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1、血、尿液尿素氮（BUN）测定1 .实验原理VitrosBUN/UREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。将一滴患者样品滴于干片上,分布层会使之均匀地分布。水和非蛋白质成份进入下面的试剂层，与尿素酶反应生成氨。半透膜只允许氨进入呈色反应层，与指示剂发生反应。经过一段固定的孵育时间后，通过测定呈色剂的反射强度可间接求出尿素氮的含量。测定方式：比色法波长：670nm测试时间和温度：37C约5分钟反应过程：尿素酶非蛋白质成份+水氨+二氧化碳氨+氨指示剂-呈色剂2 .标本：2. 1病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。2.2样品类型：血清；肝素锂/钠和ED
2、TA抗凝血浆。定时收集的，稀释后的尿样。2.3标本采集与处理：2.3.1血清和血浆样品特别要注意的是：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆；不要用氟化钠作防腐剂，因为氟会抑制尿素酶。样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。处理样品时要将其当成生物污染品。2.3.2尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不能使用以下防腐剂：冰醋酸，浓盐酸，硼酸，硼粉或甲酸钠硼酸，样品在测试前要冷藏。测试前将1份样品加20份试剂级别的水进行稀释。将测试结果乘以21,就得到原始样品中尿素氮的浓度。冷藏的样品不能立即测试。处理样品时要将其当成生物污染品。3 .标本的存放：血清、血浆室温下最多1天；48冷藏最多5天
3、；-18冷冻保存可长达6个月。尿液样品在测试前要冷藏。4 .标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。5 .标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。6 .试验材料：6.1测试BUN所需的物品包括：VitrOS化学定标物Kit1；VitrOS特制质控液；Vitros7%BSA稀释液。强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份有尿素酶和氨指示剂。其它成份有染色物质，粘合剂，缓冲剂，稳定剂，表面活性剂，螯合剂及交叉连接剂。干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有
4、效期限和储藏温度。6.1.2试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置60分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器中。在试剂盒达到室温后24小时内必须将其装入仪器中。6.1.3试剂稳定性与贮存未开封的干片盒：存储在28或低于该范围。在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过2周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪器储藏器中取出的干
5、片盒。如果储藏正确，VitrosG1.U干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参见VITROS250干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP文件。6.1.4变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。6.1.5注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。6.2校准品：用Vitros化学定标物KitU血清，尿液和脑脊液都用相同的定标液，不过各自的SAVS值不同。有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品S0P文件。6 .3质控品：使用VitrOS特制的质控物品；CSF质控检测用VitrOS液体质控。若使用
6、其它的一些质控物品，当与别的G1.U测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VlTROS250干化学分析仪校准品和质控品SOP文件。7 .仪器：美国强生厂家VITRoS250全自动干式生化分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介绍。8 .操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后自动打印结果。具体测试程序请参阅VlTROS250操作手册.SOP。具体定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。何时进行定标：一一在维护和保养时更
7、换了仪器的重要部件。一一质控结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上指定的时间，在美国，C1.IA要求至少每6个月定标一次。9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测（IQCT）的内容。在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算
8、方法：以用VitrOS化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/1.报告。12 .参考值范围国际单位（mmol/1.）血清/血浆男性3.2-7.1女性2.5-6.1尿液24h尿样428-714mmolday*此参考范围是测试3160位健康成人，然后取靶值附近95%的结果计算所得。参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义：人体内氮排泄的主要途经是经肝脏合成尿素氮，进入血液后最终由肾脏排出体外，因此当发生肾小球肾炎，休克，尿道阻塞，肾盂肾炎和其它原因引起的急慢性肾病时会导致血清尿素
9、氮浓度升高。严重充血性心脏病，营养过度，糖尿病型酮酸中毒，脱水和胃肠道出血也会使尿素氮升高。而怀孕时蛋白质摄入减少以及急性肝炎进行静脉滴注会导致尿素氮下降。14 .操作性能14.1线性范围血清0.71-42.83mmol1.;尿液：14.91-899.43（乘以稀释倍数21倍的结果）。14.2精密度：在VitroS250生化仪上用质控液来测精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。日间精密度血清X(mmol/1.)S(mmol/1.)CV(%)室间精密度n=20天X(mmol/1.)S(mmol/1.)C
10、V(%)样品1n=795.60.08样品15.60.101.8样品2n=7816.40.19样品216.40.251.5日间精密XSCV室间精密XSCV度尿液(mmol1.)(mmol1.)(%)度n=22天(mmol1.)(mmol1.).(%)样品1n=88146.91.94样品1146.93.322.3样品2n=88230.03.42样品2230.07.253.2*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对测试结果进行统计计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。14.3方法学比较：用Vitros700仪器和尿素酶/G1.DH参考方法分
11、别测试相同血清样品，对比结果显示Vitros方法的准确度良好。用Vitros250仪器与Vitros700仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示Vitros250方法的准确度良好，血清：Y=l.00X+0.18（r=0.999,N=85,检测范围0.8-41.7mmol1.）;尿液：Y=0.99X+7.14（r=0.999,N=88,检测范围47.9-440.3mmol1.）o14 .4灵敏度：试剂检测下限为血清0.7Inlmol/1.,尿液为14.91mmol1.o14.5特异性：经测试，以下物质对VitroSBUN/UREA干片法均无干扰（偏差1.lmgd1.,O39mmol1.）.维
12、生素C3mgd1.、胆红素20mg/d1.、葡聚糖1000mg/d1.乙醇300mgd1.泛影钠500mgd1.s眠尔宁（安定药）2mg/d1.s乐疾宁（抗肿瘤药）1.5mgd1.苯妥因2mg/d1.、磺胺噬6mgd1.、甲糖宁22mgd1.、总蛋白10gd1.、甘油三酯800mgd1.o14.6病人结果可报告范围：血清0.71-42.83mmol1.;尿液：14.91-899.43（乘以稀释倍数21倍的结果）。15 .超出范围结果处理：本法线性上限为血清0.7ImnlOI/1.,尿液为14.91mmol1.o如果样品中BUN浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤稀释：血清或血浆用Vitro
13、s7%BSA稀释。尿液用生理盐水。重新测试。将测试结果乘稀释倍数，就得到原样品BIJN的浓度。16 .病危报警值的处理当尿素氮测定值36mmol1.时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。17 .方法局限性17 .1本法线性上限血清0.7InInIO1/1.,尿液为14.91mmol1.0如果样品中BUN浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用Vitros7与BSA稀释。尿液用生理盐水。重新测试。将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中G1.U的浓度。18 .2干扰物质：镂离子会使样品中尿素氮的测定结果升高。我们对VitrosBUN/UREA方法的干扰物质
14、进行了筛查，以下物质在表中所示浓度会引起一定的偏差。当血红蛋白为500mg1.,BUN浓度为10mmol1.时可产生+0.4mmol1.的干扰。有些药物和患者的自身状况也会影响BUN的测试值。18 .补救措施：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧急修理，如一时不能修好，用O1.YMPUSAUlOOO生化分析仪测定病人标本。19 .参考文献强生厂家提供的方法学手册20 .其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处理.SOP文件处理。血、尿液肌Bf(Cr)测定1 .实验原理VitroSCREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。将一滴患者样品滴
15、于干片上，分布层会使之均匀地分布。随后，肌酎扩散至试剂层并水解为肌酸。这样生成的肌酸在肌酸氨基水解酶的作用下转化为肌氨酸和尿素。肌氨酸又在肌氨酸氧化酶的作用下氧化生成甘氨酸，甲醛和过氧化氢。最后，过氧化氢催化白色染料生成呈色剂。测定方式：两点比色法波长：670nm测试时间和温度：37约5分钟反应过程：肌酎氨基水解酶肌酎+水肌酸肌酸氨基水解酶肌酸+水肌氨酸+尿素肌氨酸氧化酶肌氨酸+氧气+水甘氨酸+甲醛过氧化氢POD过氧化氢+白色染料呈色剂2 .标本：2. 1病人准备：无特殊。2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。定时收集的，稀释后的尿样。2.3 标本采集与处理：2.3.1血清和血
16、浆样品特别要注意的是：不要用注射营养液的针管采集样品。样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。处理时要将其当成生物污染品。1 .3.2尿液样品定时或随时采集的尿液。测试前将1份样品加20份试剂级别的水进行稀释。将测试结果乘以21,就得到原始样品中尿素氮的浓度。冷藏的样品不能立即测试。处理样品时要将其当成生物污染品。3 .标本的存放：血清、血浆室温下最多5天；冷藏最多30天；冷冻保存可超过30天。尿液样品室温下最多3天；冷藏最多5天；-18C可长期保存。4 .标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。5 .标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。6 .试验材料：
17、6.1测试Cr所需的物品包括：VitroS化学定标物Kit1；VitroS特制质控液；Vitros7%BSA稀释液。强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份有肌肝氨基水解酶，肌酸氨基水解酶，肌氨酸氧化酶，过氧化酶和白色染料。其它成份有染色物质，粘合剂，缓冲剂，稳定剂，表面活性剂，螯合剂及交叉连接剂。干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.2试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828C。因此从冰箱中取出
18、的试剂盒至少要在室温下要放置60分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。6. 1.3试剂稳定性与贮存未开封的干片盒：存储在-18C或低于该范围。在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过2周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确，VitrosCr干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参见VITR0S250干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP文件
19、。6. 1.4变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。6 .1.5注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。7 .2校准品：用VitroS化学定标物KitU血清，尿液都用相同的定标液，不过各自的SAVS值不同。有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。6 .3质控品：使用Vitros特制的质控物品；若使用其它的一些质控物品，当与别的G1.U测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；乙烯乙二醇作稳定
20、剂的质控物品不能使用。有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器美国强生厂家VITR0S250全自动干式生化分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介绍。8 .操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后自动打印结果。具体测试程序请参阅VlTROS250操作手册.S0P。具体定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。何时进行定标：在维护和保养时更换了仪器的重要部件。一一质控结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。一一管理条例上指定的时间，在美国，C1.lA要求至少每6个月定标一次。9 .检验结果的判断与分析10 .质量
21、控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测（IQCT）的内容。在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以用Vitros化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/1.报告。12 .参考值范围国际单位（Umol/1.）血清/血浆男性
22、62-106女性71-133尿液24h尿样7000-25000molday*此参考范围是测试一批健康成人，然后取靶值附近95%的结果计算所得。参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义：血清和尿液中的肌酢是正常人体肌肉组织代谢的产物，与饮食变化无关。男性血清肌酥含量高于女性。由于尿肌酎主要通过肾小球排泄，不被肾小管重吸收，所以测定血清和尿液中的肌酎浓度可以检查肾小球的通透率。急性或慢性肾衰竭，尿路阻塞，肾血流减弱，休克，脱水，横纹肌炎都可造成血清肌酊浓度上升。虚弱和肌肉量减少可造成肌酢浓度降低。运动会使肌酊廓清率升高，但当
23、尿量减少时该指标不可靠。14 .操作性能14.1线性范围：血清4-1238mol/1.；尿液：84-30639IIIol1.（乘以稀释倍数21倍的结果）。14.2精密度：在Vitros250生化仪上用质控液来测精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。日间精密度血清X(mol/1.)S(mol/1.)CV(%)室间精密度n=20天X(mol/1.)S(mol/1.)CV(%)样品1n=79870.9样品1870.91.4样品2n=785234.4样品25238.81.8日间精密度尿液X(mol/1.)S(
24、mol/1.)CV(%)室间精密度n=22天X(Umol/1.)S(mol/1.)CV(%)样品1n=88616097.8样品16160168.82.7样品2n-888830135样品28830211.12.6样品3n=8812373257.3样品312373491.94.0样品4n=8818827218.5样品418827398.62.1*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对测试结果进行统计计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。14.3方法学比较：用Vitros700仪器和高效液相色谱参考方法分别测试相同血清或尿样品，对比结果显示
25、VitrOS方法的准确度良好。用Vitros250仪器与Vitros700仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示Vitros250方法的准确度良好，血清：Y=1.03X-7.07（r=0.999,N=52,检测范围80-1176InoI/1.）；尿液：Y=1.04X-439.35（r=0.999,N=59,检测范围2714-27793mol1.）014.4灵敏度：本试剂的检测下限为血清4Inol/1.；尿液：84mol/1.（乘以稀释倍数21倍的结果）。14 .5特异性：经测试，以下物质对VitroSCREA干片法均无干扰（偏差0.lmgd1.,8.8umol1.）乙酰乙酸30mmol/1
26、.、氨茉西林1.5mg/d1.、阿米卡星1.5mg/d1.、氯化铉1mmol1.两性霉素Bl.5mg/d1.、维生素C3mg/d1.、杆菌肽1.5mgd1.重碳酸盐40mmol/1.、胆红素20mg/d1.、硫酸博来霉素1.5mg/d1.、竣茉西林1.5mg/d1.、头胞唾林1.5mg/d1.、头抱嘎吩1.5mgd1.头泡嘎咤1.5mgd1.头的来星1.5mg/d1.、头抱氨苇1.5mgd1.头泡拉定1.5mgd1.015 .6病人结果可报告范围：血清4-1238mol/1.；尿液：84-30639mol/1.（乘以稀释倍数21倍的结果）。16 .超出范围结果处理：本法线性上限为血清1238m
27、ol/1.；尿液：30639mol/1.（乘以稀释倍数21倍的结果）。如果样品中Cr浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用Vitros7%BSA稀释。尿液用生理盐水。重新测试。将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中Cr的浓度。17 .病危报警值的处理当肌酢测定值352mol/1.时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。18 .方法局限性17 .1本法线性上限为血清1238mol/1.；尿液：30639mol/1.（乘以稀释倍数21倍的结果）。如果样品中Cr浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用Vitros7%BSA稀释。尿液用生
28、理盐水。重新测试。将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中Cr的浓度。18 .2干扰物质：血清/血浆：肌酸：当肌醉浓度为1.5mgd1.（133umol1.）,肌酸大于8mg/d1.（707umol1.）时，结果就会出现DP标志（因为肌酸浓度太高引起底物缺乏）。没有DP标志，则是因为肌酸浓度小于0.15mgd1.（13umol1.）0当肌醉浓度为14mg/d1.（1237umol1.）,肌酸大于1mg/d1.（88umol1.）时，结果就会出现DP标志。而没有DP标志的结果偏差小于2%0脯氨酸：患者注射含脯氨酸的营养液会使结果升高O.2mgd1.(18umol1.)。因此，不能用静脉注射营养液
29、的针管采样。多巴酚丁胺(强心药)：静脉注射多巴酚丁胺时采集的样品会有明显的负偏差。83ug/m1.的多巴酚丁胺会使原先4.8mgd1.的肌酊浓度降至2.7mgd1.利多卡因：由于利多卡因和N-乙基甘氨酸(NEG)代谢的影响，使用利多卡因做长期治疗的病人，结果会升高至多1.0mgd1.(88umol1.)0安乃近为1.13UmOI/1.当肌酎浓度为88umol1.时，结果平均偏差为-53Umol/1.o19 .补救措施：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧急修理，如一时不能修好，则用O1.YMPUSAU100O生化分析仪测定病人标本。20 .参考文献强生厂家提供的方法学手册21 .其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处理.SOP文件处理。
