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1、血小板活化释放因子在血小板功能测试中的研究进展曾俊玲，许小冰综述陈煜森审校广东医科大学附属医院神经内科，广东湛江524000【摘要】血小板功能测试(PLT)可用于识别血栓或出血性疾病患者、监测抗血小板治疗的反应、困手术期止血管理以及愉血质量监测等，在临床上具有重要的应用价值。血小板活化释放因子在放大血小板活化、将循环血小板募集到聚集体中、稳定血栓起着关键作用，血小板活化释放因子水平变化与血小板功能密切相关。在这篇综述中，讨论了PFT的现状、血小板活化致血栓形成/一j批注hl：首次使用英文缩写应标注中文的过程，重点阐述了血小板活化释放因子在PFT中的临床应用。【关键词】血小板活化：血小板功能测试
2、【中图分类号】R543【文献标志码】A【文章编号】Researchprogressofplateletactivationreleasefactorinplateletfunctiontests.ZENGJun-Ung,XUXiao-bingrCHENYu-Sen.DepartmentofNeurology,theAffiliatedHospitalofGitangdongMedicalUniversity,Zhanjiang524000,Guangdong,CHINAAbstractPlateletFunctionTests(PLT)canbeusedtoidentifypatientswi
3、ththrombosisorbleedingdisorders,monitortheresponseofantiplatelettherapy,perioperativehemostasismanagement,andbloodtransfusionqualitymonitoring,etc.,andhaveimportantclinicalapplications.Plateletactivationreleasefactorplaysakeyroleinamplifyingplateletactivation,recruitingcirculatingplateletsintoaggreg
4、ates,andstabilizingthrombus.Changesinplateletactivationreleasefactorlevelsarecloselyrelatedtoplateletfunction.Inthisreview,thecurrentstatusofPFTand(heprocessofthrombosiscausedbyplateletactivationarediscussed,andtheclinicalapplicationofplateletactivationreleasefactorinPFTisemphasized.KeywordsPlatelet
5、activation;Plateletfunctiontests血小板的主要生理功能是形成止血血栓，防止失血和维持血管完整性。鉴于血小板功能降低或增强与随后的疾病和临床事件之间相关，目前虽有多种方法来评估血小板功能，但基于血小板聚集的测量在血小板功能测试(PlateletFunctionTests,PLT)中占主导地位，且大多数已发表的测试方法之间存在显着的异质性，尚无明确的标准化测试。血栓形成是由血小板活化触发的，活化的血小板水平和血小板活化能力被公认为是预测血栓形成事件的有用指标，更好地了解基于血小板活化的测量在PFT中的作用将有助于开发更具有标准化的测试。1、血小板功能测试现状1910年
6、，DUke将出血时间用于评估血栓形成能力，是人类第一个PFT方法。直至1963年BOrn推出了血小板聚集测试-透光率比浊法(LTA),PFT有了突破性的进展，被认为是PFT的“金标准”，但LTA不能显示血小板的活化，受到血小板计数的影响，需要较大的血液量，繁琐的程序不允许同时自动测量或评估大量样品3近20年来，PFT得到了改进，临床实验室中可用的快速测试，例如MUItiPlate法、血小板功能检测仪-100、血栓弹力图等基于血小板聚集、血小板黏附测量血小板功能，这些方法不像LTA那样繁琐，可用于床旁分析血小板功能，但也无法显示血小板的体内活化，高度依赖于血小板计数。目前，基于血小板活化检测的流
7、式细胞术在减少血液消耗、血小板减少症患者的血小板功能测试中有了重大改进，可作为基于血小板聚集测量的PFT的首选替代方案，该方法测量单个血小板的活化反应，而不是测量依赖于血小板之间物理接触的过程他力，这在很大程度上独立于血小板计数。流式细胞术作为量化血小板活化的可靠技术，使得血小板活化分析在血小板功能测试中的作用显示出了前景。2、血小板活化在血栓形成中起关键作用血小板活化是一个复杂的多因素过程，涉及多种分子途径。首先，血小板黏附在受损的血管壁上，黏附蛋白和可溶性激动剂与其各自血小板膜受体的结合触发血小板活化和信号传导。这些诱导血小板活化信号的传导机制、放大网络及各信号传导之间串扰的确切性质是个值
8、得深入探索的重要领域，有助于揭示血栓疾病的新治疗靶点。其次，血小板活化后，刺激血小板膜的磷脂醐A2将花生四烯酸分解为血栓烷A2(TXA2),将额外的血小板募集到凝块形成部位，并诱导血管收缩，加速止血过程。此外，血小板还从各种存储颗粒、细胞外囊泡及血小板膜蛋白的水解脱落释放生物活性因子。血小板包含三种主要类型的存储颗粒，-颗粒、3-颗粒和溶筋体，当颗粒膜与血小板表面或开放小管系统中的质膜融合时，颗粒能够将可溶性颗粒分子释放到细胞外液中，如5-HT、ADP、PF4、TG;等，些膜结合颗粒分子则黏附在活化血小板表面表达，如P-选择素等L批注h2:首次使用英文未标注中文刈，分泌的颗粒能够增强血小板活化
9、信号，激活处于休眠状态的血小板，极大地促进了血栓的形成。血小板在活化后释放的血小板衍生的细胞外囊泡（PEVs）,包括微粒、外泌体，介导细胞通讯，具有促血栓形成活性。强烈的血小板刺激活化还可由金属蛋白酣介导血小板膜蛋白受体的水解脱落，释放可溶性脱落蛋白，如GPVl、SGPVI等，反映血小板活化状态皿。在过去几年，/批注S3：首次使用英文未标注中文血小板蛋白质组的研究进展迅速，对血小板活化时释放的生物活性因子进行的研究越来越多，促进了血小板活化分析在PFT中的发展。最终，激动剂激活血小板触发的信号通路会汇聚为共同通路，诱导”由内而外”的信号传导过程，激活糖蛋白11bI11a的配体结合功能，介导血小
10、板黏附和聚集并触发“由外向内”信号传导，导致血小板扩散、凝块收缩、稳定血栓形成I3、血小板活化释放因子在血小板功能测试中的临床应用。血栓形成是由血小板活化触发的，在血小板活化中，释放反应是关键步骤，血小板活化释放因子在放大血小板活化、将循环血小板募集到聚集体中、稳定血栓起着关键作用。血小板活化释放因子水平变化与血小板功能密切相关，可作为PFT的生物标记物。3.1 血栓性疾病患者的血小板功能测试血小板活化释放因子水平的定量可用于识别血小板功能过度活跃，预测血栓形成趋势，指导血栓预防或治疗、改善患者临床结局。血小板活化后P-选择素会暴露在血小板表面膜上，部分以可溶形式释放到血浆中形成可溶性P-选择
11、素（SP-选择素），是反映血小板活化释放因子研究最多的标志物。暴露在血小板表面膜上的P-选择素迅速与白细胞结合，循环白细胞-血小板聚集体（PLA）是比P-选择素更敏感的体内血小板活化标志物，可在血栓性疾病如晚期动脉粥样硬化、急性冠脉综合征、急性脑梗死、并发血栓形成的H）VID-191患者中升高，PLA有望成为血栓形成疾病诊断有吸引力一批注h4:首次使用英文未标注中文的参数。尽管静脉血栓形成传统上不被认为是一种依赖于血小板激活的疾病，但血小板在静脉血栓栓塞（VTE）中的作用仍然是探索热点。sP-选择素更多的是用于在VTE危险因素上的研究，有研究证明，SP-选择素显示出VTE良好的预测价值，其相关
12、性仅次于D-二聚体加。此外，sP-选择素与静脉血栓疾病的严重程度有关，可用于早期识别预后不良患者。通过测量血小板活化后释放5-HT的MC-5-HT释放试验(SRA)可用于肝素诱导的血小板减少症II(Heparin-InducedThrombocytopeniaII,HlT-II)、新冠病毒疫苗引起的免疫血栓性血小板减少症的血小板功能监测阳，有助于早期识别继发的血栓形成倾向。有研究用流式细胞术测量P-选择素的表达作为HIT-11功能测试的替代方法，是HIT-II血小板功能快速测试的新兴领域。血小板受体胞外域脱落在过去几十年中得到了广泛的研究，已成为调节血小板功能的新机制。IGPVIl是血小板黏附
13、阶段重要的血小板表面黏附受体，血小一批注h5:首次使用英文未标注中文板活化后由旃介导受体脱落形成可溶性GPVI(sGPVI),在血栓和凝血障碍引起的疾病中升高，由于其血浆水平的稳定性，不受年龄、性别或吸烟的影响，是血小板活化的一个极好的候选血浆标志物，也可以作为阴性预测因子来排除异常血小板活化。另一方面，GPVI的脱落会降低完整受体的表面密度，从而减弱血小板信号传导、活化和分泌，为控制血栓生长提供有吸引力的机制，揭示了未来调节SGPVI脱落在控制血小板血栓形成倾向的可能性。近年来，在血栓形成疾病中寻找新的、可靠的生物标志物的过程中，研究发现PEVS冰平与动脉血栓形成、急性缺血性脑卒中等疾病之间
14、存在关联批注h6：首次使用英文未标注中文cz52l,是血小板活化、血栓形成、炎症和内皮功能障碍的新兴标志物，备受越来越多的关注。迄今为止，这种有前景的生物标志物缺乏更标准化的测量，随着PEVs分离和检测技术的进步将在血栓性疾病的诊断和预后中迎来发展。3.2 出血性疾病患者的血小板功能测试对异常出血患者的评估需先对出血史、家族史和体格检查进行客观的临床评估，随后进行血小板计数、凝血等实验室检查均不能完全解释出血症状时，再进一步行血小板功能测试。血小板存储颗粒释放因子的测量可用于诊断血小板颗粒含量或分泌异常的遗传性血小板功能障碍相关的出血性疾病。如测量血小板-颗粒ADP释放和血小板聚集的Lumia
15、ggregometry法，可用作临床怀疑血小板功能缺陷患者的首次筛查测试切oPF4和。TG释放的测量，有助于-颗粒蛋白的异常水解的魁批注h7：首次使用英文未标注中文北克血小板病的诊断。通过ELISA或蛋白质印迹法测量a-颗粒蛋白的水平来评估a-颗粒含量的释放技术相当繁琐，目前更广泛使用的方法是通过流式细胞术测量活化血小板上的a-颗粒标志物P-选择素表达，如灰色血小板综合征诊断。P-选择素血小板表达的测量还可以与其他血小板功能评估相结合，例如，P-选择素和CD63具有疑似轻度出血性疾病预测试的潜力“。血小板表面的粘附受体水解脱落可使受体介导的粘附和信号传导不可逆转地失活，病理性剪切力、病理性血小
16、板活化和纤维蛋白沉积等是导致SGPVl过度脱落和血小板功能障碍的机制，在有出血事件的左心室辅助装置植入、肝素诱导血小板减少症、创伤患者中与升高的SGPVl密切相关叫将sGPVI水平确定为患者出血风险的独立标志物，需要更多前胞性的验证。3.3血小板功能测试以监测抗血小板治疗的反应部分的患者接受规律抗血小板治疗后仍然会有新的血管事件发生，表明尽管进行了抗板治疗，血小板仍在持续活化，称为治疗后残留血小板的高反应性(HightTreatmentPlateletReactivity,HPR)。阿司匹林通过不可逆地乙酰化血小板环氧化酶T从而抑制TXA2的合成来发挥其主要的抗血栓形成作用。因此，TXA2的下
17、游代谢物尿11-脱氢血栓烷B2(H-dhTxB2)的测量可作为对阿司匹林的药效反应相对直接的测量，规律服用阿司匹林后尿H-dhTxB21500pgmg被定义为阿司匹林的HPR网，有研究表明通过尿UdhTxB2检测的阿司匹林无反应者与心血管不良事件复发和死亡有关，但基于尿U-dhTxB2检测制定的个体化抗血小板治疗的效果仍不清楚，尚未完成随访和数据验证，后续将继续追踪3S用激动剂刺激血小板并测量产生的P-选择素可用于评估抗血小板治疗的反应性。阿司匹林的HPR被定义为P-选择素的中值荧光(MF)500U,氯叱格雷的HPR为P-选择素的MF860U,基于P-选择素测试发现的氯哦格雷高反应性被证明与复
18、发性心血管缺血事件增加有关阿，然而有研究却在基于P-选择素测量的氯叱格雷高反应性与复发性脑缺血事件之间未发现显着关联,，这项研究的主要限制是参与者在复发风险较低的时候评估血小板功能，其次，参与者为轻度脑梗死或TIA,因此结果无法外推到更严重的人群。此外，PLA可在炎症反应起重要作用的外周动脉闭塞性疾病中监测抗板治疗反应，但它不适用于短期、急性事件的评估.。许多研究表明了抗板药物对PEVs释放的影响R使用标准化的方法评估PEVs可能成为未来评估个体抗板治疗反应的另一种实用方式。3. 4输血医学、围手术期的血小板功能测试PFT在输血医学中的主要应用是确定血小板浓缩物(PC)的质量，以评估其输注后止
19、血和预防出血的能力。PC质量控制的一个关键方面是确定血小板活化状态，PC储存期间，进行性血小板活化与血小板功能丧失相关。在PC储存期间，血小板功能与自发性P-选择素表达量呈负相关，与激动剂刺激P-选择素表达量呈正相关t初。此外，越来越多的研究符sGPV、sGPVkPLA等也作为PC的质量评估标志物。尽管已经提出了几种不同的用于测量储存病变的标志物，但尚未建立评估PC用于输血的可用性的黄金标准。测量PC中的PEVS形成是新兴领域，因为PEVS除了是血小板活化的标志物，还可以提供PC老化和功能的定性信息。困手术期血小板功能的客观测量似乎有助于围手术期止血控制，减少不必要的血小板输注。但基于P-选择
20、素表达测定的血小板功能研究表明，虽然手术时P-选择素表达与阿司匹林停用时间呈正相关，但手术时整个队列基于P-选择素表达测定的血小板功能与并发症发生率、严重程度或输血使用无关。未来需要通过大型随机试验进行进一步研究其它血小板活化释放因子的定量变化是否影响围手术期结果。4、展望在没有添加外源性血小板激动剂的情况下，血小板活化释放因子的测量可以判断体内血小板的基础活化水平评估血小板功能，以更好的预测血栓或出血风险，在检测中加入外源性激动剂后测量还可以分析体外血小板的反应性，以评估药物治疗反应、PC质量监测等。基于血小板活化释放因子的测量是对现有常用PLT的有用补充，新测定法的潜在临床效用正在显现，但
21、需要进一步的前瞻性研究来明确其应用价值。相信随着研究的不断深入以及新兴技术的发展，未来PFT一定能够更加规范化，改善临床实践。参考文献1 OkanoK,ShitamotoK,ArakiM,etal.Influencingfactorsinquantitativemeasurementusingactivatedplateletlevelsandplatelet-activatingcapacityfortheassessmentofthrombosisinpre-metabolicsyndromeandtype2diabetesmellitusJ.NursHealthSci,2018,20(1
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