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1、生化基础实验实验讲义基础实验生物科学与工程学院1生化实验一实验基本操作技能培训一、仪器的洗涤与干燥1.仪器的洗涤化学实验中经常使用的玻璃仪器和瓷器，常常由于污物和杂质的存在而得不出正确的结果。因此，在进行化学实验时，必须把仪器洗涤干净。玻璃仪器的洗涤方法很多，应根据实验的要求、污物的性质、沾污程度来选择。常用的洗涤方法如下：(1)用水刷洗用水和毛刷刷洗，再用自来水冲洗几次，可除去附在仪器上的尘土、可溶性和不溶性杂质。注意洗刷时不能用秃顶的毛刷，也不能用力过猛，否则会戳破仪器。(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗涤剂洗去污粉由碳酸钠、白土、细砂等组成，它与肥皂、合成洗涤剂一样,能去除油污和一些有机
2、物。由于去污粉中细砂的摩擦和白土的吸附作用，使得洗涤的效果更好。洗涤时，可用少量水将要洗的仪器润湿，用毛刷蘸取少量去污粉刷洗仪器的内外壁，最后用自来水冲洗。用去污粉、洗衣粉、洗涤剂洗这些洗涤剂可以洗去油污和有机物质。若油污和有机物质仍然洗不干净，可用热的碱液洗。（3）用铭酸洗液洗铝酸洗液是由浓硫酸和重锯酸钾配制而成的，具有很强的氧化性，对有机物和油污的去污能力特别强。使用锯酸洗液时要注意被洗涤的仪器内不宜有水，以免洗液被冲淡或变绿而失效。能用一般洗涤剂洗净的器皿，尽量不要选用洗液洗涤。（4）用特殊的试剂洗应根据沾在器壁上污物的性质，采用合适的方法或药品来处理。例如，沾在器壁上的二氧化镒用浓盐酸
3、处理；AgCI沉淀可以用氨水洗涤；硫化物沉淀可选用硝酸加盐酸洗涤等等。洗涤时应遵循“少量多次”的原则，一般以洗三次为宜。2.玻璃仪器的干燥可根据不同的情况，采用下列方法将洗净的仪器干燥：（1）晾干不急用的仪器在洗净后，可倒置在干净的实验柜内或仪器架上任其自然干燥。（2）烘干将洗净的仪器尽量倒干水后放入烘箱内烘干。放入烘箱前要先把水沥干，放置仪器时，仪器的口应朝下。吹干用吹风机或气流烘干器把仪器吹干。3.基本度量仪器的使用和滴定分析的基本操作1）量筒量筒是实验中经常使用的度量液体的仪器之一，常见量筒的容量有10mL、20mL50mL、IoomL、500InL等,可根据需要来选用。量取液体时，应用
4、左手持量筒，并以大拇指指示所需体积的刻度处，右手持试剂瓶，将液体小心倒入量筒。读取刻度时，应让量筒垂直，使视线与量筒内液面的弯月形最低点处于同一水平面上，偏高或偏低都会产生误差。量筒不能作反应器用，也不能装热的液体。2）滴定管滴定管是用来进行滴定的器皿，用于测量在滴定中所用溶液的体积。2酸碱滴定管滴定管一般分为两种，一种是酸式滴定管，另一种是碱式滴定管。各有白色、棕色之分。酸式滴定管的下端有玻璃活塞，可盛放酸液或氧化性溶液，不能盛放碱液，因为碱液会腐蚀玻璃，使活塞不能转动。盛放碱液时要用碱式滴定管，它的下端连接一橡皮管，内放一个比橡皮管管径稍大的玻璃珠作为开关以控制溶液的流出，橡皮管下端再连一
5、尖嘴玻璃管，这种滴定管不能盛放会腐蚀橡皮的溶液，例如酸或氧化性溶液等。滴定管洗涤：在洗涤前，应检查酸式滴定管的玻璃活塞与塞槽是否符合，活塞转动是否灵活。碱式滴定管下端连接一段橡皮管的粗细、长度是否适当，橡皮管的内管径应稍小于玻璃珠的直径，玻璃珠应圆滑，橡皮管应有弹性，否则难于紧固玻璃珠，操作时易上下移动而影响滴定。滴定管在用前必须仔细洗涤，当没有明显污物时，可以直接用自来水冲洗，或用滴定管刷蘸肥皂水刷洗（注意滴定管刷的刷毛必须相当软，刷头的铁丝不能露出，也不能向旁边弯曲，以免刷伤内壁），然后再用自来水洗去肥皂水。洗刷后的滴定管，应将其直立，使水流尽，若滴定管的内壁透明并不附着液滴，表示已洗净。
6、洗净后，滴定管用蒸储水淌洗三次，第一次用蒸储水IOnlL,第二次及第三次各用蒸储水5mL。每次加入蒸储水后，边转边向管口倾斜使蒸储水布满全管，并稍振荡，将管直立，使水流尽。在用自来水洗涤后，应检查滴定管是否漏水。检查酸式滴定管时，把玻璃活塞关闭，用水充满至“0”刻度线以上，直立约2分钟，仔细观察有无水滴滴下，有无水由活塞隙缝渗出。然后将活塞转180,再如此直立12分钟后观察有无水滴滴下或从活塞隙缝渗出。如果检查碱式滴定管，只需装水直立2分钟即可。如果发现漏水或酸式滴定管活塞转动不灵时，把酸式滴定管取下将活塞涂油，碱式滴定管则需换玻璃珠或橡皮管。活塞涂油时，把滴定管平放在桌面上，先取下活塞上的橡
7、皮圈，再取下活塞（拿在手上、放在干净的表面皿或滤纸上均可），用滤纸把活塞、活塞套、活塞槽内的水吸干，用手指粘少量凡士林擦在活塞两头，沿玻璃塞两端圆周各涂一薄层（如图3-6所示），但要避免涂得太多，尤其是在孔的近旁，油层要均匀涂满全圈，要尽可能薄些。涂完以后将活塞一直插入塞套中（不要转着插），插活塞时孔应与滴定管孔平行。然后向一个方向转动活塞，直到内外面观察时全部都透明为止。如果发现旋转不灵活，或出现纹路，表示涂油太多。遇到这些情况，都必须重新涂油。注意在套橡皮圈时，应该将滴定管放在桌上，一手顶住活塞大头，一手套橡皮圈或系橡皮圈，以免将活塞顶出。然后再用前面所介绍的方法检查是否漏水。按前述方法用
8、自来水冲洗干净以后，分别用蒸储水和标准溶液各洗涤两到三次。用标准溶液淌洗时，第一次用IOmL,第二次及第三次各用5mLo每次加入溶液后，也是边转边向管口倾斜使溶液布满全管，直立以后，打开活塞使溶液从管尖口放出。在放出时一定尽可能完全放尽，然后再洗第二次。但要特别注意，在装入标准溶液之前应先将试剂瓶中的标准溶液摇匀，使凝结在试剂瓶内壁的水混入溶液中(这在天气比较热或室温变化较大时更有必要)，混匀后，溶液应从试剂瓶中直接倒进滴定管，而不要经过其他器皿(如烧杯、漏斗、滴管等)。一定要注意，不要使溶液从试剂瓶移到滴定管的时候，改变它的浓度。滴定管读数：读取滴定管容积刻度的数值，称为读数。正确地读数是减
9、少容量分析实验误差的重要措施。读数时应遵守下列规则：(1)读数前应观察，管壁是否挂有水珠，管内的出口尖嘴处有无悬挂液滴，管嘴是否有气泡。读数时应把滴定管从滴定管架上取下，用右手大拇指和食指捏住管上部无刻度部位，使滴定管自然垂直，然后读数。每次装入溶液或放出溶液后，应等12分钟，待附着在管内壁的溶液流下后再读数。(3)对于无色和浅色溶液，应读取弯月面下缘实线的最低点，视线应与弯月面下缘实线的最低点相切。对于有色溶液，如KMnO4、12溶液等，视线应与液面两侧的最高点相切。若滴定管的背后有一条蓝线或带，无色溶液就形成了两个弯月面，并且相交于蓝线的中线上，读数时读此交点的刻度。滴定时，最好每次从0.
10、0OmL开始，或从“05mL”的范围内的任一刻度开始，这样可以减少体积误差。滴定管读数必须准确至0.OlmLo读取的读数立即记录在实验记录本上。滴定操作：使用酸式滴定管时，用左手控制活塞，大拇指在管前，食指和中指在管后，三指轻轻捏住塞柄，无名指和小指向手心弯曲，手心内凹，以防活塞被顶出造成漏液（如图3-9所示）。滴定时，右手握锥形瓶上部，将滴定管下端伸入锥形瓶口约ICnb然后边滴加溶液边向同一方向摇动锥形瓶。滴定的速度开始时可稍快，一般为34秒滴左右，但不能滴成水线，应呈“见滴成串”。接近终点时，应逐滴加入，即加一滴摇动后再加，马上到达终点时，应控制半滴加入，即将活塞稍稍转动，使半滴悬于管口，
11、用锥形瓶内壁将其沾下，再用洗瓶吹洗内壁，使附着的溶液全部流下，然后摇动锥形瓶。如此继续滴定至滴定终点为止。酸式滴定管的操作碱式滴定管的操作使用碱式滴定管时（如图3T0所示），左手捏住乳胶管，拇指在前，食指在后，其余三指辅助夹住出口管，用拇指和食指捏住玻璃珠中上部，向一边挤压玻璃珠外面的乳胶管，使玻璃珠和乳胶管之间形成一个狭缝，溶液即可流出。注意不要用力捏玻璃珠，也不要使玻璃珠上下移动，更不要捏玻璃珠下部的乳胶管，以免进入空气形成气泡，影响读数。4滴定通常在锥形瓶中进行，必要时也可以在烧杯中进行（如图3-11所示）。把烧杯放在实验台上，滴定管的高度应以其下端伸入烧杯内约ICnI为宜。滴定管的下端
12、应在烧杯的左后方处，如放在中央，会影响搅拌；如离杯壁过近，滴下的溶液不易搅拌均匀。左手控制滴定管滴加溶液，右手持玻璃棒搅拌溶液。玻璃棒应作圆周搅动，不要碰到杯壁和底部。接近终点加半滴时，可用玻璃棒下端轻轻沾下，再浸入烧杯中搅匀。3）容量瓶容量瓶是一个细颈梨形的平底瓶。瓶塞是带有磨口的玻璃在烧杯中滴定塞，细颈上刻有环形标线，瓶上标有容积（mL）和标定时的温度（一般为20）。在指定的温度下（一般为20）,当液体充满到标线时，液体体积恰好与瓶上所标的体积相等。容量瓶有10mL、25mL.50mL、100mL、250mL、1000mL200OmL几种规格,并有白、棕两色，棕色的用来配制见光易分解的试剂
13、溶液。容量瓶不能加热，磨口瓶塞是配套的，不能互相调换。容量瓶用于配制准确的一定体积的溶液。也用于标准的浓溶液稀释。在使用容量瓶之前，要选择好容量瓶：（1）要选择与所要求配制的溶液体积相一致的容量瓶。（2）要选择瓶塞与瓶口相符合、不漏水的容量瓶。选好容量瓶后，首先仔细检查有无裂痕破损，然后进一步检查瓶口与瓶塞间是否漏水。检查瓶口与瓶塞间是否漏水，可在瓶中放入自来水到标线附近，将瓶塞塞好，左手拿住容量瓶瓶口并用食指按住塞子，右手指尖顶住瓶底边缘，倒立2分钟左右，观察瓶塞周围是否有水渗出，如果没有，把瓶直立，转动瓶塞180。后，再倒立过来试一次。这样做两次检查是必要的，因为有时瓶塞与瓶口不是在任何位
14、置都是密合的。容量瓶在使用前要充分洗涤干净，无论用什么方法洗，绝对不能用毛刷刷洗内壁。洗涤时，盖好瓶塞，充分振荡，洗完后立即将瓶塞塞好，以免灰尘落入或瓶塞被污染。用容量瓶配制溶液时，如果是用固体配制准确浓度的溶液（或称标准溶液），一般是将固体物质称在大小适当的干净烧杯中，往其中加入少量的蒸储水或适当溶剂使之完全溶解。溶解过程不论放热或吸热，都需待溶液至室温时，才能定量地将溶液转入容量瓶中。转移时，要把溶液顺玻璃棒加入，玻璃棒下端要靠住瓶颈内壁，使溶液顺内壁流入瓶中。注意玻璃棒下端的位置最好在标线稍低一点的地方，不要高到接近瓶口，玻璃棒稍向瓶中心倾斜，烧杯嘴应靠近瓶口并紧靠玻璃棒，使溶液完全顺玻
15、璃棒流入瓶内，待溶液全部流尽后，将烧杯轻轻向上提（烧杯嘴口仍应紧靠玻璃棒），同时直立，使附着在玻璃棒与烧杯嘴之间的溶液流入烧杯中或容量瓶内，然后先把玻璃棒放入烧杯中，才能把烧杯拿开放在桌上，用洗瓶吹水洗涤烧杯内壁和玻璃棒接触到溶液的部分3次，每次用水应尽量少些为宜，每次洗涤的水溶液应无损地转入容量瓶中。然后慢慢加蒸储水至接近标线稍低ICrn左右，等12分钟，使黏附在瓶颈内壁的水流下后，再用细而长的滴管加蒸储水恰至标线，这一过程称为定容。用滴管加水时，视线要平视标线，然后将滴管伸入瓶颈使管尽量接近液面，稍向旁倾斜，使水顺壁流下，注意液面上升，滴管应随时提起，勿使溶液接触滴管，直到弯月而下缘最低点
16、与标线相切为止。定容以后，塞好瓶塞。左手拇指在前，中指、无名指及小指在后拿住瓶颈标线以上部分，右手托住瓶底。如果容积小于IOOmL的容量瓶，就不必用右手托住容量瓶瓶底，以免由此造成的温度变化对小体积产生较大的影响。将容量瓶倒转，使气泡上升到顶，再充分振荡，如此反复35次，即可摇匀。容量瓶不能久贮溶液，尤其是碱性溶液会侵蚀瓶塞，使瓶塞无法打开，配制好溶液后，应将溶液倒入清洁干燥的试剂瓶中贮存。容量瓶不能用火直接加热及烘烤。54）移液管、吸量管用于准确移取一定体积的溶液的移液管，通常有两种形状，一种移液管中间有膨大部分，称为胖肚移液管（胖肚吸管），常用的有5mL、10mL、25mL、50mL等几种
17、;另一种是直形的，管上有刻度，称为吸量管（刻度吸管）,常用的有ImL、2mL、5mL、IOmL等多种（如图3-15所示）。移液管和吸量管洗涤移液管移液管的使用用移液管或吸量管移取溶液前，先将用蒸储水洗净过的移液管或吸量管用少量被移取的溶液淌洗23次，以免被移取溶液的浓度发生改变。为此，可倒少许溶液于一洁净而干燥的小烧杯中，用移液管吸取少量溶液，将管横向转动，使溶液流过管内标线下所有的内壁，然后使管直立将溶液由尖嘴口放出。吸取溶液时，一般可以用左手拿洗耳球，右手把移液管插入溶液中吸取。当溶液吸至标线以上时，马上用右手食指按住管口，取出并用滤纸擦干下端，并把管尖接触于干净小烧杯壁上。然后转动移液管
18、，稍松食指，使液体平稳下降，直至溶液的弯月面与标线相切，立即按紧食指，将移液管垂直放入接受溶液的容器中，管尖与容器壁接触（如图3T7所示），放松食指，使溶液自由流出，流完后再等15秒左右，残留于管尖的液体不必吹出（刻“吹”字的移液管例外），因为在校正移液管时，也未把这部分液体体积计算在内。移液管使用后，应立即洗净并放在移液管架上。4.药品的取用方法1）液体试剂的取用从滴瓶或者试管、锥形瓶等中取液体，使试剂滴入试管中（如图3-30所示），试管应垂直不要倾斜。滴管或移液管尖决不能伸入所用容器中，以免触及器壁而沾污药品；装有试剂的滴管或移液枪不能平放或管口向上斜放，以免试剂倒流腐蚀。倒入试管里液体的
19、量一般不超过其容积的l3o正确不正确2）固体试剂的取用把瓶塞盖严，绝不允许将瓶塞张冠李戴。然后把试剂瓶放回原处，以保持实验台整齐干净。（2）要用清洁、干燥的药匙取试剂。用过的药匙必须洗净擦干后才能再使用。（3）注意取药不要超过指定用量，多取的不能倒回原瓶，可放在指定的容器中供他人使用。（4）一般固体试剂可以放在干净的纸或表面皿上称量。具有腐蚀性、强氧化性或易潮解的固体试剂应放在表面皿或玻璃容器内称量。（5）往试管（特别是湿的试管）中加入固体试剂时，可用药匙或将取出的药品放在对折的纸槽上，伸进试管约2/3处，小心地将药品倒入试管内。加入块状固体试剂时，应将试管倾斜，使其沿着试管壁慢慢滑下，以免碰
20、破试管二、常用仪器及设备的使用：L移液枪（微量移液器）使用方法：1）选择适当的微量移液器：不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围，请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。QY10020u100ulQY20050u200ulQY1000100u1000ul2）设定体积：设定体积时，请勿将体积调整圈转到超过最低或最高的使用范围，以免损坏移液枪。3）套上微量移液器头，吸取溶液：吸取溶液时，尖端请先套上微量移液器头（枪头），QYlOOO使用蓝色微量移液器头，QY200及QYlOo使用黄色微量移液器头。标准操作：适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。1）按到第一档，垂直进入液面几毫米。2）缓慢
21、松开控制按钮，否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸人移液器内部吸人体积减少。3）打出液体时贴壁并有一定角度，先按到第一档，稍微停顿1后，待剩余液体聚集后，再按到第二档将剩余液体全部压出。适用的液体：黏稠或易挥发液体在移取黏稠或易挥发的液体时，很容易导致体积误差较大。为了提高移液准确性，可以采取以下方法：1）移液前先用液体预湿吸头内部，即反复吸打液体几次使吸头预湿，吸液或排出液体时最好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体，建议将吸头预湿后再移取。2）采用反相移液法：吸液时按到第二档，慢慢松开控制按钮，打液时按到第二档，部分液体残留在吸头内。3）适当加热液体，使其易于吸取。使用注意事项：1）勿将微量
22、移液器本体浸入溶液中。2）吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确（应该垂直吸液，慢吸慢放）。3）吸取黏度高之试液，请先将微量移液器头尖端以刀片或剪刀将出口切大，并先行预润后再吸取。4）用大量程的移液器移取小体积样品（应该选择合适量程范围的移液器）。直接按到第二档吸液5）吸取酸液或具腐蚀性溶液后，请将微量移液器拆解开，各部位零件以蒸储水冲洗干7净，擦干后再正确组合回tg原状。6）微量移液器的任何部份切勿用火烧烤，亦不可吸取温度高于70的溶液，避免蒸气侵入腐蚀活塞。7）套有微量移液器头的微量移液器，无微量移液器头中是否有溶液，均不可平放，需直立架好。2.分析天平及电子天平的使用方法:1）事先检查电
23、源电压是否匹配（必要时配置稳压器），接通电源并预热使天平处于备用状态。并检查并调整天平至水平位置。2）预热足够时间后打开天平开关，天平则自动进行灵敏度及零点调节，使天平处于零位，否则按去皮键。待稳定标志显示后，可进行正式称量。3）称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上，关上侧门，轻按一下去皮键，天平将自动校对零点，然后逐渐加入待称物质，直到所需重量为止。记录读数。4）将称量瓶或称量纸拿出，转移所称量物质至锥形瓶或烧杯，将称量纸扔到垃圾桶，称量瓶清洗干净。按天平去皮键清零，以备再用。5）称量结束后，或者关上侧门，切断电源，并做好使用情况登记。分析天平及电子天平使用注意事项：1）在使用前调整水平仪气
24、泡至中间位置。2）电子天平应按说明书的要求进行预热3）称量时应从侧门取放物质，读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。前门仅在检修或清除残留物质时使用。4）称量易挥发和具有腐蚀性的物品时,要盛放在密闭的容器中，以免腐蚀和损坏电子天平。5）操作天平不可过载使用以免损坏天平.目前我们所用天平最大量程为200g.3.722S分光光度计使用方法：D预热：开机后灯及电子部分需预热平衡，故一般开机20min后可开始测定。2）调波长：用旋钮调节，波长显示窗读数时目光垂直观察。3）调零及调100%T进入测试状态。操作：打开样品槽盖，按100%键，即可自动调整到零位。盖好盖按下“100%T”即可自动调100%
25、。（注：调100%可能影响0%,调整后请检查0%,如有变化可重调0%一次）。4）改变样品槽位置让不同样品进入光路。槽有四位置，用拉杆改变，离测试者最近为“0”,依次为“1”、“2”、“3”位置。将空白放入“0”号位置，盖好盖子，按100%键调零，拉动拉杆，可依次读取“1”、“2”、“3”位置各管吸光度值。5）确定滤光片位置：当测试波长在340380nm内作高精度测试可将拨杆推向前，通常不用此滤光片，可将其置于40（000nm处。6）改变模式透射率：用于透明液体和固体测量透射测量。吸光度：用于标准曲线法或绝对吸收法定量分析，在作动力学测试时可使用。浓度因子：用于在浓度因子法浓度直读时设定浓度因子
26、。浓度直读：用于标样法浓度直读时，作设定和读出。注：各标尺的转换用MODE键并由各自指示灯指示。注意事项：1）操作应轻缓，不要将样品溶液弄到仪器上82）不要用手拿比色皿的光面3）比色InL用毕应及时清洗干净4.METLERDELTA320pH计使用方法：1）打开电源开关，进入测量状态。2）校正：长按“模式”键，进入“Prog”状态，按“模式”进入b=2,按八或V选择b=l或b=3,LCD会逐一显示盖缓冲溶液组内的缓冲溶液PH值，按“模式”确认，按“读数退回正常测量状态。3）将电极放在一个标准缓冲液中并按“校正”，仪表将显示相应缓冲液pH。4）用去离子水冲洗电极，将电极放入下一个标准缓冲液中，重
27、复3,进行两点或三点校准，仪器更新零点和斜率，标定完成，按“读数”退回测量状态。5）用蒸储水清洗电极头部，用被测溶液再洗一次，把电极浸入被测溶液中，再用玻璃棒搅拌，使溶液均匀，按“读数”键测量，仪器稳定后显示A,在显示屏上读数即溶液的PH值。6）测量结束，及时将电极保护套套上。注意事项:1）一般情况下，24h内仪器不需再标定。2）电极保护套内及时补加3MKC1,切忌浸泡在蒸微水中，防止干涸。3）仪器PH测量范围为014.00,温度范围为-5T05C,精确度0.01pH.ImVo4）如果斜率下降、响应速度慢或电极膜干涸，将电极头浸入0.IMHCl中过夜。5.SigmaSK-30低温高速冷冻离心机
28、操作方法：操作步骤：D装好所需转子：本实验室Sigma离心机配有两个型号的转子：12150-H,容量6某140g,最高转速21000转/min；12154-H,容量24某5g,最高转速26000转min,离心中，一定要注意，转子和转头要同一型号。用专用扳手拧紧转轴螺母，盖好同型号转子的盖子，拧紧。2）设置参数：打开机身背侧电源开关，机身前面面板有数字显示，转动调节旋钮，可在面板上“DREHZAHL”（离心速度，rpm）、“RZB”（相对离心力，某g）ZEITw（离心时间）、“TEMP”（离心温度）、“ROTOR（转子选择）等显示栏之间选择，选择需设定参数，按下调节旋钮，SET，同时被选择，转动
29、调节旋钮，设定温度、离心速度、时间、转子型号等参数，盖好离心机盖门，等待降温。3）离心：温度达到所需温度后，打开离心机盖门，拧开盖子，放入已经平衡过的离心样品，拧紧盖子，关闭离心机盖门，启动按钮和开盖按钮亮。按下启动按钮，开始离心。4）等离心机完全停下，开盖指示灯亮后，打开离心机，取出样品，盖好盖子，关闭离心机。如果在离心过程中，发现有异常情况，立即按下“停止”按钮，如不能完全停止，可关闭电源，等待离心机完全停止。注意事项：1、本设备最大离心力可达600OOg以上，离心转速范围10030000rpm（依据转头型号确定），设置不能超过最大转速，设定步长Irpm,温度范围-20C-+40,最大功率
30、1300肌2、离心前，一定要平衡，对称放置，离心期间，不得离人。9实验二氨基酸纸层析法一、实验目的学习纸层析法的基本原理和方法二、实验原理氨基酸混合液经纸层析，由于不同的氨基酸有不同的分配系数,移动速度不同,从而达到分离。经显色后,与标准氨基酸图谱比较或与氨基酸的标准Rf值比较,可辨别各种氨基酸。三、实验仪器（器材）层析缸、分液漏斗、吹风机、毛细管。四、实验试剂和材料试剂：扩展剂：正丁醇:88%甲酸:水=15:3:2（体积比）0.2%苛三酮正丁醇显色液：几种氨基酸标准溶液（0.5%）氨基酸混合液材料：新华滤纸五、实验流程画线（下沿1.5Cm）标记样点（L5cm一个）配制扩展剂取样点样练习（选好
31、毛细管）点样卷纸筒取扩展剂（放于培养皿）放滤纸于层析缸，盖好扩展（3小时）配染色剂取滤纸剪纸、吹干染色吹干量各样品移动距离结果分析。六、主要实验环节1、扩展剂的配制及层析缸饱和：将配好的溶液倒入分液漏斗,等分层后,放掉下部水层,再把展开剂放入培养皿,使液面达培养皿高度的一半,把它放入层析缸进行饱和。2、记号：取层析纸一张（12某24CM）o在纸的一端距边缘2厘米处用铅笔划一条直线,在此直线上每间隔1.5厘米作一记号,共6个记号。3、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这六个位置上,干后再点一次。每点在纸上的扩散直径最大不超过3毫米。4、扩展：用线将滤纸缝成筒状,纸张两边不能接触,不能用手触碰滤
32、纸中部。将盛有扩展剂的培养皿迅速的置于密封的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下,扩展剂的液面需低于点样线）到溶剂上升15-20厘米时即取出滤纸,用铅笔描绘出溶剂前沿线，自然干燥或用吹风机热风吹干。5、显色：用喷雾器均匀的喷上0.2%的苛三酮正丁醇溶液；然后置于烘干箱烘干5分钟就可显现出各个层析斑点七、结果及分析绘出氨基酸层析图,标明混合样各成分的名称,计算各个氨基酸的迁移率,并分析说明。八、注意事项(1)点样要适量,不宜太多,样点直径不超过03厘米。(2)点样毛细管,一样一支,不要重复使用。九、思考题为什么扩展剂要用两种溶剂系统？实验三蛋白质的沉淀反应一、实验目的：熟悉和掌握蛋白质沉淀的相关原理。二、实验原理：10
