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1、HlV抗体初筛实验室风险评估报告I时间2022.03.10|创作：欧阳治1 ,阳古目的获得性免疫缺陷综合症(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的严重威胁人类健康的性传播疾病，临床实验室工作人员每天处理着大量血液标本，因此他们面临着严峻的HlV职业暴露危(Wei)险，保护临床检验人员的健康，已成为迫切需要解决的问题。此次评估的主要目的是在实验活动中根据HIV可能对个体或者群体或者实验环境造成危害的高低来制定相应措施的安全防范制度和操作程序，选择相应等级的生物实验室及设备配置，实验人员使用相应措施的防护措施和使用相符的安全防护设备，以及在发生意外泄漏或者意外事故时能及时采取有效措施，
2、来达到确保实验工作人员不被感染和实验环境不被污染的目的。2 .评估依据2.1 病原微生物实验室生物安全管理条例2.2实验室生物安全通用要求GB19489-20222.3人间传染的病原微生物名录2.4WHO实验室生物安全手册2.5 艾滋病防治条例2.6 中华人民共和国传染病防治法2.7 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本运输管理规定2.8 全国艾滋病检测技术规范2022年修订版3、危害程度分类3.1 分类等级在卫生部发布的人间传染的病原微生物名录中将此病毒列为第二类病原微生物，属能引起人和灵长类动物发病逆转录病毒科的慢病毒属，但普通情况下对未与HIV无症状携带和艾滋病患者有性接触和
3、血液传播的健康工作者、群体、家畜或者环境不会引起危害的病原微生物。3.2 不同实验操作生物安全实验室级别要求HlV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合II级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。本实验室是HlV初筛实验室，应用ELISA方法进行HIV抗体筛查。根据名录的规定，未经培养的感染材料的操作可在BSL-2实验室进行。4、生物因子的特性4.1 HIV在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。迄今为止，根据血清学反应和病毒核酸序列测定，全球流行的HIV可分为2型：HIV1型和HIV2型。在HIVl型内，根据编码包膜蛋白的en
4、v基因和编码壳蛋白的gag基因序列的同源性又进一步分为3个组：M组（主要组）、O组（外围组）和N组（新组或者非M非O组），M组内又可分为AJ10个亚型。在HIV1型和HIV2型之间，其核昔酸序列有45%的同源性，并且存在免疫交叉反应。应用免疫印迹法（WeStblot）可以将二者明确地区别开来。4.2 环境中的稳定性：HlV对理化因素反抗力较弱，56加热30min可被灭活，但在室温下可存活7天。经化学消毒剂0.5%次氯酸钠、10%漂白粉、50%乙醇、0.3%H2O25%来苏儿处理IOmin可被灭活。紫外线对该病毒无杀灭作用。4.3 变异性：HIV基因组可发生变异，最易发生变异的基因编码包膜糖蛋白
5、env和调节基因nefc,根据env基因序列异同可将HIV-1型分为A、B、C、D、E、F、H、08个亚型。EnV的变异率为千分之一。4.4 传染源：主要的是HlV携带者及AlDS患者。4.5 传播途径：主要通过血液传播、母婴传播、性传播、医源性感染。4.6 易感性：免疫功能低下者、结核病患者、器官移植者、输血及用血液制品者、性滥者、同性恋、吸毒者高危性人群易感。4.7 潜伏期：是从HIV感染到浮现艾滋病临床症状和体征的时间。平均潜伏期（50%的HlV感染者发展到艾滋病期的时间）为7年8年。在感染后的普通需要2-12周，平均45天摆布血液中才可检测到HlV抗体。从感染到机体产生抗体的这一段时间
6、检测不到HIV抗体，医学称之为窗口期。在窗口期虽测不到HIV抗体，但若被感染，体内同样有HlV病毒，同样具有传染性。4.8 剂量-效应（反应）关系：血液中HlV浓度达1.00x104拷贝/ml,被HIV污染环境的锐器剌伤而感染的比率为0.3%；可致人患艾滋病4.9 致病性：HIV病毒侵入人体后，其表面糖蛋白gpl20与细胞表面受体蛋白CD4以高亲和力结合，吸附到宿主细胞上；gpl20再与宿主细胞表面辅助受体相互作用，使病毒与宿主细胞膜更接近；gp41产生一系列构象变化，其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜，导致病毒包膜与细胞膜的最终融合，病毒RNA进入细胞。在HlV感染后，最先能够监测到病毒RNA
7、、然后是p24抗原，最后是抗体。在感染后的1014d内，病毒RNA水平是呈指数上升，随后下降并保持在持续稳定的水平上，进入HIV无症状期。p24抗原水平随着病毒RNA水平的发展而发展，在急性感染期就可以浮现，被认为是病毒复制的间接标志，但由于检测方法的灵敏度不够而使得其检出时间要比RNA晚。从HlV感染到能够检测出HlV抗体这一时期，被称作“窗口期”。在窗口期，能够通过病毒RNA、p24抗原和CD4淋巴细胞水平来确定HIV感染。CD4淋巴细胞水平随着感染的发展而逐渐下降，当其在血液中细胞下降到200个mL时，就会发生严重的免疫缺陷，患者就被确诊为艾滋宿主范围：宿主范围较为广泛。5、流行病学、诊
8、断、治疗和预防5.1 流行病学自1981年美国首次报告艾滋病以来,被西方人成为“20世纪的瘟疫”。这种病以侵袭人体免疫细胞CD4为主，造成细胞免疫功能缺陷,并继发体液免疫功能缺陷。自1985年我国首次报导例以来艾滋病在我国的流行呈逐年上升的趋势，目前已进入快速增长期。随着艾滋病流行趋势的日益严重，临床就诊的患者也越来越多，患者和无症状病毒感染者是本病的传染源。病毒主要存在于感染者的血液、精液、子宫和阴道分泌物中，也可在乳汁、唾液、尿液和眼泪中分离到病毒，但以血液、精液、子宫和阴道分泌物中的病毒滴度最高，而其他体液（唾液、尿液和眼泪）由于病毒滴度低而不足以构成传染。高危人群有静脉注射毒者、性病患
9、者、暗娼、HlV感染者的婴儿、部份有偿供血者、多次输血和血制品者及血透者。HIV传播的先决条件为大量而完整的传染性病毒进入易感者的恰当门户,感染HIV的可能程度取决于接触患者体液的机会、接触次数、病毒量以及是否采取保护措施。5.2 临床表现从感染艾滋病病毒到发病有一个完整的自然过程，临床上将这个过程分为四期：急性感染期、潜伏期、艾滋病前期、典型艾滋病期。不是每一个感染者都会完整的浮现四期表现，但每一个疾病阶段的患者在临床上都可以见到。5.2.1 急性感染期窗口期也在这个时间。HIV侵袭人体后对机体的刺激所引起的反应。病人发热、皮疹、淋巴结肿大、还会发生乏力、出汗、恶心、呕吐、腹泻、咽炎等。有的
10、还浮现急性无菌性脑膜炎，表现为头痛、神经性症状和脑膜刺激症。522潜伏期感染者可以没有任何临床症状，但潜伏期不是静止期，更不是肃静期，病毒在持续繁殖，具有强烈的破坏作用。潜伏期指的是从感染HIV开始，到浮现艾滋病临床症状和体征的时间。艾滋病的平均潜伏期，现在认为是2-10年。这对早期发现病人及预防都造成很大艰难。5.2.3 艾滋病前期潜伏期后开始浮现与艾滋病有关的症状和体征，直至发展成典型的艾滋病的一段时间。主要的临床表现有：,淋巴结肿大此期最主要的临床表现之一；全身症状病人常有病毒性疾病的全身不适，肌肉疼痛等症状；各种感染此期除了上述的浅表淋巴结肿大和全身症状外，患者时常浮现各种特殊性或者复
11、发性的非致命性感染。524典型的艾滋病期有的学者称其为致死性艾滋病，是艾滋病病毒感染的最终阶段。此期具有三个基本特点：严重的细胞免疫缺陷；发生各种致命性机会性感染；发生各种恶性肿瘤。艾滋病的终期，免疫功能全面崩溃，病人浮现各种严重的综合病症，直至死亡5.3 实验室诊断5.3.1HIV抗体检测检测HIV抗体是常规使用的HIV病原学诊断的方法。HlV抗体检测方法有初筛试验和确认试验组成。初筛试验结果阳性者再做确证试验以明确诊断。目前的HIV抗体检测都是使用新一代试剂，可同时检测HIVl型和HIV2型。初筛检测的方法有间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)和金标法(SPOT),
12、确认检测的方法为蛋白印迹试验(WB)。医生普通会根据病人的感染史，如供血史、受血史、性接触史、吸毒、高危职业等结合临床体征对病人进行HIV检测。检测出HIV抗体的时间取决于HIV感染者的反应性和HIV病毒的特性，普通在感染后13个月浮现HIV抗体。HIV抗体初筛结果阴性者或者可疑者，半年后可进行第二次检测，但不需要多次检测。HIV抗体初筛结果阳性者，须进一步做确证试验。确证试验报告HIV抗体可疑的病人，应在3个月后进行复查。确证结果阳性者都具有HlV特异的带型，确认结果是可靠的。5.3.2 P24抗原检测P24抗原检测是诊断早期HIV感染的一种方法。HIV感染者多数在感染13个月才浮现HlV抗
13、体，抗体浮现之前的这个时期称为“感染后窗口期”。在窗口期，HlV抗体是检测不到的。P24抗原的检测有助于多数急性感染者血清HIV抗体阳转之前的诊断，大约可以使抗体窗口期缩短1周，因为估计检测P24抗原到检出P24抗体间隔惟独1周时间。但由于不是所有新近感染的人都可以检出P24抗原，加之该项检测费用较高，所以普通不作为常规诊断项目。5.3.3 白细胞和淋巴细胞检测医生对HlV抗体确认为阳性者进行临床分期或者治疗时，才需要做一些辅助性实验室检查，如白细胞和淋巴细胞检测。AIDS病人周围白细胞及淋巴细胞总数是下降状态，淋巴细胞的变化可用于评价机体免疫系统伤害的程度，CD4值对于评价HIV感染的病期及
14、预后极其重要，特殊是病程后期更为重要。(1) WBC、Hb下降。(2) CD4T淋巴细胞总数下降，V200mm3,或者为200500/mm3oCD4/CD8比值V1(正常时，CD4/CD8比值1)。(4)测定2微球蛋白，AlDS病人明显增高。5.3.4 PCR检测HlV核酸聚合酶链反应(PCR)是检测特定的DNA和RNA片段的非常敏感的方法。定量PCR技术是测定HlV载量、预测疾病进程的主要方法。尽管HIV和PCR检测有上述一些用途，但是它不能作为HlV感染的常规诊断方法，只能用于特殊情况下的早期HIV感染、判断婴儿HlV感染，以及血清学不确定结果的验证和补充。在HIV的基础研究如测定HIV载
15、量、分析HIV基因的亚型和变异等方面，PCR方法具有重要的用途。5.3.5 病毒分离培养及分离HIV需要在特定的P3实验室进行，且HIV的分离率在30%60%,这项试验仅用于HIV株的保存和科学研究。5.4 诊断原则艾滋病和HIV感染是因感染HIV引起人体产生以免疫缺陷为主要特征的慢性综合病症，流行病学资料有一定的参考价值，临床表现特异性不强，需与其他病因引起的类似症状相鉴别，但有些特殊的机会性感染和肿瘤可作为诊断和临床分期的指征。HIV/AIDS的诊断原则是以实验室检测为依据，结合临床表现和参考流行病学资料综合进行。5.5艾滋病诊断标准：5.5.1艾滋病病毒抗体阳性，又具有下述任何一项者，可
16、为实验确诊艾滋病病人。(1)近期内(3-6个月)体重减轻10%以上，且持续发热达38C一个月以上；(2)近期内(3-6个月)体重减轻10%以上，且持续腹泻(每日达3-5次)一个月以上。(3)卡氏肺囊虫肺炎(PCR)(4)卡波济肉瘤KS.(5)明显的霉菌或者其他条件致病感染。552若抗体阳性者体重减轻、发热、腹泻症状接近上述第1项时，可为实验确诊艾滋病病人。(1)CD4/CD8(辅助/抑制)淋巴细胞计数比值1,CD4细胞计数下降；(2)全身淋巴结肿大；(3)明显的中枢神经系统占位性病变的症状和体征，浮现痴呆，辩别能力丧失，或者运动神经功能障碍。5.6 治疗：应用核首类逆转录酶抑制剂药物：叠氮胸背
17、(ACT)、2,3-双脱氧肌酎(DDI)、拉米夫定能干扰病毒DNA合成。非核昔类逆转录酶抑制剂药物：德拉维丁、耐维拉平、赛科纳瓦、瑞托纳瓦、英迪纳瓦还有鸡尾酒疗法。5.7 预防：因现无艾滋病疫苗接种，实验室工作人员加强生物安全防范意识，规范操作，同时锻炼身体，增强机体免疫力，尽量避免暴露事件的发生。571避免共用针筒远离毒品。切勿共用针筒注射毒品。572减少血液接触不少疾病，如艾滋病、乙型肝炎等都会透过血液传染，因此，但凡处理伤口:避免皮肤、眼睛或者口腔接触到别人的血液。先戴上用完即弃的胶手套，才替别人护理伤口。5.7.3 防止母婴感染做母亲的，惟独确保自己没有染上HIV,才干令婴儿免受感染。
18、假如夫妇未能确定彼此是否带有病毒，在决定怀孕前应先进HlV抗体测试。5.7.4 避免性滥,使用安全套。6、实验室常规活动和非常规活动过程中的风险识别及风险控制风险识别风险范围性质1.常规活动仅限于本中等1.1样品的接收与开启：由于打开盛装标本容器瞬间可能产生气溶胶。1.2 加样时操作不当污染容器外部产生气溶胶。1.3 废弃物处理不当，造成污染。1.4 样品运输实验室时限很短发生概降低风险措施率易发生风险可接受性可接受过程中发生泄漏，造成污染。2.非常规活动2.1进修实习人员参预实验活动。2.2外来人员误入工作区域，被感染。3.意外事故3.1盛装标本容器破碎、溢出瞬间可能产生气溶胶。3.2锐器如
19、注射器、加样枪头误伤造成血液传播。仅限于本中等实验室仅限于本严重实验室很短较低已制定实验室可接受人员准入制度（见附件）很短较低已制定HIV抗体筛查实验室意外事故处理制度（见附件）O已建立HIV抗体筛查实验室职业暴露后的预防措施尽量减少锐器使用，用后要放入耐针剌、不渗漏的锐器盒中，避免误伤。可接受仅限于实极严重很短 验室极低本实验室已制定可接受HIV抗体筛查实验室生物安全要求、HIV抗体筛查实验室意外事故处理制度和HIV抗体筛查实验室职业暴露后的预防措施见附件。分析资料来源见本报告中：9、主要参考文献中的9.11和9.125.设施仅限于本严重很长极低已根据全国艾可接受5.1实验室分区不合理：无清
20、洁区、半污染区、污染区的设置，可造成整个区域污染。实验室滋病检测工作管理办法附件1艾滋病实验室的基本标准中对HIV实验室的要求分区设置。6.设备6.1生物安全柜：6.1.1送风口被物品阻挡、气溶胶不能被有效排出。6.1.2生物安全柜中的中效过滤器和高效过滤器，使用一段时间后就会被污染。6.2酶标仪被仅限于本实验室普通很短较低已制定HIV实验室II级生物安全柜使用标准操作程序（见附件）定期更换除菌滤膜，定期检测高效过滤器一旦有泄漏必须由厂家处理或者更换。实验品中所使用的酶标仪、生物安全柜和移液器等强制检验校准可接受创编2022.03.10污染。仪器，已通过上6.3离心机：级计量部门定期离心时离心
21、管检测校准。暴裂产生气溶已建立酶标仪胶。标准操作程序、KAloOOC离心机标准操作程序（见附件）可使用封闭式的离心桶。7.人员岗位仅限于本普通很短较低1可接受7.1未经培训实验室的技术人员，无证上岗。7.2 人员健康状况低下，易感性高。7.3 实验操作时个人防护装已蜃立人员健康监护管理程序和员工体检管理制度（见附件）。建有实验室安全防护制度和备不全或者破HIV抗体筛查损未及时更实验室人员安全换。仅限于本普通很短较低保健制度见附件。购关三证齐全，可接受8.外来供应品实验室灵敏度高特异性需求强的试剂用于样8.1检测试剂本检测。要求用灵敏度低，阳三证齐全已灭活性漏检。的室内质控品，8.2检测未经对外
22、部室间质评灭活的质控品标本按照全国对仪器环境造艾滋病检测技术成污染。仅限于本普通很短较低规范2022进行。已制订实验室可接受9.水、电、火实验室火灾、水灾、地灾及自然灾震自然灾害事故害。处置程序、9.1自来水管意外事故处理暴裂，污染物随水外泄。管理程序（见附件）。已制定危（9.2电源线破Wei）险品管理露造成触电。9.3电器、电源老化，用火不当等发生火程序见附件灾。9.4发生地震等自然灾害。9.5化学品安全。10.误用仅限于本普通很短较低已建立实验室可接受10.1样本误实验室安全保卫制度用：HIV阳性对保管阳性标本标本被当做阴冰箱实行双人双性标本使用。锁，并设有明显10.2消毒剂误的标识。用：
23、消毒时将已制定消毒剂不同浓度消毒配制标准操作程液用错，达不序对不同浓度到消毒效果。都有明显的标10.3紫外线开识，并对消毒剂启时人员不知的使用做出明确情进入造成伤规定。害。紫外线使用时，设使用置标识，防止误入。11.恶意使用涉及范围很严重很长极低制定实验室安可接受HIV阳性标本较广全保卫制度对被盗、被抢用保管阳性标本的于伤害他人的冰箱双人双锁，恐怖活动。设有监控，但发生即将启动实验室生物安全应急预案7、应急措施7.1 本实验室制定有实验室生物安全应急预案.组织健全，人员分工明确，一旦发生生物安全事故即将启动预案。7.2 实验室安全培训：每年请消防队警官做1次消防安全知识和自救知识培训。7.3
24、预防演练：每年至少进行一次生物安全事故和水灾、火灾、自然灾害进行一次摹拟演练。7.4 应急设施：设紧急消淋装置、洗眼器各1个,是应对标本溅洒污染实验人员皮肤和眼睛而采取的应急措施。7.5 设有急救药箱，还配有二氧化碳灭火器等消防设施8、评估结论：为加强HIV实验室生物安全管理，保护实验室工作人员和公众的健康，所以对HlV抗体初筛实验室进行风险评估。在卫生部公布的人间传染的病原微生物名录中将此病毒列为第二类病原微生物，属能引起人和灵长类动物发病逆转录病毒科的慢病毒属，根据名录的规定，未经培养的感染材料的操作可在BSL-2实验室进行。本实验室是按二级生物建设和装备的HIV抗体初筛实验室，应用ELI
25、SA方法进行血清HIV抗体筛查。本次评估是从HlV病毒生物因子的特性开始，并对实验室常规活动和非常规活动存在的风险和潜在的风险进行评估，并对所能产生的风险制定了相应的消除、减少或者控制风险的管理措施和技术措施，并对所涉及的设施、设备、人员进行了评估，制定了一系列相应文件，已经将可知和未知的风险降到了可接受程度，实验室具备开展HlV抗体初筛的能力。9、.主要参考文献9.1 倪语星，尚红.主编临床微生物学与检验,人民卫生出版社，20229.2 叶应妩，王毓三主编.全国临床检验操作规程.南京东南大学出版社，20229.3 贾文祥主编.医学微生物学.人民卫生出版社，20019.4 耿贯一主编.流行病学
26、（第四版）.人民卫生出版社，19979.5 中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范2022年修订版9.6 丛黎明主编.二级生物实验室建设与管理.浙江文艺出版社,20229.7 许钟麟，王清勤主编.生物安全实验室与生物安全柜.中国建造工业出版社9.8病原微生物实验室生物安全管理条例，中华人民共和国国务院令第242号9.9生物安全实验室建造技术规范GB50346-20049.10 卫生部消毒技术规范,2002年版9.11云南省德宏州2004-2022年艾滋病病毒职业暴露状况分析中国艾滋病性病2022年第2期9.12HIV实验室生物安全2022(1).8.8(PpT)百度文库.荆门市疾病预防控制中心艾滋病初筛实验室I时间2022.03.10I创作：欧阳治
