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1、项目编号码.级学科雌物量与检验项目一导师制试验报告试验名称:崎道菌群分别培育、签定与药敏分析学生姓名：ftjE.年级:2013医检1班专业:医学检!蛀指导老师:王健教授试航日期:2015年11月4日安徽理工高校医学院二。一五年十一月一、试航概述细菌:广义的细菌即为原核生物。是指一大类细胞核无核膜包袱，只存在称作拟核区（nuc1.earregion）（或拟核）的袒露DNA的原始单细胞生物,包括真细菌（ebacteria）和古生菌（archaea）两大类群“人们通常所说的即为狭义的细菌，狭义的细菌为原核微生物的一类，是一类形态细短，结构简洁，多以二分裂方式进行繁殖的原核生物，是在自然界分布最广、个
2、体数量最多的有机体，是大自然物质循环的主要参与者。肠道菌群是肠道菌群，人体肠道的正常微生物，如双歧杆菌，乳酸杆菌等能合成多种人体生长发育必需的维生素，如B族维生素（维生素B1.、B2、B6、B12）,维生素K,烟酸、泛酸等，还能利用蛋白质残渣合成必需朝基酸，如天冬门氨酸、苯丙氨酸、缎氨酸和苏氨酸等，并参与精类和蛋白质的代谢，同时还能促进铁、镁、锌等矿物元素的汲取。这些养分物质对人类的健康有着重要作用，一旦缺少会引起多种疾病。人体肠道内寄生着10万亿个细菌，它们能影响体重和消化实力、抵挡感染和白体免疫疾病的患病风险，还能限制人体对癌症治疗药物的反应.依据可培育细菌的数量分类在肠道菌群中，可以培育
3、到的细菌有400余种，依据其数量多少可以分为主要（优势）菌群（Predo1.ninan1.Diierof1.ora）和次要菌群（sub-dominantmicrofIora）。主要（优势）菌群：指肠道菌群中数量大或种群密集度大的细菌，股在1010cfug以上，包括类杆菌属、优杆菌属、双歧杆菌属、瘤胃球菌属和梭菌属等专性厌氧菌，通常属于原籍菌群,优势菌群是对宿主发挥生理功能的菌群,在很大程度上影响着整个菌群的功能，确定着菌群对宿主的生理病理意义。次要菌群：数量在1010cfug以卜，主要为需氧菌或兼性厌氧菌，如大肠杆菌和徒球菌等，流淌性大，有潜在致病性，大部分属于外籍菌群或过路菌群。乳杆菌在数量
4、上归为次要菌群，在回肠中含量较高，但是其具有较为重要的功能，因此在功能上归属于优势菌群。优势菌群与微生境的特征亲密相关，以厌氧菌为主的优势菌群，般生存在清除速率较低、养分丰富的微生境，如结肠，所以菌群密集度和多样性高：而兼性或需氧菌群般生活在清除速率高的微生境，如小肠近端，真菌群密集度和菌群多样性较低，由于菌群密集度低，很难称得上是“优势菌群”：在酸性微生境中，耐酸、产酸的细菌成为优势菌群。微生境的变更，可使菌群中的优势菌群发生替换，如便秘时大便优势菌群主要是革兰阴性厌氧菌，慢性腹污时常见革兰阳性杆菌为优势菌群，而在严峻急性腹泻时大便中的优势菌群为致病性细菌或某些兼性/需氧细菌。在肠道中，尽管
5、专性厌氧菌是主要菌群，占据优势，但这些菌群又依靠于需氧菌或兼性厌氧菌等次要菌群的存在，因为后者在增殖过程中消耗氧气，保证前者的生长条件。一个生理性组合的肠道菌群是有益的，而病理性组合的肠道菌群是有宙的。人体肠道内的微生物中，超过99%都是细菌，存活着数量大约有100兆个，有5001000个不同的种类。这些数目浩大的细菌大致可以分为三个大类：有益菌、有害菌和中性菌。有益菌，也称之为益生菌，主要是各种双歧杆菌、乳酸杆菌等，是人体健康不行缺少的要素，可以合成各种维生素，参与食物的消化，促进肠道蠕动，抑制致病菌群的生长，分解有害、有毒物质等。有害菌，数量旦失控大量生长，就会引发多种疾病，产生致癌物等有
6、害物质，或者影响免疫系统的功能。中性菌，即具有双重作用的细菌，如大肠杆蜀、扬球菌等，在正常状况下对健康有益，一同增殖失控，或从肠道转移到身体其他部位，就可能引发很多问题。人体的健康与肠道内的益生菌群结构休戚相关。肠道菌群在长期的进化过程中，通过个体的适应和自然选择，菌群中不同种类之间，菌群与宿主之间，菌群、宿主与环境之间，始终处于动态平衡状态中，形成个相互依存，相互制约的系统，因此，人体在正常状况下，菌群结构相对稳定，对宿主表现为不致病。有探讨指出，体强健的人肠道内有益菌的比例达到70%,股人则是25乐便秘人群削减到15%,而癌症病人肠道内的益生菌的比例只有1佻。药敏试验是指体外抗菌药物敏感性
7、试脸简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌实力的试验。目前.，临床微生物试验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test法）,和自动化仪器等。木试验以在校医学生粪便标本为样品，探讨肠道菌群的分别、培育、鉴定和药敏，了解在校医学生肠道菌群分布状况与对常用抗生素的敏感性，为预防肠道细菌感染和合理运用抗生素供应试验依据。二、试验目的和意义1、驾驭培育基的配制方法培育基的配置过程主要包括：调配、溶化、校正PH值、澄清过滤、分装、灭菌与检定和保存。潮配：溶化：校正PH值：澄清过滤:分装：灭菌：鉴定：保存：2、熟识湿热灭菌的原理和应用湿
8、热灭菌一般采纳高压蒸汽灭菌，在103.4KPa蒸汽压下，温度能达到121.3C维持1520分钟，就能杀死包括细菌芽胞在内的全部微生物，是种彻底的灭菌方法。3、驾驭肠道标本的采集方法标本的收集、存放与运输的得当与否，干脆关系到检验结果的精确性。应实行簇新粪便，盛了干净、干燥无吸水性的有盖容器内，不得混有尿液、水或其他物质，以免破坏有形成分，使病原菌死亡和污染腐生性原虫、真菌的子、植物种子、花粉易混淆检验结果。采集标本时应用干净竹签选取含有粘液、脓血等病变成分的粪便；外观无异样的粪便须从表面、深处与粪端多处取材，其量至少为大拊指末段大小（约5g）.标本采集后一般状况应于Ih内检查完毕,否则可因PH
9、与消化前等影响导致有形成分破坏分解.4、驾驭肠道正常菌群、断道致病菌和肠道条件致病菌肠道正常菌群：指肠道菌群中数量大或种群密集度大的细菌，对人体有益无害并与人体保持平衡。肠道致病菌：除大肠正常菌群之外可导致疾病发生的菌种，主要是沙门氏菌、志贺氏菌变形杆菌、大肠埃希菌耶尔森菌：肠道条件致病菌：与人体共同生活，以兼性厌氧菌为主是肠道非优势菌群，如肠球菌，肠杆菌，在肠道微生态平衡时，对人体无害，但在特定条件卜.会具有确定的致病性。5、驾驭肠道菌群在肠道选择培育基上的生长特点肠道菌群在选择性培育基上生长特点：肠道菌群需氧或兼性厌氧，菌落中等大小，表面光滑潮湿，液体培育基混浊生长。6、驾驭厮道菌群的生化
10、反应肠道菌群生化反应活泼。乳糖发酵试验：肠道非致病菌+，肠道致病菌-(除外变形杆菌)。肠杆菌科定科试验主要项目是革兰阴性杆菌、触悔阳性，氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阳性。7、驾驭肠道菌群的签定要点鉴定肠道菌群首先要保证粪便的簇新且没有受到污染，驾驭菌落的基本形态特征，要熟识各种菌落的生化反应的特点。8、驾驭细菌的药敏试般体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试脸(AST),是指在体外测定药物抑菌或杀菌实力的试验抗菌药对细菌性传染病的限制起到r特别重要的作用.幽若新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗曲药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长
11、期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以与不能很好的驾驭药物对细菌的敏感度，所以个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效三、试殴应具备的物质条件1、试剂：革兰染液，触能与氧化酶试剂，蒸储水等。培育基：SS培育基，麦康凯培育基,培育基系统生化管：J2026纤维二轴20071109J2019木糖20080108J2018阿拉伯糖20080527J2044七叶甘20080102J2016甘露酶生化管20070914B-半乳糖昔(OPNG)20090422麦芽精20090331枸榜酸盐生化管20090409一般培育基，半固体培育基，克氏双糖铁杭州微生物试剂有限公
12、司批号杭州微生物试剂有限公司批号杭州微生物试剂有限公司批号杭州微生物试剂有限公司批号杭州微生物试剂有限公司批号杭州微生物试剂有限公司批号杭州微生物试剂有限公司批号杭州微生物试剂有限公司批号敕匐酸脱残海生化管杭州微生物试剂有限公司批号20090325尿素生化管杭州微生物试剂有限公司批号20090317精第酸脱瘦诲生化管杭州微生物试剂有限公司批号20090105鸟氨酸脱粉酶生化管杭州微生物试剂有限公司批号20090219药敏纸片：氯霉素（30ug片）杭州微生物试剂有限公司批号20150305庆大舜素（IoUg/片）杭州微生物试剂有限公司批号20150202环丙沙星（30ug片）杭州微生物试剂有限公
13、司批号20150210红霉素（15ug片）杭州微生物试剂有限公司批号20150106青等素（IOUg/片）杭州微生物试剂有限公司批号201502092、仪：恒温培育箱，干烤箱，高压灭菌锅，半白动生化分析仪，水平离心机，显微镜等3、其他：接种环，酒精灯，火柴，1忒管架，记号笔，裁坡片四、留意事项1天平的运用：称生前要留意天平的调平，应先把游码归零，放上称量纸后在调平天平，称或时务必做到“左物右码”称量后把天平放回原处。2在配置半固体（动力）培育基和克氏双糖铁培育基时，按参与试验的人数配适量的培育液，并留意各种试剂之间和水的比例。3在配置培育基时留意培育基的pH纸（一般肠道细菌的最适pH值为7.2
14、、7.6,配置的培育基的PH值应为7.47.6）4用手提式压力蒸汽灭菌器灭菌，在灭菌前应核对排气阀是否处以开的状态，而平安阀应处于关闭的状态。5制备克氏双轴铁斜面培育基时，从高压灭菌锅中取出趁热放阻成高层斜面，放置过程中禁止试管滚动，待凝固后放入冰箱保存，作无菌试验备用。6高压蒸汽灭亡菌锅的运用原则严格依据高压蒸汽灭亡菌锅的运用原则运用，运用前务必检查高压蒸汽灭亡菌锅中的水是否符合加热的要求，通电前检查排气阀是否开启，平安阀是否关闭，待冷气排尽关上排气阀平安阀起先喷漆时起先计时，等指针回到原位时才能打开盖子，留意切断电源。7取粪便细菌标本：要取簌新的粪便（不能超过2小时）份量在I克左右，严禁粪
15、尿混合，正常标本取表面，异样标本取粘液或脓血部分。8可疑菌落的鉴别：在SS培育基上假如出现可疑菌落如黑色菌落，应要鉴定其种属。9生化反应的推断和分折：在做生化鉴定时应留意生化管前后比照，以便推断试验结果.10药敏试验分析：在做药敏试验时，朱纳密集画线发，要尽量画的密，画的匀称，使之呈匀称分布，放药敏纸片要留意各个纸片之间的距离和培育皿壁的距离。测量结果是要多次测量取其平均值。五、试验设计原理1、采纳分别划线法分别培育肠道细菌平板划线分别法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细菌用接种环在平板培育基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细菌，经培育后生长繁殖成单菌落，通常把这种
16、单菌落当作待分别微生物的纯种。用于目的微生物的分别，便于得到目的性状的单克隆。2、采纳初步生化反应和系统生化反应饕定肠道致病菌和肠道条件致病菌初步生化反应和系统生化反应鉴定肠道菌群是借助各种肠道细菌具有的各自那系统对底物的分解实力与其代谢产物的不同来进行的。而这些代谢产物又具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。初步生化反应时，依据革兰奥色阴性或者阳性结果进行触酣或者氧化酶反应，然后由初步生化结果再在各种生化反应培育基中加入单个菌落，培育24或者48小时读取结果，依据各主要菌属（钟之间的一些主要生化特性鉴别菌落。3、以K-B法检测细菌药物敏感性将含有定量抗菌药物
17、的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后会不断地向纸片四周区域扩散，形成递减的浓度梯度，在纸片四周抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透亮的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈俞大，MIC俞小。六、试验方法、步骤1、培育基的制备(I)半固体(动力)培育基的制备把少量的凝固剂加入到液体培育基中，就制成了半固体培育基。以琼脂为例，它的用量在0.20.7%之间。这种培育基有时可用来视察微生物的动力，有时用来保藏菌种。1.配料配方换算一在容器中加入少量水(蒸镭水，自然水)一依据配方称取各种
18、药品(依次加入)一加足所需水量一药一勺，取药后马上盖上瓶盖。2 .溶解淀粉溶解：少量冷水调成糊状；加热溶解，特殊是加有琼脂的培育基，确定要煮沸，琼脂的熔解温度9597C,且须要边加热边搅拌以防止烧焦。3 .调PH用IN的盐酸或的1NaOH把培育基调整到所要求的值。4 .过滤滤纸或棉花进行过滤。5 .分装一般培育基放在三角瓶或试管中灭菌运用。(1)三角瓶若作静置培育，则100m1.培育基/250m1.的三角瓶，最多不能超过150m1.培育基/250m1.的三角瓶，否则灭菌时培育基沸腾简洁污染棉塞，造成染菌：若作摇瓶培育，则1520m1.培育基/25On)I的三角瓶，保证通气良好。(2)试管分装液
19、体培育基一般装45m1.,约试管的1/4高度；固体斜面培育基一般装34m1.,约试管的1/5高度。6 .包扎分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包袱好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。7 .灭菌按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。假如灭菌的温度太高,养分成分会被破坏，培育基中的糖、氨基酸会使培育基的颜色变深。8 .摆斜面灭菌后须要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。9 .贮存培育基在30C下放置一天，无污染的即可运用。一股用牛皮纸包袱好存放于2-8C冰箱中备用(2)克氏双糖株培育基的制备成分：蛋白陈20g牛肉膏3g酵母甘3g乳精Iog葡的躺Ig氯化钠5g
20、柠檬酸铁钱0.5g硫代硫酸钠0.5g琼脂12g的红0.025g蒸耀水1000m1.pH7.4将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸储水中，校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2$酚红水溶液12.5疝,摇匀。分装试管,装量宜多些，以便得到比较高的底层。121C高压灭菌15min.放置高层斜面备用。(3) SS培育基的制备SS琼脂为强选择性培育建。其成分除了有必要的陈、牛肉膏等氮、碳源外,其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。可用于志贺菌和沙门菌的分别。一类是基础培育基，还有类是完全培育基。基础培育基：配g/1.方牛肉5膏豚5陈号3.5胆盐琼17脂溶于100Om1.蒸储水中混合匀称。121C高压
21、灭菌15min,保存备用.完全培育基配方g/1.牛肉沟5豚陈5三号胆盐3.5琼脂17乳糖10柠楝酸钠8.5硫代硫酸8.5钠10与柠檬酸IOm1.铁溶液1%中性红2.5m1.溶液0.温煌绿0.33m1.溶液加热溶化基础培育基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合匀称，校正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。注：制好的培育基宜当日运用，或保存于冰箱内于48h内运用。煌绿溶液配好后应在IOd以内运用。可以购用SS琼脂的干燥培育基。(4) MacConkey培育基的制备原料成分：蛋白豚17g脓豚3g猪胆盐(或牛、生胆盐)5g氯化钠5g琼脂17g蒸馈水100Om1.乳糖IOg0.01%结晶
22、紫水溶液IOm1.0.5%中性红水溶液5m1.1将蛋白腺、豚、胆盐和氯化钠溶解40Om1.蒸储水中，校正pH7.2。将琼脂加入600m1.加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121C高压灭菌15min备用。2临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至5055C时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板.注：结晶紫与中性红水溶液配好后须经高压灭菌。2、少许震新类便标本(1.g)分别培育将簇新粪便接种于SS或麦康凯平板35孵育24hn3、以灭菌接种环沾取娄便部分少许，分别以3区划线法接种于SS、MacConkey平板，37P温箱孵育1824hIIIII先在火焰上给接种环灭菌，室温冷却。当心挑取俄新粪
23、便少许，分别划线SS、MaeConkey平板.，用灭菌的接种环从1区划线分别接种，于1区线交叉3次左右，为2区。同样方法进行第3区分别划线。使粪便标本细菌在肠道选择平板上呈梯度递减分布态势，以获得典型的单个菌落。盖好皿盖，倒置（防止水分蒸发）平皿，置3537C恒温培育箱1824小时。取平皿视察记录培育结果，置4C冰箱备存，用于后续试验。4、分别取正常菌落和可疑菌落行Gra1.nsstain染色、镜检，视察记录细菌形态和染色特征在培育展中用接种环分别挑取正常菌落和可疑菌落涂在载玻片上。固定：细菌的固定常用火焰加热法，即将上述已T的涂片在酒精灯火焰中通过3次。进行革兰染色：a初染，将结晶紫染液加于
24、制好的涂片上，染色Imin,用细水冲洗，甩去积水。b媒染，加卢戈碘液作用Imin,用细水冲洗，甩去积水。C脱色，滴加95%酒精数滴，摇动玻片数秒钟，使匀称脱色，然后斜持玻片，再滴加酒精，直到流卜.的酒精无色为止，用细流水冲洗，甩去积水，d复染，加稀释石炭酸复红柒05min,用细流水冲洗,甩去积水。在显微镜卜.（油镜）视察肠道细菌的形态，并记录其结果。5、分别取正常窗落和可疑菌落行KIA、MIU初步生化反由K1.A培育基含乳糖、葡萄精、硫酸亚铁镂和酚红指示剂，用针穿刺，取单个菌落，穿刺至底部3-5mm处,然后在斜面上往复划线。放35度培育18-24小时。动力、呀咻与腺静（MIU）复合试验将大肠埃
25、希菌和般变形杆菌穿刺线接种于M1.U培育基，35摄氏度，18-24h,视察动力和胭搜寻酶反应后，再滴加阻味试剂.6、分别取正常菌落和可疑菌落行系统生化反应用接种针分别取单个正常菌落和可疑菌落接种两套的各个系统生化管，35摄氏度培育18-24小时视察系统生化管结果。7、分别取正常菌落和可疑菌落行单纯药敏试胎；在培育基中用接种针分别挑取正常菌落和可疑菌落分别用密集画线法接种于MH药敏培育基，使待检细菌在MH培育基上近似匀称分布。密集画线药敏纸片匀称贴在培Iii1.1.IBh赞用融量美Z一丝X运is溶解语f育基上药敏试验结果15躯榭施ab31.siSaV在含菌的MH培育皿中匀称贴上不同药敏纸片（氯律
26、素药敏纸片、庆大寿素药敏纸片、青霉素药敏纸片、红霉素药敏纸片、丁胺卡那药敏纸片），使药敏纸片呈梅花状分布。将MH培育皿放J37C恒温培育箱18、24小时，并视察抑菌环大小，测量、记录抑菌环直径。8、取可疑菌落做迁徒试殴用灭菌过的接种环取可疑菌落，点状接种在一般培育基上。将一般培育基放于37七恒温培育箱18、24小时，并视察记录有无迁徙生长现象。七、试验路途与方法变更粪便标木（1.gSS、MacConkey平板1824h可疑菌落、正常菌落GramSstain染色初步生化纯培育（SS或MacConkey平板）镜检系统生化大肠杆菌质粒DNA抽提/、验证染色镜检在肠道血清学检查药敏试验OD26O/OD
27、280比值测定G-杆菌鉴别诊断价值单纯药敏试验确定DNA纯度联合药敏试验八、试验内容与预期目标1、试验内容培育基的制备粪便细菌标本的分别培育可疑菌落的染色镜检可疑菌落的生化反应细菌的药敏试验迁徙试验2、期目标驾驭各种培育基的配置方法和鉴定学会湿热灭菌和高压蒸汽灭亡菌锅的运用方法驾驭肠道细菌分别培育方法和步骤驾驭肠道细菌的鉴定方法、鉴定要点和步骤驾驭K-B法细菌药敏试验九、结果1、肠道细菌在廊道选择培育基上的生长特点肠道菌群在MaCeOnkey平板呈粉红色的菌群，呈条状分布，且分布不规则匀称：在SS上呈乳白色点状生长，从区到四区递减分布。详细状况见图13图17。2、可疑菌落的涂片、革兰氏染色、镜
28、检可疑菌落在显微镜下（油镜）看到为红色菌落，是革兰氏阴性菌，菌体两端钝圆，有明显.的多形性，呈球型或丝状，分布不匀称，成团或成就分布。详细状况见图25图283、肠道细菌的初步生化反应正常菌落的初步生化反应结果：产酸产气，动力试验为阳性；可疑菌落在K1.A培育基中呈黑色分布，产硫化氢，培育基底部有小个空泡，在斜面上呈点状菌落分布，在M1.U培育基中，细菌沿穿刺线放射生长，动力试验呈阳性。详细状况见图19图21。4、肠道细菌的系统生化反应可疑菌落的系统生化反应结果是：甘露醉黄色呈阳性，麦芽脑黄色呈阳性,七叶棕色呈阴性，枸株酸盐绿色呈阴性，赖氨酸紫红色呈阳性，精然酸浅棕色呈阳性，鸟氨酸淡黄色呈阳性，
29、尿素黄色呈阴性，硫化氢黑色呈阳性，蛋白陈水红色呈阳性，纤维二糖蓝色呈阴性，VNPG黄色呈阳性,详细状况见图22图24$肠道细菌的K-B法药敏试验依据抑菌圈的大小（不同抗生素其抑菌圈大小的标准不一样），推断为敏感（S，耐药（R）或中介度（I）。用刻度尺量的抑菌圈如卜.，详细状况见图29、图32氯舜素（2.5cm）庆大霉素（R）环丙沙星（2.8cm）红舜素(R)青霉素(R)6、可疑菌落的迁徙试航可疑菌落在一般琼脂平板上可扩散水纹状薄膜布满整个培育基表面，迁徙生长试验呈阳性。详细状况见图18。肠道细菌分别培育与签定菽年半自动细菌生化图8主要试验仪器一定量PCR仪试验结果图Inw要试Ift仪器F角灵心
30、机TgIZr年要试国仪F豕平式.酬厂肠道菌群分别培育与签定里凝肠道菌群在SSxMac培育基生副嬴肠道菌群在SSMaC培育基生图18：变形杆菌迁徙生长现象肠道菌群分别培育与鉴定KIA、MiU培育基生KIA、M1.肠道菌群分别培育与鉴定好者,1RX姿百图2k大肠杆菌Gramer玉stainX1.OOO十、探讨肠道菌群是指一大类存在于人类和幼物肠道内的形态、生物学特性特别相像的G-杆菌，大多数细菌对人体有益，广泛分布在自然界中，包括植物、土壤、水、以与人和动物的肠道。多数是人肠道正常叫菌群的重要成员在机体的其他部位较少。如大肠杆菌能合成人体所需的VitBI2、VitK,叶酸等，它们彼此相互联系、相互
31、依存，共同维持肠道内微环境的稳定。少数细菌可引起人类腹涓或肠外感染，其中具有确定致病作用的细菌有志贺氏菌属、沙门氏菌属、耶尔森氏菌属等；具有条件致病作用的细菌有枸榛酸杆菌属、克宙伯菌属、肠杆菌属、粘质沙帘氏菌属、变形菌属等。当宿主反抗力卜.降、借居部位变更或肠道菌群失调，则可引起肠内或肠外感染。1、肠道细菌在肠内的分布特点和功能健康人的胃肠道内借居若种类繁多的微生物，这些微生物称为肠道菌群。在人类胃肠道内的细菌可构成个巨大而困难的生态系统，个人结肠内就有400个以上的菌种。从口腔进入胃的细菌绝大多数被胃酸杀灭，剩下的主要是革兰氏阳性需氧菌。胃内细菌浓度103CF17M1.（CFU即Co1.on
32、yformingUnit菌落形成单位）小肠菌群的构成介于胃和结肠之间。近端小肠的菌丛与胃内相近，但常能分别出大肠杆菌和厌氧菌。在远段回肠，厌氧之间。近端小肠的菌丛与胃内相近，但常能分别出大肠杆菌和厌氧菌。远段回肠，厌氧菌的数量起先超过需氧菌，其中大肠杆曲恒定存在，厌氧菌如类杆菌屈、双歧杆菌属、梭状芽胞杆菌属，都有相当数量。在回盲燃的远侧，细菌浓度急剧上升，结肠细菌浓度高达IOJ1.-10.12CF1.7m1.,细菌总量几乎占粪便干重的3。其中厌氧菌达需氧菌的10.310.4倍。主要菌种为炎杆菌属、双岐杆菌属和其杆菌属.正常菌群的功能：1、汲取水分，粪便较软，较易排泄。在胃部分解消化的食物,经由
33、小肠汲取养分后，成为粘稠状物体送至大肠。然后再经过18小时将水分与矿物质汲取，就变成简洁排泄的粪便。肠道内环境良好时，粪便的软硬适中，排便会较为顺当。2,缓和的蠕动，能顺当将粪便排出藕由肠的端动，将粪便缓慢的推送至肛门。假如蠕动过快或太慢，都将影响粪便的构成，导致便秘或者.腹泻。而假如肠内干净,则蠕动的速度就相当的有规律，粪便可顺当排出,3、有助维他命的合成。比菲德氏菌等好菌能维护肌肤的健康，并具有合成有助热量产生的维他命B1.、B2与B6等，以与与止血、骨骼形成有关的维他命K等之功用。健康的肠道，好菌会不断繁殖，维他命的合成也可顺当进行。4、快速排出有害物质。健康的肠道并非完全没有环菌的存在
34、，有害物质多少会产生。当然还包括，吃进体内的食品化学添加物或是无法成为养分成分的物质。只要肠内环境良好，这些物质在起先危害身体前就被排出体外。5、避开病原菌的侵害比萨德氏菌等好菌可以刺激并提高身体的免疫机能，而且易引起食物中毒等病原菌因具怕酸特质，所以像是含有好菌的乳酸饮料或健康食品等，都可抑制病原菌在肠内繁殖。肠道有菌群除了以上功能之外，对人体还有养分作用，如糖尿病、高血压、高血脂等。B族维牛.素和非必需氨基酸对人类的毛发具有重要的作用，当缺少这些养分元素，会导致头发脱落或毛发发黄、发叉，简洁折断等现象。致病菌群的功能：当机体处于有害菌侵袭时，往往会肠内黏膜粗糙，血液不流通而呈暗红色。主要表
35、现为I、排泄不顺畅，肠内囤积粪便为帮助排便，粪便的软硬程度要适中，但不健康的肠则因脐食纤维的不足，导致粪便他积大肠，无法顺当排泄：又或者是因环菌的繁殖引起细菌感染，而产生腹泻的发生。2.蠕动过快或太慢肠不健康，可能会影响肠的蟠动速度过快或太慢，阻碍粪便顺当排出。粪便更会因此变太硬或太稀，最终导致便秘,，肠道中过路菌群更因此加速繁殖，如此恶性循环下去。3、产生有害物质。不健康的肠道是坏菌繁殖的绝佳场所，大盘的坏菌会导致阿摩尼亚，硫化水素与粪臭素等有害物质的产生。这些物质不但是恶臭屁的来源，更会加速肠壁的老化，产生导致癌症的物质，成为大肠癌的发病根源。4、再次地汲取对身体有害的物质。有害物质不会乖
36、乖地待在肠内，它会随着肠的汲取而跟着血液循环全身，引起疲乏、肌肤干燥、头痛、呕吐等身体不适，会发生恶臭的物质更会经由血液，透过嘴巴或身体而散发出来。5、病原体简洁侵入不健康的肠内，乳酸菌等好菌的量会变少，肠内呈碱性。另外，因坏菌所产生的有害物质使肠壁所具有的免疫功能下降，导致肠内杀菌作用变弱，细菌或病原菌更简洁侵入。2、标本采集，分析采集标本的影响因素：在临床上采集粪便标本时应用干净竹签选取含有粘液、脓血等病变成分的粪便；外观无异样的粪便须从表面、深处与炎端多处取材，其量至少为大拇指末段大小，实行簇新粪便，应盛于干净、干燥无吸水性的有盖容器内，不得混有尿液、水或其他物质，以免破坏有形成分。采集
37、标本的影响因素：在采集粪便时，粪便和尿液混合，你尿液中的尿酸会破坏粪便的正常环境，影响正常炎检。采集的标本假如放在不合适的容器内，也会影响检验结果。3、在肠道选择培育基上菌落特征在培育基培育时无需添加生长因子，向培育基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。4、肠道选择培育基上菌落GraIIIs8tain特点选择培育基菌落革兰染色后，菌落被染色成紫红色，菌落散在或者聚集成簇存在。5.细菌典型生化反应与其概率细菌生化反应：各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对养分基质的分解实力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区分，可供鉴别细菌之用。用生化试验的方法检测细菌对
38、各种基质的代谢作用与其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。操作可按下表进行生化反应接种实验名称接种豳种培养基葡楣标发明试电大肠杆菌、伤基沙门就军葡萄楣发匿管乳植发创试骐大肠杆由、伤寒沙门国军乳糖发酎管靛基质试脸大肠埃禽国、产气肠杆由蛋白陈水甲基红试脸大肠埃希国、产气肠杆菌葡萄糖蛋白陈水V-P试蛉大肠埃第国、产气肠杆菌葡萄糖蛋白陈水枸榜酸盐利用试验大肠埃箱杀、产气肠杆的枸棱酸盐培养基尿素分解实羲大肠埃卷翦、昔通变形杆菌尿素培养基统化氮生成试批大题埃整SI、普通变形杆菌酣酸铝培养基6.细菌的鳖定要点（I）细菌的形态学检杳：细菌的形态学检查包括不染色标本检查法和染色标本检查法，显微镜
39、是视察细菌形态所必备的基本工具。镜检不仅可以快速r解标本中有无细菌与大致的菌量，而且依据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别和分类，为进一步作生化反应、血清学鉴定供应依据。对某些细菌，如痰中的抗酸杆菌和脑脊液中的脑膜炎奈瑟菌等，通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊断和治疗疾病有确定的参考意义。（2）细菌的生化反应：由于细菌产生的的系不同，因而对底物的分解实力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来鉴定细菌，这种生化反应测定方法也称生化试验。细菌的生化试验是将已分别纯化的待检细菌，接种到一系列含有特殊物质和指示剂的鉴别培育基中，视察该菌在这些培育基内的pH变
40、更，或是否产生某种特殊的代谢产物，现代细菌学已普遍采纳微量、快速、自动化等鉴定系统，已有很多相应的配套试剂供种属鉴定运用。7、药敏结果分析，分析抑菌产生的机制，分析抑菌大小的意义，影响抑蓄大小的因索，如何指导临床合理运用抗生素综上所述，肠道细菌的形态学鉴定是简便、价廉、有效的方法，分别培育是肠道细菌鉴定的金标准，生化反应鉴定更能精确的鉴定细菌的种属（单一的生化反应不能精确鉴别应用联合的生化反应鉴定细菌的种属）。由于吻道细菌为一大群G-中等大小杆菌，形态学难以鉴别，少量初步生化反应不易鉴别，通常采纳系统生化反应和血清学鉴定。肠道细菌对常用抗生素已具有确定耐药性，临床上一旦出现由此菌导致的感染，应
41、选用敏感的抗生素。粪便标本中除常见的大肠杆菌外，还分别出般变形杆菌，该菌为条件致病菌，其对胺卡那、氯霉素、庆大客家敏感，对吉霉素、红霉素明显耐药。十一、结论1、肠道菌群是一类形态、生物学特性相像的G-杆菌，主要有大肠杆菌、克雷伯氏W、粘质沙雷氏菌、变形杆菌等2、肠道细菌的形态学鉴定是筒便、价廉、有效的方法，分别培育是肠道细菌饕定的金标准3、初步生化和系统生化反应在肠道菌群各属种的笠定中有重要意义4、药敏试验可精确筹选出耐药菌株，为合理应用抗生素供应牢靠试殴依据参考文献ScidmoreMA,FischcrER,HackstadtT.T.Sphingo1.ipidsandg1.ycoprotein
42、saredifferentia1.1.ytraffickedtothech1.amydiatrachomatisinc1.usionJ.JCe1.1.Bio1.1996:134(2):363-374王健，钱中清，朱玉俊，杨庆宽.淮南工业学院学生肠道菌群初步调查J中国学校卫生，2002:23(1):28-29.刘恭植.微生物学和微生物学检验M.北京:人民卫生出版社1987,143-15十二、导师看法围绕试验目的、方法、技术路途、结果、分析探讨逐层分析，并留意文字表达是否流畅.导师签名，2013年10月31日十三、教研室看法同意授课老牌看法.2015年11月4日十四、医学院看法优.口良口中.差2015年11月5日
