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1、微生物的计数,微生物的计数,血球计数法,平板活菌计数法,计繁殖数法只适宜于单细胞状态的微生,物,或丝状微生物产生的孢子,血球计数法,一、实验原理,血球计数器是一特制的厚载玻片，上面刻有一定面积的方格，将盖玻片盖上后，由于两者之间存在着距离使之形成一定容积的小室。滴入待测样品后，使样品均匀充满小室，在显微镜下计算小室内的菌数，换算成单位体积的样品中所含的菌数。,血球计数法,二、血球计数器的构造,盖玻片,0.1mm1/400mm2计数室体积,25*16,1mm,1mm,=(110.1)mm3=10-4cm3,血球计数板,血球计数法,三、血球计数法的步骤,1、取待测啤酒酵母菌液，摇匀。并做适当稀释（
2、以每个中格内20左右为宜）。2、取洁净干燥的血球计数器，盖上盖玻片，用滴管吸取少量菌液沿盖玻片边缘滴入一小滴，菌液自行渗入计数室，静止片刻，使菌液均匀充满每小室。,血球计数法,示范动作,血球计数法,3、先在低倍镜下找到计数室，注意光线不能太亮，再转到高倍镜下，取5个中格进行计数（每个中格取4个小格）。,计数时注意调节焦距，使不同焦距的菌体都计入，在线上的菌，数上不数下，数左不数右。,血球计数法,4、菌液浓度计算,菌液浓度（菌数/ml)=N25104稀释倍数,其中N为每中格内菌数的平均值。,平板活菌计数法,一、实验原理,微生物在固体培养基上形成的单菌落，,一般认为是由一个细胞繁殖而来，及一个菌落
3、代表一个细胞。计数时，将待测菌样做一系列稀释，再取一定稀释度一定量的稀释液接种到平板上，使其均匀分布。经培养后，生长成单菌落，由菌落数推算出单位体积菌液的活菌数。,平板活菌计数法二、平板活菌技术的步骤,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,菌悬液 10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,每皿约倒入15ml,0.2ml,0.2ml,0.2ml,沙保培养基,平板活菌计数法,待凝后倒置于28恒温培养48h后计数。,（选择菌落数在50100个左右的平板计数）,菌液浓度计算,菌液浓度（菌数/ml)=菌落数稀释倍数5注：只数浓度合适的两个平板取平均值,2.,3.,4.,5.,注意事项,1.,过程的无菌操作,稀释分离法中熔化后的培养基倒平板前温度控制稀释法中用吸管取试管中液体的顺序从稀到浓取样前注意摇匀待测菌液取样时都要无菌操作。注意取菌液时移液管不要碰到火焰，以免烧死菌体6.血球计数器要洁净干燥，滴入菌液时在盖玻片与载玻片间不能有气泡7.血球计数时显微镜光线不宜太亮,思考题,.从两种方法计数得出的菌液浓度是否一致？分析误差产生的原因，由此比较一下两者的优缺点及 各自的适用范围。,.平板活菌计数中，为何选择生长有50,100个菌 落的平板？,
