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1、ICS65.120CCSB4651Mi中华人民共和国国家标准GB/T438102024饲料添加剂淫羊量提取物中黄酮醇昔的测定高效液相色谱法Determinationofflavonolglycosidesinepimediumextractasfeedadditive-Highperformanceliquidchromatography2024-03-15发布2024-10-01实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会前言本文件按照GBT1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扭识别专利的责任。本
2、文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。本文件起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、中国医学科学院药用植物研究所、天津博菲德科技有限公司、湖南农业大学、北京爱绿生物科技有限公司、中国农业科学院饲料研究所。本文件主要起草人：张军民、张会艳、赵背余、汤超华、秦玉昌、郭宝林、邓雪奶、曾建国、姚浪群、张晶晶、刘秀斌、郭晓青、谷旭。饲料添加剂淫羊蕾提取物中黄酮醇昔的测定高效液相色谱法1范围本文件描述了饲料添加剂淫羊蕾提取物中黄酮能苗的高效液相色谱测定方法本文件适用于饲料添加剂淫羊旅提取物中5种黄酮醇甘（淫平甘、朝董定A、朝董定B、朝董定C和宝董甘I）的测定。本文件中淫羊蕾
3、普测囊定期指定B,朝指定C和宝蕾昔1定角限均为2gkg.2规范性引用文伸下列文件产的内容通题文中的规范件引用面构成本交种必不可少的系款。其用，注目期的引用文件，仅该日期厨应间版本适用于不文件，不注U期的重文件，其最新版本（包提所有的修量单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规据和试验级GB/T20195动物饲试样的制备3术语和是义本文件漫有需要界定的本语和定4原理试样中的黄酮离昔用甲醇溶液提取.高效液相色谱仪测定，外标法定量5试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.1 水；GB/T6682,一级。5.2 甲醉：色谱纯。5.3 乙精：色谱纯。5.4 70用甲醇溶液：量取700m1
4、.甲醇（5.2）于100om1.容量瓶中，加水定容，混匀。5.5 标准储备溶液（2mgm1.）:准确称取淫羊董首（CAS:489-32-7,纯度296%）、朝雷定A（CAS:11062372-8,纯度295%）、朝蕾定B（CAS:110623-73-9,纯度295%）、朝蕾定C（CAS:110642-44-9,纯度N95%）、宝董昔I（CAS:113558-15-9,纯度N95%）各20mg（精确至0.Olmg）,分别置于10m1.棕色容量瓶中，用甲醇2）溶解并定容，混匀。78C以下保存，有效期3个月。5.6 混合标准中间溶液（200mg1.）:分别准确移取标准储备溶液（5.5）各Im1.于I
5、om1.棕色容量瓶中，用70$甲醇溶液4）定容，混匀。于2C10C保存，有效期3个月。5. 7混合标准系列溶液：准确移取适量混合标准中间溶液（5.6）,用70%甲醇溶液（5.4）配制成质量浓度分别为0.5mg/1.、5mg1.Iomg/1.、20mg1.50mg1.s1OOmgZ1.和200mg/1.混合标准系列溶液。临用现配。5.8微孔滤膜：0.45urn,有机系。6仪器设备6. 1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。7. 2分析天平：精度0.1mg和0.Olmg。6.3超声波清洗器。6. 4离心机：转速不低于4000r/mino6.5涡旋混匀器。7样品按GB/T20195制备
6、样品，至少200g,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛，充分混匀，装入密闭容器中，避光保存，备用。8试验步舞8.1 提取平行做2份试验。称取0.25g试样(精确至0.Img),置于50m1.离心管中，加入30m1.70%甲醇溶液(5.4),涡旋混匀1min,超声提取10mino于4000r/min离心5min,将上清液转移至100m1.容量瓶中，残渣再用30m1.70%甲醉溶液(5.4)提取，重复上述操作，合并上清液，用70%甲醇溶液(5.4)定容，混匀。移取适量提取液，4000r/min离心5min,用微孔滤膜(5.8)过滤，备用。宜20h内上机测定。8.2 色谱弁考条件色谱参考条件
7、如下：a)色谱柱：Cg柱，柱长250mm,内径4.6mm,粒径5nm,或性能相当者b)流动相：A相为水(5.1),B相为乙脐(5.3),梯度洗脱程序见表1;c)流速：1n1.min;d)柱温：30;e)进样量：20U1.D检测波长：270nm(.1梯度洗脱程序时问minA相/%B相/%07525157525237030334852表1梯度洗脱程序(续)时间!minA相/%B相/%4048524175254575258.3 测定8.3.1混合标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下，分别取混合标准系列溶液(5.7)和试样溶液(8.1)上机测定。淫羊蕾背、朝薇定A、朝蕾定B、朝蕾定C和宝霍普I
8、混合标准溶液的高效液相色谱图见附录Ao8.3.2定性在相同试验条件下，试样溶液中淫羊微昔、朝蕾定A、朝蕾定B、朝蕾定C和宝蕾昔1的保留时间应与混合标准系列溶液(质量浓度相当)所对应组分的保留时问一致，其相对偏差在2.5%之内。8.3.3定量分别以淫羊微音、朝薇定A、朝蕾定B、朝蕾定C和宝蕾首1的质量浓度为横坐标、对应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其线性相关系数应不低于0.99。试样溶液中待测物的质量浓度应在标准曲线的线性范围内，如超出范围，用70%甲醇溶液(5.4)稀释后重新测定。单点校准定量时，试样溶液中待测物的质量浓度与标准溶液质量浓度相差不超过30%。9试验数据处理试样中淫羊薇背、
9、朝蕾定A、朝蛋定B、朝靠定C和宝蕾背1的含量以质量分数w,计，数值以克每千克(gkg)表示。多点校准按公式计算；单点校准按公式计算：m100O(1)式中:w,试样中待测组分i的含量，单位为克每千克(g/kg)；P：从标准曲线查得的试样溶液中待测组分；的质量浓度，单位为毫克每升(mg1.);V试样定容的体积，单位为亳升(m1.);m一试样的质量，单位为克(g);1000换算系数；n超出标准曲线范围后的稀释倍数。A,XVA.mI000(2)式中:w,试样中待测组分i的含量，单位为克每千克(g/kg);A;试样溶液中待测组分i的色谱峰而积；P标准溶液中待测组分i的质量浓度，单位为毫克每升(刖)；V试
10、样定容的体积，单位为亳升(m1.);Ao一一标准溶液中待测组分i的色谱峰面积；m一试样的质量，单位为克(g);1000换算系数；n一一超出标准曲线范围后的稀释倍数。测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。10精密度在重复性条件下，含量lgRg时，2次独立测定结果与算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的7%;含量Nlgkg时2次独立测定结果与算木中陶幅的绝对差值不大于该算术平均值的5%。附录A（资料性）5种黄酮解昔混合标准溶液液相色谱图5种黄酮醉背混合标准溶液的液相色谱图见图A.1。12345678910Il121314151617181920212223242526272829
11、3031323334353637383940Vmin标引序号说明：1 朝番定A;2 朝覆定B;3 朝蕾定C；4 淫羊薇背；5 宝霍甘1。图A.15种黄丽静昔混合标准溶液(50mg1.)的液相色谱图MogIlUl8ZPI/Nd中华人民共和国国家标准饲料添加剂淫羊聋提取物中黄祠Il昔的流定高效液相色谱法GB/T438102024中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号（100O29）北京市西城区三里河北街16号（100O45）网址总编室：（OlO）68533533发行中心：（010）51780238读者服务部：（OlO）68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销开本880X12301/16印张0.75字数12千字2024年3月第一版2024年3月第一次印刷GB/T43810-2024书号：1550661-75426定价29.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：（Olo）68510107
