离子对以及最佳去簇电压和碰撞能量。3.1.2 最终选定的质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI）；b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应监测（MRM）模式d）电喷雾电压：5500V；e）离子源温度：650；f）气帘气：40psi；g）喷雾气:55psi；h）辅助加热气：60psi;i）阿米卡因、布坦卡因和普莫卡因的质谱参数及其他参数见表1和表2。表1阿米
9、卡因、布坦卡因和普莫卡因的质谱参数化合物母离子（mz）定性离子（mz）定量离子（mz）去簇电压（V）碰撞能量（V）阿米卡因236.1114.185.0114.160601740布坦卡因255.086.157.086.180801746普莫卡因294.1100.0128.1100.090903528表2阿1米卡因、布坦卡因、普莫卡因中英文名称、CAS号、分子式、，相对分子质量和结构式中文名称英文名称CAS号分子式相对分子质量结构式阿米卡因amylocaine644-26-8CmH21NO2235.32布坦卡因butanilicaine3785-21-5Ci3H19ClN2O254.76Cl普莫卡
10、因Pramocaine140-65-8C17H27NO3293.40xxY3.2 液相色谱条件的建立3.2.1 流动相的选择对比了甲醇-0.K甲酸水溶液、乙脯-0.现甲酸水溶液作为流动相时阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因3个化合物的响应以及峰形。甲醇-0.1%甲酸水溶液和乙精-0.1%甲酸水溶液作为流动相时3个化合物的峰形都是对称的，但乙睛-0.1%甲酸水溶液作为流动相时3个化合物的峰高都略高于甲醇-0.1%甲酸水溶液作为流动相时的峰高，因此选用乙胞-0.现甲酸水溶液作为流动相。3.2.2 标准物质定容溶剂的选择阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因3个化合物在甲醇和乙脯中都有很好的溶解性，但乙晴作为定容溶
11、剂时阿米卡因、布坦卡因的色谱峰明显前伸，因此选用甲醇作为标准物质定容溶剂。乙脯或醉作为标准物质定容溶剂时阿米卡因和布坦卡因选择离子对色谱图见图1、图2。236 100/114 100标准物质定容溶剂：乙脂236.100/114,100标准物质定容溶剂：甲醇6.0e55.5e55.0e54.5e540e5S.35e5 1O 8 6 4 2 0 0 Oooc /2 Od & 42SdO甘 SU -注：1布坦卡因（359min）,2阿米卡因（3.7Omin）,3普莫代因（3.94min）图3阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因标准溶液（O.（MgmL）的MRM总离子流色谱图236.100/114.10023
12、6100/85.0003e6l5e6lle6le6le6l)e5l3e5le5l)e5l0.0je5e5e5OP6420Ooooco5OIIItt86424s3Sdo若SU8e5e5e5)e55050ZZ11SdOSU8三2.0253.03,5404.55.05.56.06.5Time,min5-ILOe4MoOO5255000/861004.5e54.0e53.5e5e5e5e5e5e5MO5O5OOno4l1Kus8SU-6.0e45.5e4255000/570005.0e445e44.0e43.5e43.0e42.5e420e41.5e410e45000.0o.oI-0.00.51.01
13、.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,mine6e6e6e6e6e6e6ee5e5e53.09e5Oe51.0 8 6 4 2 0 0 0 0 0 09 O22 111118642 8 8 s8su 294.100/100.000294 100/128 1000.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,min图6普莫卡因的标准溶液（O.OWg/mL）MRM选择离子色谱图3.3 提取溶剂的选择甲醇、乙靖以及甲醇或乙脯与水的混合溶液都是常见的提取溶剂。甲醇或乙月青与水的混合溶液作为提取溶剂时，霜膏类以及乳液类化妆
14、品的提取液粘稠，难以过滤；乙胞作为提取溶剂时，蛋白类物质沉淀效果最好，提取液过滤膜最为顺畅，但液相色谱-质谱检测时阿米卡因、布坦卡因的色谱峰明显前伸，因此最终采用甲醇作为提取溶剂3.4 基质效应的考察分别称取爽肤水、保湿乳、面霜、散粉、润肤油样品各1g,爽肤水、保湿乳、面霜、散粉样品经IOmL甲醇超声提取20min,润肤油样品加四氢吠喃3mL,涡旋振荡器使基质均匀分散后用甲醇定容至10mL,超声提取20min,各样品提取液于5000r/min下离心5min后的上清液经0.22rim有机滤膜过滤作为基质空白溶液。取6个5mL容量瓶，每个容量瓶中加入阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因浓度分别为0.3gm
15、L2gmL0.1gmL的混合标准工作溶液50pL,分别用爽肤水、保湿乳、面霜、散粉、润肤油基质空白溶液溶液和甲醇定容至刻度，混匀，各溶液中阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因浓度分别为0.003gmL0.02gmL.0.001gmL各溶液经液相色谱一串联质谱仪测定发现，各化合物在浓度相同的情况下在爽肤水、保湿乳、面霜、散粉、润肤油五种不同的基质空白溶液和甲醇溶液中的响应存在明显差别，即存在明显的基质效应。基质效应在液质检测方法中普遍存在，消除基质效应的方法主要是同位素内标定量法、基质加标标准曲线法及优化前处理方法。通过多种渠道都没有买到阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因的同位素内标，因此无法采用同位素内标定
16、量法消除基质效应对定量的影响。取爽肤水、保湿乳、面霜、散粉、润肤油样品的提取液2mL分别经过PSA、C18和HLB固相萃取柱净化，分别用净化后的基质空白溶液和甲醉稀释混合标准工作溶液，各溶液经液相色谱一串联质谱仪测定，各化合物在浓度相同的情况下在不同的基质空白溶液和甲醇溶液中的响应仍然存在明显差别，上述净化方法在不考虑回收率的情况下仍未能有效消除基质效应。最终采用基质加标标准曲线法消除基质效应对定量结果的影响。3.5 方法的线性分别准确吸取阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因混合标准储备溶液（阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因浓度分别为30gmL2gmL.10gmL）0.01mL、0.02mL、0.05mL
17、0.10mL、0.20mL、0.50mL,于IOmL容量瓶中，用甲醉定容，配制成混合标准系列工作溶液。混合标准系列工作溶液中阿米卡因浓度分别为0.03gmL0.06gmL0.15gmL.0.30gmL0.60gmL和1.50gmL;布坦卡因浓度分别为0.20gmL0.40gmLx1.00gmL2.00gmL4.00gmL和10.00gmL;普莫卡因浓度分别为0.01gmL.0.02gmL0.05pg/mL、0.10pg/mL、0.20gmL和0.50gmL3.0ngmL6.0ng/mL和15.0ng/mL；布坦卡因浓度分别为2.0ngmL4.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL
18、40.0ng/mL和100.0ng/mL；普莫卡因浓度分别为0.1ng/mL、0.2ng/mLs0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL和5.0ng/mL。按照上述色谱质谱条件对基质加标标准系列工作溶液进行测定，以定量离子的峰面积为纵坐标，以溶液浓度为横坐标作图，绘制基质标准工作曲线。阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因在不同基质中的基质加标标准工作曲线和相关系数见表4,阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因在不同基质中的相关系数均大于0.99,线性范围分别为0.3-15ng/mL,2-100ng/mL,0.1-5ng/mLo表4阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因在不同基质中的基质加标标准工作曲线和相关系
19、数化妆品基质阿米卡因布坦卡因普莫卡因爽肤水y=2.35104x-2.73104(r=0.9984)y=7.97x103X-5.03x104(r=0.9991)y=7.43x104X-3.37x104(r=0.9988)保湿乳y=6.43103x-7.IlxlO3(r=0.9988)y=8.78103x+9.15104(r=0.9972)y=2.21104x+2.17103(r=0.9979)面霜y=2.77104x-8103(r=0.9998)y=8.91103x+2.53104(r=0.9997)y=4.17104X-IxlO4(r=0.9999)散粉y=8.98104x-2.06104(r
20、=0.9998)y=1.02l04x-5.82IO4(r=0.9998)y=8.43104x-327104(r=1.0000)润肤油y=9.18104x-8.85104(r=0.9987)y=6.14103x+1.18103(r=0.9991)y=9.68104x-5.64104(r=0.9992)3.6方法的检出限和定量限在空白样品中添加一定浓度的阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因混合标准工作溶液，测定样品中各化合物信噪比，以信噪比SN=31为检出限（LOD）,信噪比SN=1O1为定量限（LOQ）,通过计算，并综合考察实际样品加标的情况，得到阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因的方法检出限分别为1gkg、
21、6gkg和0.3gkg,定量限分别为3gkg、20gkg和lgkg。3.7方法的准确度和精密度对液态水剂类、乳液类、霜膏类、固态粉类、油剂类化妆品分别进行1倍定量限、2倍定量限、10倍定量限三个水平加标试验，每个水平设6个平行，分析样品并计算每个样品中阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因的浓度。根据公式计算回收率（回收率=IOoX测得含量/添加水平)，并由每个水平6个平行样品测试结果计算相对标准偏差RSD。结果见表5、表6、表7。由表5可知，阿米卡因在3个不同添加水平(3gkg6gkg30gkg),5种不同基质中的平均回收率均在8L00%-119.17%之间，相对标准偏差在2.62%-9.09%之间：
22、由表6可知，布坦卡因在3个不同添加水平(2OiIg/kg、40gkg200gkg),5种不同基质中的平均回收率均在80.00%-119.50%之间，相对标准偏差在1.64%-8.65%之间；由表7可知，普莫卡因在3个不同添加水平(lgkg.2gkg,10gkg),5种不同基质中的平均回收率均在80.50%-119.50%之间，相对标准偏差在2.68%-8.39%之间。表5阿米卡因在不同基质化妆品中的准确度和精密度试验结果(n=6)加标基质加标水平(g)阿米卡因回收率(%)平均回收率(%)相对标准偏差RSD(%)123456液态水剂类3110.67110.3311633113.00118.001
23、16.00114.062.80690.0095.50102.1792.3399.5093.6795.534.783097.3392.3392.3388.0090.3395.6792.673.68乳液类3111.67112.33101.33113.00105.6798.33107.065.846106.00113.50115.83119.17119.00111.67114.194.3730107.67108.67112.67109.3399.3398.67106.065.39霜膏类3106.00106.33110.0097.33104.00111.00105.784.63697.1798.001
24、02.5094.6789.8399.6796.974.503091.6798.6796.3396.0091.0098.0095.283.38固态粉类3102.3390.0084.6784.0082.3381.0087.399.09696.00101.83103.5091.0090.50100.8397.285.8030108.33101.33102.67105.33107.67106.00105.222.62油剂类3J11.3399.3394.6798.3393.6789.3397.787.716109.67105.67106.50111.50102.0090.50104.317.213()9
25、3.3385.6795.0086.3385.0081.3387.786.00表6布坦卡因在不同基质化妆品中的准确度和精密度试验结果(n=6)加标基质加标水平(g)布坦卡因回收率(%)平均回收率()相对标准偏差RSD(%)123456液态20118.00116.50119.50118.00116.00114.00117.001.64水剂40103.00102.75107.25103.00105.50104.50104.331.71类200100.0094.0092.0098.0092.0099.5095.923.85乳液2089.0098.5085.5093.0091.5092.5091.674
26、.74类4080.0082.2584.7583.2593.7583.7584.635.62200111.50113.50108.50110.00104.00106.00108.923.23霜膏类2088.0095.5090.0083.0088.0095.0089.925.274095.2594.7596.2589.5085.2597.0093.004.9720098.50102.5098.50103.0092.50103.5099.754.20固态粉类20118.00110.50104.50106.5099.00104.00107.086.0940107.75111.50115.75101.0
27、099.75110.50107.715.80200110.00102.5099.50106.50105.50106.50105.083.46油剂类2086.5091.0092.5095.0088.0092.5090.923.474085.5084.0089.0086.7581.50103.0088.298.6520094.5089.00102.00105.0095.00100.5097.676.02表7普莫卡因在不同基质化妆品中的准确度和精密度试验结果(n=6)加标基质加标水平(gkg)普莫卡因回收率(%)平均回收率(%)相对标准偏差RSD(%)123456液态水剂类1113.00109.00
28、118.00115.00116.00114.00114.172.682100.50100.50106.50106.00107.50106.50104.583.0610111.00101.00102.00104.00101.00108.00104.503.96乳液类187.20113.00107.00102.00102.00105.00102.708.392119.50113.50119.00110.50118.00112.50115.503.30IO95.00108.00112.00109.0098.0095.00102.837.47霜膏类1111.00117.00115.00104.0011
29、4.00119.00113.334.692103.50106.50114.00102.5099.50108.00105.674.791091.9097.5096.6095.1090.1099.0095.033.60固态粉类1115.00112.00110.00113.00108.00106.00110.673.012107.50113.50112.50101.00100.00110.00107.425.361096.2096.00102.0098.10106.00108.00101.055.07油剂类1110.0099.0098.0091.00100.0092.0098.336.95293.0
30、091.0091.5095.0087.5089.0091.172.96IO88.4083.0091.4081.4081.4080.5084.355.313.8 方法的特异性为了验证方法的特异性，分析液态水剂类、乳液类、霜膏类、固态粉类、油剂类化妆品五种代表性空白样品，检查在阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因出现区域是否有干扰(信号或峰等)，然后在代表性空白样品中添加一定浓度的目标化合物，看其是否不受干扰具有典型分离。五种代表性空白样品在定量限浓度加标样品选择离子色谱图见图7-图II.2.2e42.0e418e41.6e41.4e4&1.2e41.0e4三8000.06000040000200000.
31、04.5e44.0e43.5e4S3.0e425e4f2.0e41.5e41.0e45000.00.022e42.0e418e41.6e41.4e4g.1.2e41.0e4I800006000.04000.02000.00.00.236,100/114,100I255.000/86.100294,100/100.00000：51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,min1.7e41.6e4.1.4e4236,100/114,1001.2e410e4800006000.04000.020000S8-SU9W-o.o3.0e52.8e526e52.4e5
32、2.2e520e518e51.6e51.4e51.2e51.0e58.0e46.0e440e42.0e40.0255,000/86.1002.8e42.6e42.4e422e42.0e41.8e41.6e41.4e41.2e41.0e4800006000.04000.020000294100/1000000.0j0.00.51.01.52.02.53.03.54Time,minO4.55.05.56.06.53.3e45000.00.0236.100/1141000e45e4.0e45e40e45e40e45e40e45e40e45e40e47665S443.3.2211sdxllsu(D三2
33、55000/86100Sd2su9W-5000.01.5e41.4e413e412e49000.08000.07000.06000.05000.04000.030000294100/100.0003.03.54.04.55.05.56.06.5Time,minSd。su-1.4e513e512e51.1e51.0e59.0e48.0e470e46.0e45.0e44Oe43.0e42.0e41.0e40.0236.100/114.100S8,SU8-6.0e45.5e450e445e44.0e43.5e43.0e42.5e420e41.5e41.0e45000.00.0255000/86100
34、5.5e45.0e4294.100/100.0004.5e440e43.5e43.0e42.5e420e41.5e41.0e4500000.00.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,minTime,minSd2sueW-sdzsu里U-sd。名SU813.9 稳定性3.9.1 日内稳定性称取1.0Og空白样品(面霜)于15mL带刻度离心管中，加入0.1mL混合标准工作溶液(阿米卡因0.30pg/mL、布坦卡因2.00pg/mL、普莫卡因0.10gmL),加入甲醇8mL,涡旋振荡器1min使基质均匀分散,用甲醇定容至10mL,在超声波水浴内超
35、声提取20min,混匀，于5000/111也下离心5111皿，上清液经0.22klm有机滤膜过滤，滤液4C保存，每间隔4小时进行1次液相色谱一串联质谱仪测定，比较各化合物的峰面积考察阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因在空白样品中的日内稳定性。日内稳定性测定结果见表8-表10。表8阿米卡因的日内稳定性时间(h)04812162024RSD(%)峰面积8.12IO57.9l1058.131057.791057.581057.931058.08lO52.53表9布坦卡因的日内稳定性时间(h)O4812162024RSD(%)峰面积1.841061.791061.861061.731061.831061.7
36、71061.871062.83表10普莫卡因的日内稳定性时间(h)O4812162024RSD(%)峰面积3.92lO53.961053.751053.931053.88IO53.781054.03lO52.543.9.2 日间稳定性将上述样品考察日内稳定性的样品于4C保存，连续测定3天，计算峰面积相对标准偏差，考察阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因在空白样品中的日间稳定性。日间稳定性测定结果见表H-表13。表11阿米卡因的FI间稳定性时间(天)O123RSD(%)峰面积8.121O58.O8lO57.69lO57.441054.16表12布坦卡因的口间稳定性时间(h)O123RSD(%)峰面积1.
37、841061.871061.691061.751064.62表13普莫卡因的日间稳定性时间（h）O123RSD(%)峰面积3.921054.03lO53.781053.631054.523.9.3 标准品保存实验标准储备溶液在4C下避光保存，分别在1个月、2个月、3个月后取出部分溶液，稀释成标准工作溶液（阿米卡因3.0ng/mL、布坦卡因20.0ng/mL、普莫卡因1.0ngmL）,并用新配置的标准工作曲线定量，计算回收率，考察阿米卡因、布坦卡因、普莫卡因标准品的稳定性。标准品稳定性结果见表14。表14标准品稳定性时间（月）123RSD(%)阿米卡因98.3%104.3%102.7%3.04布坦卡因102.0%97.5%104.5%3.50普莫卡因98.7%97.9%103.0%2.754、解决的主要问题本研究通过优化目标化合物的色谱分析参数，以及对不同类型样品的前处理方法进行摸索，最终建立了一套标准性的检测方法，解决的主要问题包括：（1）确立了液相色谱仪的检测参数，包括色谱柱、流动相的选择；（2）确立了质谱的采集参数，包括离子源、检测方式，气源参数、化合物锥孔电压和碰撞能量等参数；（3）确定了前处理方法，包括萃取溶剂、提取条件和净化方式的考察；（4）完成了方法学的考察，包括线性范围、方法检出限
