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1、ICSI1.020CCSC50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T4132024代替WS/T413-2013血清肌酊参考测量程序同位素稀释液相色谱串联质谱法Referencemeasurementprocedureforse11mcreatinine-Isotopedilutionliquidchromatographytandemmassspectrometry2024-05-09发布2024-11-01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布刖百本标准为推荐性标准.本标准代件WS4I3-2O13寸血清肌好参考程序同位素林锋液相色谱串联麻诺法3,与WST413-2013相比,除结构调整和编
2、辑性改动外,主要技术变化如下：增加了“参考物质”、“有证参考物防”“基质效应”的定义（见3.3、3.4、3.5）;一一更改了“互换性”的定义（见3.6,2013年版的3.3）;一一增加了试剂的CRS编号（见5）:一一更改了仪器技术参数的要求（见6,2013年版的6：一一增加“分析可兆性”相关内容并调整条款的陋序（见11）;一一增加了“质St保证”的要求（见16）：一一增加了冏录A.1,列出了典型顺谐条件参数（见附录A.D.本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负货技术审查和技术咨询,由国家卫生健康委医疗管理服芬指导中心负贡协两性和格式审式，由国家R生健康委员会医政司负费业务管理、
3、法规司负责统筹管埋.本标准起草单位：北京医院/国家卫生健康委临床检脸中心、中国医学科学院北京协和医院、民航总医院、首都医科大学的M北京同仁医院、上海交通大学医学院附国仁济医院、西安交通大学第一附屈医院、郑州大学第一附属医院.本标准主要起草人：张传宝、张天娇、陈文祥、赵海建、邱玲、王学晶刘向祐、李敏、王晓琴、郭书忍。本标准于2013年首次发布.本次为第一次修订.血清肌酊参考测量程序同位素稀释液相色谱串联质谱法1本标准规定rm滔肌僚参考测地理序同位素稀弹液相色谱；卜联防谱法的技术设点和侦讨要求“本标准适用于开根成清肌好参考测量的实险室.2艘重性引用文件卜列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标
4、准必不可少的条款.其中.注口期的引用文件.仅该H期对应的版木适用于本标准：不注R期的引用文件，其用新版本（包括所有的修改单）适用于本标准，GB/T19702体外诊断医疗器械生物源性样品中业的测术金考测班程序的表述和内容的要求GB/T33087仪器分析用高纯水规格和试的方法JJFH35化学分析测量不踊定度评定3术语和定义下列术语和定义适用于本标准,3.1referenceBeasureamtprocedure被接受作为提供适合卜.列预期用途得刈疑结果得测量程序，预期用途包括评价测量同类域的氏他测量程序测得量值的测fi正制度、校准或参考物侦赋值“注1：参考测量程序的作用参见ISO1751IflHS
5、O18153,注2MJSO术语中，正确慢与偏倚、系统效应和系统设若行美,精密度与标准差、随机效应M微机送笔有关，而准晰度与正确度（与其有关的）和精密度有关。注3:术语“麟瑞僚断”以在作为更高三测量程序榭里解来源：改编自ISO/iEC则99-2007,定义2.73.2计M性traceability通过文件规定的不间断的校准链将测瞅结果与参照对象联系起来的特性，校猴燧中的他项校准均会引入测玳不确定度。:来源：ISO/IEC指向99:2007,定义2.4.1&34ftreferencenatrial一种或多种指定特性足够均匀和稳定,已被证明适合在测fiI程中或名义特性检验中预期应用的物质.注：预期用
6、包括校准、给其他物/定位工物IJ做旗si保证物版等.来源：GB/T29791.12013,定义3.583.4WS4MIcertifiedreferenceaatrial附有由权或机构发布的文件.提供使用有效程序获得具不确定度和溯源性的一个或多个特性量值的金考物质。来源:改编自ISO/IEC导则99-2007,定义5.M3.5aatrixeffect除待测物以外样品特性对按特定测fit程序测定待刈物及其推低的影响.注：对质谱分析技术，基质效应指标本中除恃测物以外的其他成分对分析方法测f能力的T51，来源：C1.SIEPl4-A3.1.4.23.6互换性Cooautability参考勘侦的属性，指
7、按两种给定测收程序对此物质的指定M所获测量结果的关系与对其它指定物鲂所获测业结果关系的过程度注1:所述参梯顺通常为校4倒,其它指定物版通常是常现样M注2：互换性.仃时刑钉上通性均为oOmngbiW的中译文，注3：临床检检领域梦朝倾的。划性,通常指用不同测量过程淞肺亥物麻时,各测吊诩物I榭果之间的数字关系，与用这观测il程溯做际储床样品时测V结果的弥卜关系的,致利外即该拗贞理化性HS与实刷蹦尚济椒相脱I来源：GB/T29791.1-2013,补充定义和分析术语A.3.9）4酒现和方法本标准建立的血清肌酊参考测况程序以同位素硫释质谱法为测量原理，以税定同位素标记的肌肝为内标添加至血清中，内标与血清
8、均匀混合后用无水乙酢沉淀蛋门石,：.孤甲烷冷化上清液，液相色谱出联质谱分离和测量血清肌酊和内标特异的母离子和子离子，根据肌酊和内标峰面积比计算血清肌肝浓度.5WA5 .I水（01:除非布特别说明，应使用GB/T33087定义的仪器分析用高纯水，5.2 无水乙醉（CH,CHOH）:CAS64-17-5.色清纯“5.3 三就甲烷（CHCl3）：CAS67-66-3,色i杪纯.5.4 乙酸钺（CIIC（X）MI.）:CAS631-61-8,纯度299%”5.5 光级钠（NaNJCAS26628-22-8,分析纯.6 口!6.2 液相色谱.联系统液相色谱串联防谱联用系统应满足以下要求：U）高效液相色谱
9、仪或超高效液相色谱仪：b）TK四极杆小联质诣仪，阳有电喷雾离子海（FSI）,各项参数指标符合正常工作的要求（见本标准笫8.I.1条）6.3 液相色诂柱液相色谱柱应涌足以下要求：a）具有极性官能团嵌入或海基封尾的储键合色诣柱，在含水Iit高的流动相中具有良好的稳定性和型现性;b）规格为内径2.0mm-2.1mm.粒径3um5m,柱长15Qlnmc）实验室也可使用其他规格的色谱柱,使用前应进行参考测电程序的确认（见本标准第13章），证明所用色语柱湎足参考测Sft程序分析可常性的要求（见本标准第Il章）。示例：使Jl及小粒径3m柱长为50mr-KI）nrfJ色沿柱.6.4 天平十万分之一天平（最小分
10、度001mg）,每年至少进行一次校准，具有校准报告.&4Mba水平转头离心机.离心力椅不小于1500g.6.5 旋涡式*R适用于安瓶、试管等的施涡式混合装置.6.6 触焦吹干（氨吹仪）将氮气吹入通过干热方式加热样品的衣面进行样品浓缩的装置，不宜使用水浴加热。.6.7 *丽经校准合格的微量可询移液涔两支,规格分别为100u1.-1000U1.和201.-200U1.6.8 血砒匀适用于安瓶、密封瓶等的血液混匀袋也.&9安或试管规格5ml.试管应配。聚四纸乙爆密封塞.安甑应配有融封袋置，6.10 宙度计用于刈量血清密度.7 W&7.1 M本多考测砥程序适用于新鲜、冰冻或冻干血清样品的肌酊浓度测出,
11、应将样品视具有潜在生初传染性样,按照国家牛物安全法及相关法律法规来取防护措施，对废物进行妥善处理。7.2 样品取样量样品取样暖应根据肌好的浓度确定，一般用M为01m1.-04m1.（见本标准笫8.3.1条和第8.3.4条）.为保证取样量的准确性和操作可行性，最小取样破不应低于0lml.7.3新鲜血清样本若不立即测崎，应冰冻保存。-TOC以下，可保存1年以上，-20C保存，不可超过3个月。冰冻血清样本使用用应置2C8,C0.5h后在室温下融解，充分混匀后使用。冻干样品应按照说明书描述的使用期限和条件保存.临用前按照说明书复落,充分混匀后使用.8丽感由分析样品的濯备8.1 液相色谱.取Itm用系统
12、的准备8.1.1 MtMa*测盘前应时质谱系统进行性能检查,包括：a）最近3个月内进行过校准,符合制造商声明的正常工作的要求：b）装配电唳雾离子源，运行正常；C）真空度达到正常工作要求的范围.辅助气体纯度和流量符合制造商出明的正常工作的要求.8.1.2 液相系统准备测限前应时液相系统进行准备.包括：a）流动相准四：纯水，乙酸饯水溶液5mmol1.,pH=5.5）;b）色讷柱的平衡：用流动相（见木标掂第9.2条）冲洗色谱柱约3O4O倍柱床体积，直至色诣柱达到平衡.8.2 校准溶液的备an-ftWttX4I应使用国际检胎医学溯源联合委员会（JCT1.M）认定并收录或权威参考物质研究机构研制的级有证
13、参考物质（纯度标准物质）为血清肌肝检测参考测限程序的校准物.一级有证参考物质的使用、保存及使用期限应符合研制机构提供的证修。示例；日本”货朋究院有证参考抗WlJCl三,美国国家标准M肢术研究院有证参者沏质MSSW91h8.22 同位It标记内标应使用移定同位素标记的化合物为血清肌酊检测参考测用程序的内标。标记的稳定同位素个数应不低于3个，标记同位素丰度95%。内标的使用、保存及使用期限应符合制造商提供的产品证书或使用说明书.8.23 校准溶液的配本法使用包括法（BraCkCtingMethod）校准.用重量法制备肌酊一级有证参考物痂（见本标准第8.2.I条）的水溶液为校准溶液,添加0.1%笈氮
14、钠为防,腐剂.配制浓度的为0.10mg/g的校准溶液用于肌肝浓段大于200UlnO1.样品的测OH简称为校准溶液1）：呢制浓度约为0.（Hmg4的校准溶液用于肌肝浓度小于200m.赫iWn.,2l17-89.典用的Ul酊一级和二级册请令为描例调图等X1.附录A,9.3.2辅助气体、裔子源条件叁数的设置调整辅助气体、离子源条件等军数的设置，使肌肝和内标色谱峥的信映比达到最佳。示例：典型的肌酊IJCTR%离子源条件多数设附多见水标准附录A。9.4分析过程9.4.1分析系列姆个样品与其对应浓度水平的校准溶液（即低标和商标）同一批测量,其中肌肝浓度大于200mol1.的样品使用低标1和高标1,肌肝浓度
15、小于200Unol1.的样品使用低标2和高标2,按照样品正序、逆序.正序的次序将每个样品至少重复测量3次.9.I.2原始数据的有效性检杳3次重发测埴所得肌酬和内标的峥面枳比的变异系数目Wlk10数据处理10.1 原始数据符合本标准第9.4条要求的3次重女泄J室结果的均值为样品测录的原始数据。10.2 测量结果的计算使用包括法计豫血清肌ST浓度,计算公式如下：(U*WmT)I1,一)X弊XDSXPMX翳(0式机C血清中肌肝的浓度,单位为微摩尔短升（UmM1.xIs样品中肌肝与内标的嶂面积比（测量值）:1. 低标中肌肝与内标的峰面枳比（测量值）；I高标中肌舒与内标的峰面积比（测址值）；W低标中肌肝
16、与内标的含埴比：W诲标中肌酊与内标的含量比：Qs血清样品中内标的含贵,单位为微克（g）:M一血清样品的质崎，的位为克（g）;Ds血清的密度：P校准品的认定纯度（由有证参考物质的证书提供）；113肌肝的相对分子质G1.10.3 换算公式推荐以国际单位微摩尔每开（Hmtl1.）表示血清肌好的测量结果，也可根据临床应用需要，使用*11（mg,d1.）为单位龙示,换算公式为：umoll,1.0.0113=ms,d1.11分析可性11.1 分析爨本标准燃定的血清肌Bf参考测盘程序不受样品溶血，而血用、高朋红索、JJi尿素等因索的影响，11.2基质效应不应对测量结果的准隔度产生影响.宜通过提取添加试验评估
17、（质谱）茶质效应对参考测量程序的影响.注：楣帔加试的的设计和实施过程见本标准金考蝴.11.3 回收”将一级有证参考物质（见本标准第8.2.1条）定量地渗加至得漓血清中,混合均匀.用一贵程序漓出添加前后的肌Bf浓度.计算方法的加样回收率.加样回收率宜在（1002）%葩国内.11.4 H量幡宙度应对样品进行Ift史性测13评估参考测量程序的前密度，包括批内试的和批间试验，测收结果的批内和批间不WI宓度均应W2%.推荐的精密度试验方案如下：a）准备足以的用于精密度试脸的样品,包含至少三个浓度水平，依盅测批他眼的高、中、低水平：b）精宓度试验应至少进行5个独立的分析批的重复测I匕O鹤个分析批应分别在独
18、立的工作H进行，每批旬个浓度水平洌盘3份平行样品，禄份样品应进行独立的内标混合和样品前处理程序：d）根据触个分析批批内和各分析批批间的数据，计算批内和枇间变异系数.注1:宜使用患力混合血清作为精密度试聆的样枯.注2:可根据需要按照其他合理方案通案样品的浓度水平、平行样品份数和分析批批数.11.5 0出*本测量程序的检出限与1.C-MS/MS系统的性能杓关.应保证参考测盘程序的桧出限满足预期用途的饕求.11.6 M下*和上座木测球程序以包括法为定址方法，其测能下限和上限与样品取样量（见本标准第7.2条）有关.应保证参考测稗序的测量下限和上限满足便期用途的K求。it?am*证9*测加国际检验医学渊
19、源联合委员会（JCr1.M）认定并收录或权威参考物质研究机构研制的Ii1.清肌肝有征参考物质，所得结果应在修考物所（认定值土不确定度的范附之间.不应将同一种有证忿考物质同时用于校准和正确度收证.示侪国家卫生健康委鞫床检验中，帏证参考物质GB09171c、哪75c和哪09176c,中国计Ift科学研究院外证参考物榜G81颂70和GB*091”，美国国家标准和技术研窕院（NIsrl行证参考物质SRM（X）大和SRM967a。11.8 实Ift何比对陶仃计划地进行实验室间比对.测珏结果应满足所参加实验室间比对活动规定的要求.示例给加由国闲标床化学和检验佚学联合会UHO和蛙困临床化学与检吩俣学学会（D
20、GKD共上呦炭t的坏财比对试彷（RE1.AI由国家卫生健康副麻枪蛉中心（NCC1.）祖织的医学梦考实险室健力验证计划（BQAR1.）等.12.1寓不一定度制分析本标准规定的参考测届程序以同位素柿择质谱法为测依原理，以包括法为校准方法.使用:曳属法用制和混合校准溶液内标溶液和样品.本测盘程序的A类不确定废主要来源为样品的揖更测量.B类不确定主要来源为校准物的纯度、校准溶液和内标的旭制、校准溶液和内标溶液的混合、样品与内标溶液的混合和血清密度的施“t122解量不础加州算椒据JJFll35和本标准第12.1条中不确定度主要来源计亢标准不确定度（u）.以包含因子k为2,计算扩展不确定度（5与相对扩展不
21、确定（Um）.应保证参考测最程序的测状不确定度应符合其预期用途的要求，U宜W2M13限制当样品肌酊浓度大于850moVIJ,所能取样量低于0ml-不满足本标准最小取样显的要求.可适当增加样必取样垃运到达最小取样玳嘤求,同时增加内标溶液的抑入优使该样品中所含肌斑与内标的质Ift比仍保持约为1：1.1.CMS,MS分析前将样品用流动机进行适当地稀择,使其保持与其他样品一致的浓度水平，示佛样品H嗝沏发约刈曲Inni1.取该加竹约Q15m1.称小得其精确团也加入C12ni度为QIOn碑的内标溶液，称虫得其精确侦状，混匀，按照本标准泗3条进行样品就处理，1.oMSMS分析而将杆吊稀样曲，设定进杆体初如U
22、1.f视高标1秘氐标祚极瓶冬海14实验室应按照本标准和GB/T19702的要求对所运行的参考测肽程序进行确认以表明其符合预期用途并制定标准操作程序。确认应尽可能充分以湎足血清肌肝辔考测段和量假溯源的需求。用于确认的技术应包括但不限于；a）对测盘程序的分析影响地（见本标准笫11.1条）、基阳效应（见本标准第11.2条）、回收（见本标准第11.3条）,测此精密度（见木标准第UJ条）、检出限（见本标准笫11.5条）、定Jd下限和上限（见本标准第11.6条）等影响结果因素的系统评估：b）与其他加清肌酣参考测量程序狭解结果的比对：O使用参考物质进行的性能确认（见本标准第11.7条）d）实验室间比对（见本
23、标准第11.8条）：e）基于对方法荔础理论的科学理解和实践经脸进行的测埴不确定度的评估（见本标准第12章）。15报告测后报告应包括但不限于如下分析信息：a）样品的类型、来源和保存条件，冻干样品应同时报告或溶的过程；b）所用参考测量程序的名称和原理：O所用参考测盘程序的计录学溯源性，包括-级有证参考物质的来源、名称和认定伯，校准溶液的制备方法，用于校准溶液配制及样品与内标混合的天平的校准信息等；d）血清肌好浓度的测盘结果和单位.数值应保留4位有效数字：e）测量不确定度的表述：D适用时，报告用于正确度验证的有证叁考物质的来源、名称和认定值，g）适用时，注明用本标准规定的参考测量程序测定质控品和校准
24、品等制需物的肌肝浓度，其结果不能直接用于肌酊常规测定方法的校准，需考察制备物的?1.通性对肌肝常规测定方法的影响.16MAS实验室椀制定型内质fit控制的程序、规则和文件记录的要求.应保证称次参考测业的分析过程至少进行一次室内质收捽制程序并保存相关记录.所测量的室内筋控品应根据样品浓度范树至少选择2个代表性浓度水平,与样品在相同条件卜进行前处理和1.C-MS/MS的测量。16.2实M比对实蛤空应制定实验空间比对（见本标准第11.8条）的程序、规则和文件记录的要求。当实验室同比对的结果为不满懑时，应采取相应的纠正措施，验证措施的有效性，井保存相关记录。附录A（资料性）典型质造条件麴效A-I典型宸
25、子源条件参数表A.1典型离子源条件参数阳子海辅助体参数电Hi参数其他参数ESI喷雾气70jsi去耗电用52V辅助加热气温度600C雾化箱肋加热气60psi入U电压10V气帘气20psi出口电压12V城接能量18eV硅描气5psi喷雾由BE4500V根据所用仪器不同,阳广源条件需欲有所不同.翁致设直以僦优化离产化效率为原刖.A.2典型肌酊一级和二级质谱全扫描图图A.1肌饵一级质诺全归描图IOrv三M呐91wozvvsa考文献UJ张天娇，赵海视，张传宝，等.【可位素稀样液相色港申岷质谱法测血清肌酊.中华检裟医学杂志.2009,32(5):509-514.2StokCSP1ConnorG.Dcvcl
26、opmcntofaliquidchromatography-massSpcctromctiyInCth(Kiforthehigh-accuracydeterminationofcreatinineinserunJChnwnalogrBAnalytTechnolBioed1.ifeSci.2003,794(1):125-136.3MatUSZeWSkiBK1ConstanzcrM1.Chavcz-EngCMStratcgiesfortheassessmentofmatrixcllectinquantitativebioaullicalmethodsbasedonHP1.C-MS/MS.AnalC
27、Thcni.2003,75(13):3019-3030.4张传宝，陈忠余，马味，等.曲清肌舒测埴域质效应的研究.中华检脸医学杂志，2009,32(5):515-520.5IFCCExiernalqualityassessmentschemeIbrreference(calibriUion)laboratoriesinlaboratorymedicineprocedures.Website:hltp:/www.dgkl-rtb.de:81/.6ISOI5I93Invitrodiagnosticmedicaldevices-MeaSUrementofquantitiesinsamplesofbio
28、logicaloriginRequireinetnsforcontentandpresentationofreferencemeasurementProcedures-IntcrnalionalOrganizationForStandardization,2(X)9,Switzerland.7JointCommitteeforTraceahilityinIuiboratorjrMedicine1PREAMBI.E(2004)Vebsite:httpwww.bipm.ofg81JointCommitteeIbrTraccabilityin1.iiboratoryMcdicinc,WorkingG11upII,ProcedureManual.Wcbsitcihttp:,7-uw.bipm.org.9Clinical1.aboratoryStandardsInstitute(C1.Sl).1.iquidChromatography-MassSPeCIromeIryMe(hods2)Edition.C62.2022.
