特染项目标准操作程序.docx

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1、特殊染色标准操作程序网状纤维染色操作规程试剂配制:10%硝酸银5ml,滴加氨水至溶解清亮再加入氢氧化钠5ml。此时该溶液为混浊,再滴加氨水至清亮为止,用蒸储水补足50mlo操作步骤:1、脱蜡至水;2、入0.25%高镒酸钾水溶液中5min;3、自来水洗;4、2%草酸漂白,水洗2min;5、2%硫酸铁媒染Imin;6、蒸镭水洗2次;7、入氨银溶液内lmin;8、蒸储水洗2次;9、入10%甲醛中5min;10、蒸储水浸洗2次;11入0.2%氯化金中2min;12、2%硫代硫酸钠2min;13、水洗,蒸储水洗2min;14、丽春红S液复染3min;15、直接用无水酒精脱水、透明、封固。染色结果:网状纤

2、维呈灰黑色,胶原纤维呈红色,基质呈黄色。Masson三色染色法操作规程试剂配制:(I)Weigert铁苏木素染液:甲液:苏木精Ig无水乙醇100ml;乙液:30%三氯化铁液4ml蒸储水95ml纯盐酸1ml。甲乙必须分瓶盛放,甲液须放数天,乙液临时配制。临用前甲、乙等量混合;(2)丽春红酸性品红染液:丽春红0.7g酸性品红0.3g蒸屈水99ml冰醋酸1ml;(3)1%磷铝酸水溶液:磷铝酸1g蒸储水100ml;(4)2%苯胺蓝染液:苯胺蓝2g冰醋酸2ml蒸储水98ml。操作步骤:1、切片脱蜡至水;2、Weigert苏木精染5-1Omin;3、流水稍洗,1%盐酸乙醇分化;4、流水冲洗5-1Omin;

3、5、丽春红酸性品红染液5-1Omin;6、蒸储水稍洗;7、1%磷铝酸水溶液处理约5min;8、直接用苯胺蓝液复染5min;9、0.2%冰醋酸处理Imin;10、95%乙醇脱水并洗去冰醋酸;11、无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。染色结果:胶原纤维呈蓝色,细胞质、肌纤维和红细胞呈红色,胞核呈蓝褐色。含铁血黄素染色操作规程试剂配制:(I)10%亚铁氟化钾水溶液:亚铁氟化钾IOg蒸储水100ml;(2)核固红染色液:核固红0.1g与5%硫酸铝液IOOml加热溶解,冷却过滤。操作步骤:1、切片脱蜡至蒸储水;2、10%亚铁氟化钾水溶液和20%盐酸水溶液等量混合,滴在切片上10-20分钟;3、水洗、

4、核固红染色液复染,脱水封片。染色结果:含铁血黄素呈蓝色。红氨酸铜染色操作规程试剂配制:(1)0.4%红氨酸溶液:取0.0Ig红氨酸加入2.5ml95%乙醇中充分溶解;(2)10%无水乙酸钠:5g无水乙酸钠加入50ml蒸镭水中充分溶解。将(1)(2)搅拌混匀后即为红氨酸染液。操作步骤:1、石蜡切片脱蜡至水;2、切片入红氨酸染液中,37oC过夜;3、取出切片,室温平衡后置入70%乙醇,室温lh;4、置入无水乙醇,室温lh;5、蒸储水洗,核固红复染,常规脱水、透明、封片。染色结果:铜颗粒呈黄绿色,胞核着色。HP硝酸银法操作规程试剂配制:(1)工作液:A液92.5ml(醋酸1.2ml,蒸播水加至100

5、ml)B液7.5ml(无水醋酸钠2.72g,加蒸储水至IoOm1);(2)1%硝酸银:硝酸银1g工作液100ml;(3)2%硝酸银:硝酸银2g工作液100ml;(4)5%明胶液:明胶5g工作液96ml加温35-40摄氏度使之溶解(冷却备用,用前加温至56-60摄氏度);(5)3%对苯二酚液:对苯二酚3g工作液100ml;(6)明胶对苯二酚液:3%对苯二酚液1ml5%明胶液15ml(明胶加温后加入对苯二酚液);(7)显影液(染前配制):明胶对苯二酚液16ml2%硝酸银3ml。操作步骤:1、切片至水,入工作液洗2次;2、1%硝酸银内Ih左右(56oC);3、切片取出,立即入显影液内23分钟(560

6、C);4、片浸入56C蒸储水中洗1-2分钟;5、储水洗,常规脱水透明封片。染色结果:HP+菌呈棕黑色或黑色,背景淡黄色。PAS染色操作程序试剂配制:(1)1%过碘酸:高碘酸Ig蒸储水IOOml;(2)雪夫氏液:碱性复红IgIN盐酸20ml(浓盐酸8.5ml蒸储水91.5ml)无水亚硫酸钠3g蒸储水200ml。将20Oml蒸饵水煮沸冷却至90,慢慢加入碱性复红3g,搅拌并煮沸5分钟,使其全溶解,冷却至5O0C时过滤,并加入IN盐酸20ml,冷却至25C时,再加入无水亚硫酸钠3g并搅匀(在暗处放置18-24h,如呈浅草黄色可使用,否则第二天再加活性炭过滤),置入遮光瓶内并放在4冰箱内保存备用。操作

7、步骤:1、石蜡切片脱蜡至水,蒸谯水洗;2、碘酸1%10分钟;3、水、蒸储水洗充分;4、雪夫氏液20分钟;5、流水充分洗5-10分钟;6、苏木素染核5分钟;7、水洗;8、分化返兰;9、脱水、封固。染色结果:糖原及其他PAS反应阳性物质呈红色,细胞核蓝色。VG染色操作规程试剂配制:(I)Weigert铁苏木精染液:甲液:苏木精Ig无水乙醇IOOmh乙液:30%三氯化铁液4ml蒸储水95ml纯盐酸1ml。甲液、乙液必须分瓶盛放,甲液须放数天,乙液临时配制。临用前甲、乙等量混合;(2)VG染液:甲液:1%酸性品红水溶液;乙液:苦味酸饱和水溶液。甲、乙两液必须分瓶盛放,临用前取甲液、乙液1:9混合使用;(3)1%盐酸-乙醇:70%乙醇99ml纯盐酸1ml。操作步骤:1、 切片脱蜡至水;2、 用Weigert铁苏木精液染5-lOmin;3、 流水稍洗;4、 1%盐酸-乙醇迅速分化;5、 流水冲洗5-1Omin;6、 用VG染l2min;7、 直接95%乙醇分化,脱水;8、 无水乙醇脱水封片。染色结果:胶原纤维呈红色,肌纤维、胞质及红细胞黄色,胞核呈黑色。

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