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1、报春苣苔组培快繁技术规程地方标准编制说明一、标准研制的必要性苦苣苔科(Gesneriaceae)在全世界约有160属3800余种，主要分布在亚洲东部和南部、非洲、欧洲南部、大洋洲、南美洲至墨西哥等热带至温带地区。我国是苦苣苔科植物主要分布中心之一，截止20XX年08月29日，我国自然分布的苦苣苔科植物已记载有2族14亚族45属796种(含种下等级)，其中特有属10个，单型属11个。我国苦苣苔科植物的分布和特有中心是滇黔桂及其相邻地。XX西靠云贵高原，南部濒临海洋，地势西北高、东南低，境内群山环绕，岩溶地形广泛发育，有着典型而复杂多变的喀斯特地貌。全区地跨热带和亚热带，属亚热带季风性气候。独特的
2、喀斯特地貌环境和气候条件为苦苣苔科植物的生长提供了多样的生境。截止到2020年11月，XX拥有的苦苣苔科植物属数为33属，占全国总属数的73.33%,仅次于云南(75.56%),高于贵州(62.22%),排全国第二；拥有的种的数量达320种，占全国总种数的40.71%,高于云南(35.88%)和贵州(19.47%),位居全国第一。报春苣苔属QPriinUIina)是苦苣苔亚科植物中物种多样性极其丰富的属，适生能力强，在花色、花型、花量、株型、叶色、叶纹等方面具有极高观赏价值，是极具发掘潜力的花卉资源，产业前景广阔。其对荫蔽环境的适应性很高，大部分种类喜阴湿环境，这种独特的生长习性使其非常适宜作
3、室内观赏花卉，对于庭园活动空间日渐缩小，诸多喜阳植物在人们家庭中较难生存而言，种养报春苣苔是一个十分不错的选择。长久以来，市场上流行的报春苣台属盆栽绝大部分源自原始挖掘，对环境和资源破坏很大。因此,开展人工繁育技术研究，建立完善成熟的繁育技术,形成标准化、规范化的种苗生产技术，对缓解市场需求、保护环境和资源具有重要意义。报春苣苔属植物可用种子播种和叶片杆插繁殖等方式。但种子繁殖常受种源及发芽率的影响，而托插繁殖则存在速度慢(产生新子株的时间长，一般需要3个月以上)，繁殖系数小，成苗质量不整齐的缺点，很难满足商品化的生产的缺点。而组培快繁具有周期短、繁殖系数大，易成规模，繁殖后代品质优良的优点，
4、是人工繁殖的有效途径之一。形成报春苣苔组培快繁技术规程，有利于其种苗规模化生产，对其产业的发展具有重要促进作用。目前国家暂无该属植物的相关标准，我区亦无该属植物的标准颁布。国家标准中，仅有主要花卉产品等级第2部分：盆花涉及了苦苣苔科大岩桐属植物的盆花质量等级划分。在XX地方标准上，已有重瓣大岩桐组培快繁技术规程(DB45/T1587)、重瓣大岩桐盆花生产技术规程(DB45/T1586)两套标准颁布实施。大岩桐和报春苣苔属植物为同科不同属的物种，原产地也不同，栽培方式、繁殖方法也有差异。本标准的拟定、颁布填补了这一空白。二、任务来源和承担单位根据X市监函(20XX)2199号文件XX区市场监督管
5、理局关于下达20XX年第二批XX地方标准制修订项目计划的通知，报春苣苔组培快繁技术规程列入20XX年XX地方标准制定计划中，序号为20XX-2095,是由XX区农业农村厅提出，起草单位为XX区农业科学院花卉研究所。三、编写标准的原则和技术依据（一）原则1 .以科学、准确、权威为指导思想，坚持可靠性、准确性和实用性原则。标准起草过程中，查询了大量的国内技术资料，凝练了编制者多年的试验，并参考了我国近十多年来的科学实验结果。结合苦苣苔产业当前和长远发展需要，考虑我区现有基础，兼顾将来发展，提出的技术既有科学性、先进性，又有实用性，可操作行强。2 .坚持先进性、规范性原则本标准属首次编制，采取了严肃
6、认真态度注意反复推敲和斟酌，通过广泛征求意见，合理采纳同行专家的宝贵意见,采纳国内标准中的合理、适宜的内容，保证内容和条款的先进性和规范性。编写过程中，严格按照GB/T1.1标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则，结合调研和试验研究的结果，组织标准的起草工作。3 .坚持尽量收集报春苣苔相关组织培养技术，使本标准的技术方法具有更好的可操作性，可以作为政府部门监督、指导生产的依据，在生产上切实可行。（二）技术依据本标准按照GB/T1.1标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草，参考NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程等相关标准，应用前期研究成果、参考国内文献资料
7、，确定本标准的指标设置和各项指标要求。四、主要工作过程标准制定项目计划下达后，标准起草单位组织主要编写人员对报春苣苔组培快繁技术规程的总体技术要求进行了讨论，研究制定了标准工作方案、技术路线、主要研究方法，标准的具体格式，确定了标准的总体框架和制定原则，明确了标准制定的具体工作计划和进展。主要工作过程如下：1 .前期研究20XX年开始对报春苣苔属进行组培快繁研究，以叶片获种子为外植体，开展附加了不同植物生长调节剂的培养基对不定芽诱导、增殖培养、壮苗培养、生根培养的对比实验，筛选出各培养阶段的适宜培养基,建立其离体快繁体系。结果表明：不同种类的报春苣苔在各培养阶段的最佳培养基有所不同，可具体参考
8、以下文章或专利技术:永福报春苣苔离体快繁体系的建立、贵港报春苣苔的叶片组培与植株再生、黄花牛耳朵离体叶片不定芽的诱导及植株再生、褐纹报春苣苔组织培养与快速繁殖、羽裂报春苣苔的组织培养研究、17种报春苣苔属植物的组培苗移栽季节研究、一种微斑报春苣苔的无菌播种和组织培养方法。目前为止已开展了60个原生种以及30个园艺种的报春苣苔属组培快繁研究。通过开展组培实验，积累了丰富的实验经验，收集了大量的实验数据，并形成了成熟完善的组培技术，发表报春苣苔组培快繁技术相关论文7篇。同时该技术率先在本单位进行了应用，取得了良好的效果。此外，20XX年已完成了2项苦苣苔科植物的XX地方标准的编制并获颁布实施:重瓣
9、大岩桐组培快繁技术规程(DB45/T1587)、重瓣大岩桐盆花生产技术规程(DB45/T1586)o大量的实验经验、实验数据以及两项标准的颁布实施为报春苣苔组培快繁技术规程的制定奠定了良好的基础。2 .人员组织标准任务下达后，我们积极组织技术骨干成立标准编制工作小组，工作组成员具有较丰富的专业知识和实践经验，熟悉业务，了解标准化工作的相关规定并具有较强的文字表达能力。工作组成立后，制定了工作计划，明确了内部分工及进度要求，责任落实到人，具体人员分工(见表1)。表1主要编制人员与责任分工姓名工作单位职称编制分工XX区农业科学院花卉研究所副研究员主笔、规程编制XX区农业科学院花卉研究所助理研究员产
10、技术实施，试验研究XX区农业科学院花卉研究所助理研究员生产技术实施，试验研究XX区农业科学院花卉研究所高级工程师总体协调，协助主笔XX区农业科学院花卉研究所高级工程师资料收集整理XX区农业科学院花卉研究所研究员技术指导、监督3.文献资料的收集、调研和分析为了制定好报春苣苔组培快繁技术规程，我们首先收集和查阅了报春苣苔属植物的组织培养等方面的相关材料，其中包括我国在20XX年颁布的NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程、20XX年XX颁布的重瓣大岩桐组培快繁技术规程(DB45/T1587),XX农业科学院花卉研究所闫海霞发表的永福报春苣苔离体快繁体系的建立、贵港报春苣苔的叶片组培与植株再生、黄
11、花牛耳朵离体叶片不定芽的诱导及植株再生、褐纹报春苣苔组织培养与快速繁殖、羽裂报春苣苔的组织培养研究、17种报春苣苔属植物的组培苗移栽季节研究、一种微斑报春苣苔的无菌播种和组织培养方法等国家、地方标准、论文、发明专利。通过对资料的广泛收集、整理、调研和分析，并组织标准起草组人员多次讨论分析，广泛收集和听取区内外同行专家学者的意见，最终确定了标准的制定原则和主体框架。4.标准的起草借鉴NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程等资料的基础上，以XX农业科学院花卉研究所多年积累的报春苣苔组培快繁技术作为制定标准的基础，为使标准更具适宜性、实用性和可操作性，在充分酝酿讨论的基础上，我们为报春苣苔组培快繁
12、技术标准的组织培养方法、组培苗移栽、质量要求以及包装、标签和运输等确定了相关技术。在确定了技术标准内容的基础上，我们GB/T1.1标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则，于20XX年12月完成了报春苣苔组培快繁技术规程（征求意见稿）标准文本的起草工作。五、标准主要指标的确定1 .外植体的消毒和灭菌取无病虫害、生长健壮植株的幼嫩获成熟叶片，经洗衣粉获洗洁精浸泡10-30min后在流水下冲洗10-30min,然后转移到超净工作台上进行灭菌操作。先用棉球蘸取75%乙醇溶液拭擦叶片正面和背面，无菌水冲洗2-5次；再将叶片在75%乙醇溶液中浸泡1020s,无菌水冲洗3-5次；最后用0.1%氯
13、化汞溶液浸泡，如仅浸泡1次，则时间为8T0min,浸泡后用无菌水冲洗3-5次，如果进行两次浸泡，每次浸泡时间为6min,每次浸泡后用无菌水冲洗3-5次。乙醇溶液和氯化汞溶液浸泡过程中要轻轻震荡使灭菌剂充分接触叶片。在接种盘内将叶片切成13cm3CnI大小的叶块，以备用。表1不同种类报春苣苔的外植体处理方法种外植灭菌刖75%酒75%酒0.1%升汞切成类体处理精拭精浸泡浸泡时间擦时间(min)（S）褐幼嫩洗衣粉酒精10-12sIOmin1cm纹叶片浸洗棉球无菌水无菌水冲1报（春IOmin,拭擦冲洗5洗5次cm春季）流水冲后用次苣洗30Inin无菌苔水冲洗5次永成熟洗洁精酒精8-10s浸泡2次，23
14、福叶片800倍液棉球无菌水每次6cm报浸泡10拭擦冲洗5min,每次23春min,流后用次浸泡后用cm苣水下冲无菌无菌水冲苔洗10水冲洗5次min,洗2次羽叶片洗衣粉酒精20s浸泡2次，3cm裂溶液浸棉球无菌水每次63报泡25拭擦冲洗3min,每次cm春30min,后用次浸泡后用苣流水下无菌无菌水冲苔冲洗30水冲洗3次min洗3次贝幼嫩直接流酒精IOs8港叶片水下冲棉球无菌水无菌冲洗报洗1015拭擦冲洗55次春min后用次苣无菌苔水冲洗5次黄花牛耳朵幼嫩叶片2 .初代培养将切好的叶片按叶片初代培养基中。经过26-50d的培养后，发现在培养基上添加了一定浓度的植物生长调节剂有利于不定芽的诱导，并
15、可形成不定芽。适宜的不定芽诱导培养基为MS+1.0-4.5mg1.16-BA+0.01-0.25mg1.1NAA,获得的不定芽长势良好。培养基中虽有添加IAA,但IAA不能高温灭菌，在一定程度上增加了操作的繁琐性，因此，建议培养基中不添加IAA。表2不同种类报春苣苔的初代培养种基6-BANAAIAA诱导率口外类本培养基(mg1.)(mg1.)(mg1.)(%)时间(d)褐纹报春苣苔MS2.00.1089.6730永福报春苣苔MS3.00.25090.0026羽裂报春苣苔MS1.0-2.00.01-0.10100.0050贝港报春苣苔MS4.001.5100.0040黄花牛耳朵MS4.50.03
16、093.67403 .增殖培养将从叶片诱导得到的不定芽切取下来，以单个芽形式接入增殖培养基中。培养30d后，发现适宜的不定芽增殖培养基为：MS+2.0mg1.T6-BA+0.05mg1.TNAA或MS+1.03.0mg1.TZT+0.050.1mg1.TNAA或MS+1.03.0mg1.1ZT+O.25mg1.TIBAo添加物的增加虽然可以提高增殖系数，但是也提高了成本上,在工厂化成产中，降低成本也是生产的目的之一，故不建议在培养基中增加添加物。表3不同种类报春苣苔的增殖培养种类基本培养基6-BA(mgDZT(mg1.)(mg1.)NAA(mg1.)IBA(mg/1.)活性炭(g1.)增殖系数
17、附加物培养时间(d)褐纹报春苣苔MS02.000.1000.0511.09无30永福报春苣苔MS01.0-3.0000.25012.47-13.07无30羽裂报春苣苔MS2.0000.0500.18.61无20货港报春苣苔MS01.000.10008.55土豆、香蕉、苹果(g/1.)：3030、30、20.椰汁Gn1./1.)：100黄花牛耳朵MSOO3.001.009.82无304 .壮苗培养由表4可以看出，在试验的5种报春苣苔中，仅永福报春苣苔有壮苗培养这一阶段。在实际的工厂化生产中，为缩短组培周期以及生产成本，可以省略此步骤。表4不同种类报春苣苔的壮苗培养种类基本工口介基6-BA(mg1
18、.)NAA(mg1.)活性炭(g1.)培养时间(d)褐纹无报春永福1/2MS00.10.130报春苣省羽裂无报春苣告贵港无报春苣省黄花无牛耳朵5 .生根培养将具有2对以上叶片的植株以单株形式接入生根培养基中。培养30d后，发现4种报春苣苔的适宜的生根培养基为1/2MS+0.1-0.5mg1.1IBA+0.05-0.50g-1.1活性炭或MS+0.5mg1.1IBA+0.Ig-1.1活性炭。由于贵港报春苣苔的生根基本培养基配制较为繁琐，为简便环节,故不采用该培养基配方,在实际实验中，贵港报春苣苔的生根基本培养基采用1/2MS也可取得良好的生根效果。表5不同种类报春苣苔的生根培养种类基本it#基I
19、BA(mg/1.)NAA(mg/1.)活性炭(mg/1.)!令苦J口分时间(d)生根率(%)褐1/2M0.1或00.0530100.0纹S0.50报春苣苔永1/2M0.300.5030100.0福S0报春苣苔羽MS0.500.1040100.0裂0报春苣苔贝3/400.01-0.01.00-3.040100.0港MS500报春苣苔黄1/20.3003094.67花MS牛耳朵6 .炼苗移栽将生长健壮、生根良好（根数7条以上、根长3cm）.具有2对以上叶片的组培苗，移出培养室后揭盖在温室中炼苗510do将组培苗小心取出并洗净培养基，用50%多菌灵可湿性粉剂1000倍溶液浸泡1015min,取出后在
20、阴凉处晾置IOnIin,再移栽到装有基质（腐殖土和粗沙的体积比为2:1或泥炭和珍珠岩的体积比为2:1）的50孔穴盘中,并浇透定根水。15-2Od后,成活率达100.00%o7 .环境条件各培养阶段的培养温度为2528C,光照强度为3000IX5000Ix,光照时间为12hd1;炼苗的环境条件为温度1530C,光照强度500O1.XIOOOoIX,移栽的环境温度：1530C,空气相对湿度：70%80%,用遮光率为70%的遮阳网遮阴。六、与现行法律、法规和强制性标准的关系本标准制定是遵循中华人民共和国标准化法等国家相关的法规和强制性标准，结合我区实际情况制定的，与现行法律、法规及强制性标准无冲突。起草单位承诺本标准的技术要求不低于强制性国家标准的相关技术要求。
