同型半胱氨酸测定试剂注册技术审查指导原则（2018年 ）.docx

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1、同型半胱氨酸测定试剂注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对同型半胱氨酸测定试剂 注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报 资料的技术审评提供参考。本指导原则是对同型半胱氨酸测定试剂的一般要求，申请人 应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具 体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申 报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及 注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法 规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验 证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则

2、是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定 的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本 指导原则相关内容也将适时进行调整。一、适用范围同型半胱氨酸测定试剂用于体外定量测定人血清或血浆中 同型半胱氨酸的浓度。从方法学考虑，本指导原则主要指基于分 光光度法原理，利用全自动、半自动生化分析仪或分光光度计， 在医学实验室采用酶循环法进行同型半胱氨酸定量检验所使用 的临床化学体外诊断试剂，根据测定方法可分为速率法和终点法 两种。本指导原则不适用于干式同型半胱氨酸测定试剂。依据体 外诊断试剂注册管理办法（国家食品药品监督管理总局令第5 号）、食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通

3、 知（食药监械管（2013） 242号），同型半胱氨酸测定试剂管理 类别为二类，分类代码为6840。二、注册申报资料要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全 性方面说明、研究结果的总结评价、同类产品上市情况介绍等内 容，应符合体外诊断试剂注册管理办法（国家食品药品监督 管理总局令第5号）和关于公布体外诊断试剂注册申报资料要 求和批准证明文件格式的公告（国家食品药品监督管理总局公 告2014年第44号）相关要求。下面着重介绍与同型半胱氨酸测 定试剂预期用途有关的临床背景情况。体内的同型半胱氨酸（HCY）来源于蛋氨酸，蛋氨酸主要来 源于食物。蛋氨酸分子含有甲基，在AT

4、P作用下生成S-腺昔蛋氨 酸后，可通过各种转甲基作用为体内已知的50多种具有重要生 理活性的物质提供甲基。血浆中同型半胱氨酸分为结合型和游离 型两种，以四种分子形式存在。我们通常测定的是血浆中总同型 半胱氨酸。国外，1995年BOUSkey等汇集分析了 27个研究单位、 总人数为4666例的临床研究结果。发现10%的冠心病患者是由高 同型半胱氨酸血症所致。血浆HCY每增加5molL,相当于血清 胆固醇增加0.5molL （20mgdL）对血管造成的危害。一项对587 例血管造影确诊的冠心病患者进行的4.6年随访研究，共有64例 死亡。四年时间里，同型半胱氨酸水平9molL者死亡率为3.8%,

5、而相比同型半胱氨酸水平N15molL者死亡率为24.7%o在分析 中，去除其他可能的影响因素（年龄、性别、吸烟史和高胆固醇 血症等），同型半胱氨酸水平为914.9molL患者病死率是血清 水平9molL患者的1.9倍（p005）;而同型半胱氨酸水平为 15一19.9molL患者病死率则是血清水平9molL患者的2.8倍 （p0.05）;同型半胱氨酸水平为20molL患者病死率则是血清 水平9molL患者的4.5倍（p0.02）上述研究表明，高同型半 胱氨酸血症是冠心病有力的危险预测因子。（二）主要原材料研究资料（如需提供）主要原材料（例如酶及其他主要原料）的选择、制备、质量 标准及试验验证研究

6、资料；质控品、校准品的原料选择、制备、 定值过程及试验资料；校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、 试验方法、数据及统计分析等详细资料。（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供）L主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并简要说明主 要生产工艺的确定依据。企业应采用经过验证，能够保证产品质 量的生产工艺。2.主要反应体系的研究资料，包括：样本采集及处理、样本 要求，确定反应校准品、样本和试剂的用量、缓冲液、时间、波 长等条件的确认资料及试验数据，校准方法、质控方法等。（四）分析性能评估资料申请人应当提交对试剂进行的所有性能验证的研究资料，对 于每项分析性能的评价都应包括具体的研究项目、试验

7、设计、研 究方法、可接受标准、试验数据、统计方法（如有）、研究结论 等详细资料。性能评估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作 为一个整体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。有关 分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括试验 地点、适用仪器、试剂规格和批号、所选用的校准品和质控品、 临床样本来源等。对于本试剂，建议着重对以下分析性能进行研究：L准确度对测量准确度的评价依次包括：与国家标准品（和/或国际 标准品）的相对偏差、回收试验、方法学比对等方法，申请人可 根据实际情况选择以下方法的一项或几项进行研究。（1）与国家（国际）标准品的相对偏差如果研究项目有相应国家（国际）标准品，

8、则使用国家（国际） 标准品进行验证，重点观察对相应标准品检测结果的偏差情况。（2）回收试验用于评估定量检测方法准确测定加入纯品（或标准溶液）的 能力，结果用回收率表示。通常对样本进行35次回收试验， 取平均值即平均回收率。回收试验注意事项：加入的纯品（或标准溶液）体积与人源样本体积比应不会 产生基质的变化；尽量使加入标准液后样本中的被测物浓度接近医学决定 水平（1020molL）;纯品（或标准溶液）的浓度应该足够高，以得到不同浓度 的回收样本。（3）方法学比对采用参考方法或国内/国际普遍认为质量较好的已上市同类 试剂作为比对方法，与拟申报试剂同时检测一批临床样品（至少 40例样本），从测定结果

9、间的差异了解拟申报试剂与参比方法 间的偏倚。如偏倚很小或在允许的误差范围内，说明两检测系统 对病人标本测定结果基本相符，对同一份临床样本的医学解释， 拟申报试剂与对比方法相比不会产生差异结果。在实施方法学比对前，应分别对拟申报试剂和比对试剂进行 初步评估，只有在确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方 可进行方法学比对。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、 浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。2 .空白吸光度用试剂在说明书规定参数下测试指定空白样本，记录测试反应 完成后的吸光度值(A),测试结果即为试剂空白吸光度测定值。注：空白样本可以是纯水、生理盐水、零校准液等。3 .空白吸光度变化

10、率(如适用)用试剂测试指定空白样本，记录在试剂规定参数下的吸光度 差值，空白吸光度变化率(AAZmin)应不大于企业规定值。4 .分析灵敏度用试剂测试同型半胱氨酸已知浓度在(5-15) molL的样 本，记录在试剂规定参数下的吸光度差值。(1)对于终点法测试的试剂，10.0molL样本的吸光度变 化(A)应不小于0.02。(2)对于速率法测试的试剂，10.0molL样本的吸光度变 化率(AAZmin)应不小于0.01。5 .重复性测量批内精密度的评估应包括两个浓度水平的样本进行，两 个浓度都应在试剂盒的测量范围内，通常选用该检测指标的参考 区间附近和异常样本，建议采用人源样本或与人源样本基质接

11、近 的样本进行试验。选择重复测试浓度为(10.020) molL的样 本，所得结果的变异系数(CV)应不大于5%, (20.04.0)molL 的样本，所得结果的变异系数（CV）应不大于3%。6 .批间差用3个不同批号的试剂分别测试（10.02.0） molL的样本， 每个批号测试3次，分别计算每批3次测定的均值，计算相对极差。7 .线性建立试剂线性范围所用的样本基质应与临床实际检测的样 本相似，理想的样本为分析物浓度达到预期测定上限的混合人 血清（或其他人源样本），制备低浓度样本时应充分考虑稀释对 样本基质的影响，建议稀释液尽量采用阴性血清。建立线性范 围时，需在预期测定范围内选择7-11个

12、浓度水平。例如，将 预期测定范围加宽至130%,在此范围内选择更多的浓度水平， 然后依据试验结果逐渐减少数据点（最终不得少于7个水平） 直至表现出线性关系，可发现最宽的线性范围。验证线性范围 时可选择57个浓度水平。超出线性范围的样本如需稀释后测定，应做相关研究，明确 稀释液类型及最大可稀释倍数，研究过程应注意基质效应影响， 必要时应提供基质效应研究有关的资料。8 .干扰试验考察样本中常见干扰物质对检测结果的影响，如胆红素、血红 蛋白、甘油三酯；同时根据不同检验原理选择特异性干扰物质（如 血氨、S-腺苔蛋氨酸、抗坏血酸、谷胱甘肽等）进行检测。干扰物 浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出现

13、的物质浓度。方 法为对模拟添加干扰物的样本分别进行验证，样本量选择应体现一 定的统计学意义，说明样本的制备方法及干扰试验的评价标准，确 定可接受的干扰物质极限浓度。待评价同型半胱氨酸样本浓度应至 少包含临近医学决定水平（或正常参考区间上限）。药物干扰的研究可根据需要由申请人选择是否进行或选择 何种药物及其浓度进行。9 .校准品、质控品赋值（如适用）（1）应参照GB/T 214152008体外诊断医疗器械生物 样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性的要 求，提供企业（工作）校准品及试剂盒配套校准品赋值及不确定 度计算记录，提供质控品定值及其靶值范围确定的记录。（2）均一性取同批号的一定

14、数量最小包装单元的校准品、质控品，每 包装单元测试1次，按下面的公式计算测试结果的平均值（,） 和标准差Si；另用一个上述校准品最小包装单元连续测试相同 次数，计算测试结果的平均值（无）和标准差S2;按下列各公 式计算瓶间重复性cv%,所有参数的瓶间重复性结果均应符合 要求。_ -vf公式1X=U-n公式 2S = J-JY t-公式3S瓶间=J- -S?公式 4CVafllj（%） = SmnjX1 100当S0.975）,如r0.975,应适当扩大样本量以扩大数据 范围，R2是判定系数（通常要求R220.95）,计算回归系数及截 距的95%可信区间。分别计算医学决定水平处（或正常参考区间上

15、限）相对偏 倚/偏差及95%置信区间。医学决定水平处（或正常参考区间上 限）相对偏倚应不大于允许误差（建议参照1/2CLLv88、1/2室 间质评可接受范围、1/2来源于生物变异的总允许误差、卫生行 业标准等相关要求设定允许误差）。应给出考核试剂与对比试剂之间的差值（绝对偏倚/偏差） 或比值（相对偏倚/偏差）散点图，观察并分析各点的偏倚分布 情况。通过相关性分析、配对t检验等统计分析方法综合评价考核 试剂与对比试剂等效性。（4）讨论和结论对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果，对本次临 床研究有无特别说明，最后得出临床试验结论。（八）产品风险分析资料申请人应考虑产品寿命周期的各个环节，从预

16、期用途、可 能的使用错误、与安全性有关的特征、已知及可预见的危害等 方面的判定以及对患者风险的估计进行风险分析，应符合YY/T 0316-2016医疗器械风险管理对医疗器械的应用的要求。（九）产品技术要求产品技术要求应符合体外诊断试剂注册管理办法（国家 食品药品监督管理总局令第5号）和关于发布医疗器械产品技 术要求编写指导原则的通告（国家食品药品监督管理总局通告 2014年第9号）的相关规定。表1产品适用的相关标准GB/T 1912008包装储运图示标志GB/T 214152008体外诊断医疗器械生物样品中量的测量 校准品 和控制物质赋值的计量学溯源性YY/T 03162016医疗器械风险管理

17、对医疗器械的应用YY/T 0466.12009医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的 符号第1部分：通用要求YY/T 12582015同型半胱氨酸测定试剂（盒）（酶循环法）作为定量检测试剂，应主要包括以下性能指标：外观、装量、 试剂空白、分析灵敏度、线性、精密度、准确性、稳定性等。各 性能指标应不低于YY/T 12582015同型半胱氨酸检测试剂 （盒）（酶循环法）的要求，如有相应的国家/行业标准发布或 更新，则产品技术要求不得低于其相关要求。此外，可根据实际 情况增加下列检验项目：（1）试剂空白吸光度变化率（如适用）用试剂测试空白样本，记录在试剂参数规定读数点下的吸光 度差值（AA）,计

18、算空白样本的吸光度变化率（AAZmin）应不大 于企业规定值。（2）准确度（方法学比对）用待测试剂盒与申请人选定分析系统（参考方法或国内/国 际普遍认为质量较好的已上市同类试剂）分别检测不少于40个 在检测范围内的人源样品，回归分析验证两种试剂结果的相关 性，计算相关系数r应大于等于0.975,医学决定水平处（或正 常参考区间上限）相对偏倚应不大于企业规定值。（3）复溶稳定性（干粉或冻干试剂适用）：干粉试剂开瓶后 （复溶后）在规定的贮存条件下保存至有效期末，产品的性能应 至少符合线性范围、准确度和重复性。（4）校准品和质控品（如适用）溯源及赋值说明：同型半胱氨酸尚无国家标准物质，已有 国际标准

19、物质，若试剂盒配套校准品和质控品，应参照GB 214152008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品 和控制物质赋值的计量学溯源性的要求溯源至国家或国际标准 物质，并提供校准品溯源性说明及质控品赋值说明。若有国家标 准物质发布，应使用国家标准物质进行验证。性能要求：外观、装量、均一性（瓶间差），冻干品还包 括：含水量、复溶稳定性，液体剂型还应包含开瓶稳定性。如校 准品和定值质控品为单独注册单元应考察赋值的准确性。（5）附录如注册单元中包含校准品或质控品，应在附录中明确校准 品、质控品的赋值程序。（十）产品注册检验报告根据体外诊断试剂注册管理办法（国家食品药品监督管 理总局令第5号）要求

20、，首次申请注册的第二类产品应该在国家 食品药品监督管理部门认可的、具有相应承检范围的医疗器械检 测机构进行样品的注册检验。对于已经有国家标准品的检测项 目，在注册检验时应采用相应的国家标准品进行，对于目前尚无 国家标准品的项目，申请人应建立自己的质控体系并提供相应的 校准品、质控品。注册申报资料中应包括相应的注册检验报告和 产品技术要求预评价意见。（十一）产品说明书说明书承载了产品预期用途、试验原理、试验方法、检测结 果解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操 作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据。因此, 产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。产品说 明

21、书的格式应符合关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则 的通告（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）、医 疗器械说明书和标签管理规定（国家食品药品监督管理总局令 第6号）的要求。产品说明书的所有内容均应与申请人提交的注 册申报资料中的相关研究结果保持一致，如某些内容引用自参考 文献，则应以规范格式对此内容进行标注，并单独列明参考文献 的相关信息。结合关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告 （国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）的要求，下 面对同型半胱氨酸测定试剂说明书的重点内容进行详细说明，以 指导注册申报人员更合理地完成说明书编制。产品说明书内容原则上应全部用中文

22、进行表述；如含有国际 通用或行业内普遍认可的英文缩写，可用括号在中文后标明；对 于确实无适当中文表述的词语，可使用相应英文或其缩写。L【预期用途】应包括以下几部分内容：（1）说明试剂用于体外定量测定人血清和/或血浆中同型半 胱氨酸的浓度。（2）与预期用途相关的临床适应证背景情况，说明相关的 临床或实验室诊断方法等。2 .【检验原理】本指导原则适用于使用酶循环法对人血清或血浆中的同型半 胱氨酸进行定量测定的试剂，下面介绍该产品的2种反应原理：（1）氧化型HCY被还原成游离HCY,游离HCY在HCY- 甲基转移酶催化下与S-腺昔甲硫氨酸（SAM）反应生成甲硫氨 酸和S-腺昔同型半胱氨酸（SAH）,

23、 SAH被SAH-水解酶水解生 成腺昔和HCY；生成的HCY进入HCY甲基转移酶催化的转化 反应，进行循环反应，生成的腺昔立即脱氨转化为次黄喋吟和氨; 氨进一步在谷氨酸脱氢酶催化下和NADH反应，将NADH转变 为NAD+,样本中HCY浓度与NADH转化速率（或量）成正比。（2）氧化型HCY被还原成游离HCY,游离HCY在胱硫醒 -合成酶（CBS）催化下和丝氨酸反应生成L-胱硫醒，L-胱硫醒 在胱硫醴B-分解酶（CBL）催化下生成HCY、丙酮酸和NE, 生成的HCY继续进行循环反应，丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH） 的催化下将NADH转变为NAD+,样本中HCY浓度与NADH 转化速率（或量）成正

24、比。3 .【主要组成成分】（1）说明试剂包含组分的名称、数量、比例或浓度等信息， 如果对于正确的操作很重要，应提供其生物学来源、浓度及其他 特性；明确说明不同批号试剂盒中各组分是否可以互换。（2）试剂内如包含校准品和/或质控品，应说明其主要组成 成分及其生物学来源，校准品应注明其定值及溯源性，溯源性至 少应写明溯源到的最高级别，包括：标准物质的发布单位及编号， 质控品应有合适的靶值范围，如靶值范围有批特异性，可注明批 特异性，并附单独的靶值单。4 .【储存条件及有效期】（1）对试剂的效期稳定性、复溶稳定性、开瓶稳定性等信 息作详细介绍。包括环境温湿度、避光条件等。（2）不同组分保存条件及有效期

25、不同时，应分别说明，产 品总有效期以其中效期最短的为准。注：保存条件不应有模糊表述，如“室温”，应明确贮存温度， 如2C8,有效期12个月。稳定期限应以月或日或小时为单位。5 .【适用仪器】（1）说明可适用的仪器，并提供与仪器有关的必要信息以 便用户能够做出最好的选择。（2）应写明具体适用仪器的型号，不能泛指某一系列仪器。6 .【样本要求】重点明确以下内容：（1）样本采集：说明采集方法及样本类型，如有血浆样本, 应注明对抗凝剂的要求。当血清存在脂浊、严重黄疸、溶血时，对本方法有干扰，应 尽可避免此类样本。（2）样本处理及保存：样本处理方法、保存条件及期限、 运输条件等。冷藏/冷冻样本检测前是否

26、需恢复室温，冻融次数。 对储存样本的添加剂要求等。由于红细胞合成和释放同型半胱氨酸的作用，导致血浆和血 清中同型半胱氨酸的浓度升高，建议采血后置于冰浴中（或冷藏 运输），并应及时分离出血浆（或血清）样本。（3）若样本浓度超出线性范围上限可稀释测定的，需明确 最大可稀释倍数、稀释溶液等信息。7 .【检验方法】详细说明试验操作的各个步骤，包括：(1)试验具体操作步骤。(2)试剂配制方法、注意事项。(3)试验条件：温度、时间、仪器波长等以及试验过程中 的注意事项。(4)校准：校准品的使用方法、注意事项、校准曲线的绘 制。应注明推荐的校准周期。(5)质量控制：质控品的使用方法、对质控结果的必要解释 以

27、及推荐的质控周期等，如质控不合格应提供相关的解决方案。8 .【参考区间】(1)应注明常用样本类型的参考区间，并简要说明参考区 间确定的方法。(2)简单介绍设定该参考区间所选健康人群的区域特征， 建议注明以下字样“由于地理、人种、性别及年龄等差异，建议 各实验室建立自己的参考区间”。9 .【检验结果的解释】(1)说明可能对试验结果产生影响的因素。(2)说明在何种情况下需要进行确认试验。10 .【检验方法的局限性】(I)说明检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排 除病例的依据。(2)说明该检验方法由于哪些原因会使测量结果产生偏离， 或测量结果还不能完全满足临床需要。如：干扰(胆红素、血红 蛋白

28、、甘油三酯等)等。11 .【产品性能指标】说明该产品主要性能指标，应至少包括：外观、装量、试剂 空白吸光度、试剂空白吸光度变化率（如适用）、分析灵敏度、 线性范围、重复性、批间差、准确度等，并对性能评估结果进行 简要总结。12 .【注意事项】应至少包括以下内容：（1）本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊 治应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情 况综合考虑。（2）对所有样本和反应废弃物都应视为传染源对待，提示 操作者采取必要的防护措施。（3）是否受临床症状、用药情况等因素的影响，如S-腺普 甲硫氨酸、甲氨蝶吟等。三、审查关注点（一）产品技术要求中性能指标的设定及检验方

29、法是否符合 相关行业标准的要求；技术要求的格式是否符合关于发布医疗 器械产品技术要求编写指导原则的通告（国家食品药品监督管 理总局通告2014年第9号）的相关规定。（二）产品说明书的编写内容及格式是否符合关于发布体 外诊断试剂说明书编写指导原则的通告（国家食品药品监督管 理总局通告2014年第17号）的要求，相关内容是否符合医疗 器械说明书和标签管理规定（国家食品药品监督管理总局令第 6号）中对说明书的要求。（三）分析性能评估指标及结果是否支持产品技术要求的确 定；是否满足本指导原则中各指标验证的要求。（四）参考区间确定使用的方法是否合理，数据统计是否符 合统计学的相关要求，结论是否和说明书声称一致。（五）试剂的稳定性研究方法是否合理，稳定性结论是否和 说明书声称一致。（六）临床试验采用的样本类型及病例是否满足试剂盒声称 的预期用途，样本量及临床研究单位的选择、对比试剂的选择、 统计方法及研究结果、临床方案及报告撰写的格式等是否符合 关于发布体外诊断试剂临床研究技术指导原则的通告（国家 食品药品监督管理总局通告2014年第16号）对相关内容的规定。（七）产品风险分析资料的撰写是否符合YY/T03162016 医疗器械风险管理对医疗器械的应用的要求。