微生物平板划线法.ppt

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1、平板划线实验,STEP,STEP,1,细菌的培养,细菌的培养,细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁殖的技术。细菌在自然界中分布极广,数量大,种类多,它可以造福人类,也可以成为致病的原因。大多数细菌可用人工方法培养,即将其接种于培养基上,使其生长繁殖。培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用。细菌培养是一个复杂的技术。,STEP,STEP,2,培养基,在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中,不同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某种细菌,就必须将各种细菌进行分离,以得到只含有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后,常需要接种到有关的培养基中,以测试其各种生物学性状,不同的细菌需要不同的培养基进

2、行培养。,培养基的种类,按其物理性状分为:固体培养基 液体培养基 半固体培养基,按用途分为:基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基,STEP,STEP,3,细菌接种方法,常见的几种细菌的培养和基接种方法举例,平板划线法,平板划线法主要是借划线而将细菌在琼脂平板表面分散开,使单个细菌能固定在某一点,生长繁殖后形成单个的菌落从而达到分离纯种的目的。常用于分离单个菌落,也可用于观察细菌的生长状况和观察某些生化反应。,平板划线法接种方法,(一)标记 在培养皿底面,用记号笔注明接种的菌名、接种者姓名、日期等。,平板划线法接种方法,(二)灭菌接种环 点燃酒精灯,右手以持笔式握持接种环,并放置火焰中

3、烧灼灭菌,先将接种环的接种丝部分置于火焰中,待金属丝烧红并蔓延至金属端,再直接烧灼金属环直至烧红,然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰,随后再反方向通过火焰,如此23次。然后将接种环移开火焰,待其冷却。,平板划线法接种方法,(三)取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管,用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞,将试管管口迅速通过火焰23次进行灭菌。将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中,取一接种环的菌液,然后退出菌种管,将菌种管管口及试管塞再次通过火焰23次灭菌,塞好试管塞,放至原来的位置。,平板划线法接种方法,(四)分离划线接种细菌(四区接种法)(1)左手手掌持琼脂平板培养基,大拇

4、指与中指轻轻将平皿盖子拿起,右手持接种环在琼脂平板上端来回划线,涂成一细菌薄膜(约占平板的1/10),视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈3040度角,以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。,平板划线法接种方法,(2)旋转琼脂平板90度,烧灼接种环,以杀灭环上的残留细菌,将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线(约占平板1/5),此视为二区。,平板划线法接种方法,(3)旋转琼脂平板90度,灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线(约占平板1/4),此为三区。(4)旋转琼脂平板90度,接种环不必再灭菌,接三区连续平行划线,划满平板其余部分,此视为四区。各区接种线间尽量互不交接,以达到细菌逐渐稀释的目的。,平板划线法接种方法,平板划线法接种方法,(5)划线完毕,将琼脂平板放进皿盖,将培养皿倒放,送进37温箱培养。(6)培养1824h后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落,注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。,Thank you!,

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