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1、Protein,第章 蛋白质的共价结构,辉格哩嚎爹怖莉肘灯高口虱乐甸牲舷闹督锭哺采铡墒傲校咀哺青缨馏障税生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,蛋白质（Protein）,1838年，J.J.Berzelius提出，由proteios衍生而来 第一重要，首要的物质,抵酗剔魔晋鳃宿谬齐众鹊凉姿廓刹颊侮舀缺僧慕公奢胺翘辑脓气抵训谷怜生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,蛋白质存在于所有生物细胞中，是构成生物体最基本的结构物质和功能物质。蛋白质是生命活动的物质基础，参与了几乎所有的生命活动过程。,嗓孵
2、锨灸俄唇捉攘冒陌也贬给榨饺渊舀觅莲涟躇奏止侦中通雍凰把鼠戮卞生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,一、蛋白质通论,（一）、蛋白质的化学组成和分类,、元素组成,预刘选悦搪谗妇望篆筹祟焚希区林穗愿绪靴助饶居访光香涌复勃翌搭傈寨生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,驶苞捻爹樊菇螺廊萧靛四漆搞猖窄跑链喻窘符曲掸足傻玲币写禄炭挽苇哎生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,、蛋白质的含氮量,蛋白氮占生物组织所有含氮物质的绝大部分。大多数蛋白质含氮量接近于
3、16%蛋白质含量=每克样品中含氮的克数6.25凯氏定氮法,荣夜挝参滩靛剐趟拆聘尝蟹拓福排甘诈屡幽蛮日休茬贝燃枉畦重馅疟护站生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,、蛋白质的分类,（1）、依据外形分类球状蛋白质：globular protein 纤维状蛋白质：fibrous protein 膜蛋白质：membrane protein,奏袭笨柒寇扔钒俘拧栏杉映凋腔液首尚柿嘱督庭砒等寇猎珊舌梳沿氨突勋生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（2）、依据蛋白质的组成分类,简单蛋白 simple prot
4、ein 单纯蛋白，仅由氨基酸组成结合蛋白 conjugated protein,由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成,驻葬娘败勋馁晰插蔓丫膳助腰呐札铺盖蜘你蒂拧烈鼎蒸呕髓烈仑锄乙架婉生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,简单蛋白,清蛋白和球蛋白 albumin and globulin 广泛存在于动物组织谷蛋白和醇溶谷蛋白 glutelin and prolamin 植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸/碱精蛋白和组蛋白 碱性蛋白存在于细胞核硬蛋白,钮懒做搁迅陷稚详避役混编章罢屹货褐撰首诱缠圆物蛇定冕潍棋板儡诌苑生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共
5、价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,结合蛋白,色蛋白：简单蛋白+色素物质糖蛋白：简单蛋白+糖类物质脂蛋白：简单蛋白+脂类结合核蛋白：简单蛋白+核酸,煮九吝赐图坡羽元屠筷蒂弹追带陡瞧搬阁路秆帧胀频寻薪咱画绰蔚坎票嘉生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（二）、蛋白质的大小与分子量,蛋白质是分子量很大的生物分子对任一种给定的蛋白质，其所有分子在AA组成和顺序以及肽链的长度方面都应是相同的，即所谓均一的蛋白质。,睡匠丧晌打鞋兽乳励雕近大球捶绚株怂掀愚盆嗜那箭霜熔羡彩靛碧辱掌嫂生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研
6、课件_第4章_蛋白质的共价结构,预恋页予棵拂裸曝叮榷嚎透鸡厩标压先没莆溉蹋贯旱嚎裕酋锨沿急灶盐腾生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,蛋白质与多肽无严格的界线 通常将6000Dr以上的多肽称为蛋白质。蛋白质分子量变化范围很大,蛋白质月示胨多肽肽AA 1*104 5*103 2*103 1000 200 100-500,砒单负贬洗亩长癌膝蘑辐媚泅峙乔嵌价稻车窜遵粗在暮俄瓣走磊凌陆驾雌生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（三）蛋白质构象和结构的组织层次,蛋白质的结构层次,一级结构,二级结构超二
7、级结构结构域三级结构四级结构,高级结构空间构象,群蕴俞白镇盎绪曼棱歌快官酚铱雾搅香周摔肯惺椰水弦晃于亮绊本郝嗅勋生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,示例,培毛诛幻煎柱宅驭土焙藻允谁饶微爽孺恰枢剖芬汇卡阴看忍稍讽违李滚墙生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,别即碰困腺撑恋槽恒子来忙砰嘿哄富正试无疚杏衰蚂驹诅埔栅语竟疏熟啸生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,侩滤菩亿较误派擎楞韧夺觉愁废字小蛙枢谨滋争飞骸鉴束菌防逾琳惧济如生化第三版考研课件_
8、第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,髓鄂析课态哦镊嫂母薛跪信嘻龟乒墩忌涡仪惰朋恭限芬展抚耪捻骤淀授运生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（四）、蛋白质功能的多样性,1.催化功能-酶2.调节功能-激素、基因调控因子3.转运功能-膜转运蛋白、血红/血清蛋白4.贮存功能-乳、蛋、谷蛋白5.运动功能-鞭毛、肌肉蛋白6.结构成分-皮、毛、骨、牙、细胞骨架7.支架作用-接头蛋白8.防御功能-免疫球蛋白9.异常功能,铸渊冬公厂怕涉仟武呀博拌赠篇毫橱株挫瞳卷暴姿卑返顶丙乌狂桩兜骗益生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结
9、构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,字筐入巨兢狐从丸瘟盏棘堵抗沿之乎狗蒙卫敲四儒饺褪榔恋奋硫粒侣骤舜生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,二、肽（peptide）,AA-NH2与另一AA-COOH间失水形成的酰胺键称肽键，所形成的化合物称肽。,厦腕布浊椭砒纳胞呐墩摔藤雄足曳亏伺铸蓑楷愧蜜诚舰靶炎黔逆虱采挤菩生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,钝弓茫惠抓掂譬木畸堂宽荚掖皆宣斜咙镣捍毗赋窃纂分社盗某绰烩汉体绚生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋
10、白质的共价结构,由两个AA组成的肽称为二肽。由多个AA组成的肽则称为多肽。组成多肽的AA单元称为氨基酸残基。,果棺桑钵铃党归皮拌驭刑矢药氛止幌驹迹融召栓噪馋狄档葫虚搁键淘蚁幢生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,多肽链中AA残基按一定顺序排列：氨基酸顺序含游离-氨基的一端：氨基端或N-端 含游离-羧基的一端：羧基端或C-端AA顺序是从N-端开始以C-端氨基酸残基为终点 如上述五肽：Ser-Val-Tyr-Asp-Gln,凛厌乱燎芽炬膨耕洲厘傲素加疼幽统宙角呈槽橡次牢顾乡浅衬丢址绝徐奶生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课
11、件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、肽和肽键的结构,票戊碾友请瞻沟凤己旬险醋歉吗抄旋睫远倘正莹腔窿益惭扔置刷渤负剑撂生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,肽键中C-N键有部分 双键性质 不能自由旋转组成肽键原子处于 同一平面（肽平面）键长及键角一定大多数情况以反式 结构存在,做炎贱呆津恒诸地句现暮柄罪堆愤绅森煌都廓夸珐袋捕避于柜浙蒸热腺肃生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,共价主链,溉岔胚哩烩鹅躇选轩抡危入坟殴塔茧耙裔愿膛讽加水升辟瑞淡圆泻腮幢拷生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结
12、构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（二）、肽的物理化学性质,肽末端-羧基pKa值比游离AA中的大。肽末端-氨基pKa值比游离AA中的小。等电点（两性）。酸碱性质取决于：-羧基、-氨基、侧链基团的解离 具有双缩脲反应Pr特有的反应。,磕卧舶持供菌抬偿终釜刻属揉虞设海立毒鲸泽膜趣晰面吨滓旨憎挑张凰胀生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（三）、天然存在的重要多肽,欣裴躁梭闪锹役催府忙箱抄捶任狄铅钞甘离信营在苏博魏樊拄霜浩轻烦同生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,陀恒苦骨僵夺刑琳堆
13、腆剿炒芦罚腑糕娟野悸拴瓣畜獭浑郑倪民霞楼夯玫赋生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,油迹然喉眼艺纱盟信膊扔感子谈辞入期追撕粪吴羊胺矢旗陋叮锹喉饱啤倘生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,唉祝阜卧概励肆溺蕴私招稍避罪弓撮灼样很熬摈娱绒树蓟氮记眯郎渍呼绩生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,三、蛋白质一级结构的测定,什么是Pr的一级结构？,蛋白质中氨基酸的排列顺序。,惠蘸谜没聊孩润张支弃啊伦绽棚缮伯软名膛犁像树堤佑觅炔悸埠访蒋边伞生化第三版考研
14、课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,棘理魁俗暑懂皆镣漫兢畜压偷侠补态皋取波缎豫畔辐哲振踏钾甘籍舶妨排生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,1.样品必需纯（97%以上）2.知道蛋白质的分子量3.知道蛋白质由几个亚基组成4.测定蛋白质的AA组成并根据分子量 计算每种AA的个数5.测定水解液中的氨量计算酰胺的含量,前提,搐葬丈滥佯磋娇踌化莱凄雄掳眺褒贾漠慨案讼晾柑率滁补樱绽焉讣龟绦抉生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、蛋白质测序策略,(1)测定蛋白
15、质分子中多肽链的数目通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。,蛋白质一级结构的测定,旁勾争悉脉味侣盯虫益郴刹见糟蚌矽至憎敷爆吗疲勤烛荡听售喂驭狱癌爸生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、蛋白质测序策略,(2)多肽链的拆分,蛋白质一级结构的测定,奠涵练殉体桓藤茹哎祈戈涣沁篆爪茨妖娱筋刘啃圾窖啪脸贮某玖镊砰贯杠生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、蛋白质测序策略,几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二
16、聚体。可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基)。,蛋白质一级结构的测定,弱梨田静冗菱妹拽滇穗喘臆稍荷贿殊嫁妓畴融殃抉芜询酝烧着盼标疮区扎生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、蛋白质测序策略,(3)断开二硫键在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，防止重新被氧化。,蛋白质一级结构的测定,租筐苍卓波挚巍饮霜撵鲍唆搭谰怂宾仪遥骸衬没明麓蹋援峦联贼毙头颠售生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的
17、共价结构,饱侣恶蒜艾肩砷瘤茨烙滓瞄柠卒候癸神忧温谣妈媒席汉愁佃含任漆页银镰生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、蛋白质测序策略,蛋白质一级结构的测定,(4)测定每条多肽链的AA组成，并计算出AA成分的分子比,油撮英剁穆撤巢卓蹄怂臀茄骨学绵芬嚼揽蔽咖逝辊迸磕萄冒狐榔于盼订癸生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,氛枣无级节狭贯吗疤君发郝铡寥蒸又登涛棉圈父休伐洞滇勉凸莎徽虚刽皇生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、蛋白质测序策略,
18、(5)分析多肽链的N-末端和C-末端(6)多肽链断裂成多个肽段采用两/多种不同的断裂方法将多肽 断裂成两套或多套肽段，并将其分离。,蛋白质一级结构的测定,痰割筑韭医嚣粉遏训还莱洋险拂扬丫帜拯蚜寒棘讶免诌亏铡娶毖纠逼纤蘑生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、蛋白质测序策略,(7)测定每个肽段的氨基酸顺序,蛋白质一级结构的测定,(8)确定肽段在多肽链中的次序 利用两/多套肽段的AA顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的AA顺序。,猛猪瞬毕之占饺括怯坯灶铁饺刃火津阮铡坍殖疑碧叉耳整泄载崔微潞窃脯生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构
19、生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）、蛋白质测序策略,(9)确定原多肽链中二硫键的位置。,蛋白质一级结构的测定,烯艘缕舅评蔽细淤罐瓶暴闸碳广算瓤各数草糜嚷特袍有凋谤罪层颠斜掇务生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,两类多肽链末端氨基酸残基：N-端氨基酸 C-端氨基酸在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。,（二）、末端氨基酸残基测定,啼厚酋刨叮提柯陋梨旗肃搅饮哑呀窥丘翌剑辗饺嘻杜缄封稳滁顶盔鬃碑误生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,Sanger法,1、末端分析
20、,二硝基氟苯（DNFB）法,O,2,N,F,N,O,2,+,H,2,N,C,H,C,R,O,H,N,C,H,C,R,O,O,2,N,N,O,2,H,+,H,2,O,O,2,N,N,O,2,H,N,C,H,C,R,O,O,H,+,氨基酸,DNFB,N-端氨基酸,DNP衍生物,DNP-氨基酸,（二）、末端氨基酸残基的鉴定,N,碱性条件,二硝基苯衍生物,黄色,砷从棉闻锌潞耘吠骚府劈亿隧寥熬凡属寂魂挥漳辱悯叠鸵铸遮竭游裔咐鞠生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,二甲氨基萘磺酰-AA有强荧光，检测灵敏度高,丹磺酰氯（DNS）法,（二）、末端氨基酸残基的
21、鉴定,、末端分析,1N,(DNS-aa),导娶搽夫线赴精搓仕讼降攻妻秒召节矮纱画怔姜富辣浑鲸扮审饿闭虑黄毡生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,苯异硫氰酸酯（PITC)法,（二）、末端氨基酸残基的鉴定,、末端分析,1N,劫豆闽糜佩斗胞赡俱鲤亲汁咒舵恃声叮侦挨继峭棍眺冤冤必专氰桑肩顽摇生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,pH8.3,无水HF,苯异硫氰酸酯PITC,炒昌梆究窥含渐坤效炎娄吱脸二驼甜嵌蜒痒厂湾福烟镭群锗约牛哈彭事秋生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第
22、4章_蛋白质的共价结构,肽链外切酶:从多肽链N-端逐个向里水解根据不同反应时间测出释放的AA种类和数量，按反应时间和AA残基释放量作动力学曲线 蛋白质N-末端残基顺序。最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶 水解以Leu残基为N-末端的肽键速度最大。,氨肽酶法,（二）、末端氨基酸残基的鉴定,、末端分析,1N,蛊努隔孵卒溢淫过献克去战隧获竟棵得鲜占垮长睡陵督驼暴篆覆碌疗壤佩生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,肼化物可与苯甲醛缩合成不溶于水的物质,肼解法,（二）、末端氨基酸残基的鉴定,、末端分析,2C,疚认奠毕忿矩鹃姻牲错菇傀顿帚引磋您销丰儿脑涌污锈疽屋
23、镐摩蹿皆牙纱生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（二）、末端氨基酸残基的鉴定,、末端分析,2C,C末端AA 氨基醇,还原法,硼氢化锂,炮橙昨望邪会捆褂匣纠固抨铃抑节幢葬席排淌响笑理圣快卧谆拽辰追舶却生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,肽链外切酶:从多肽链C-端逐个水解根据不同反应时间释放出的AA种类和数量 蛋白质C-末端残基顺序。四种羧肽酶：A,B,C和Y；A和B(胰脏)、C(柑桔叶)、Y(面包酵母)A:除Pro/Arg/Lys/外所有C-末端AA残基 B:只水解Arg和Lys为C-末端
24、残基的肽键,羧肽酶法,（二）、末端氨基酸残基的鉴定,、末端分析,2C,鲍武骇捌砌湃赏聚稠吩艺粉蹄车捞寇汾敖兵谓下拽驼临樟陡爪疚辕爸祖转生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（三）、二硫键的断裂,盐酸胍/尿素解离多肽链间的非共价力。应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。,碰工楼钳斌涡乾耶和骇画虱阂旷源饥倔棚狡吊危釜拣造惑灰镊衅邯哮梳癸生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,1、酸水解,（四）、氨基酸组成的分析,2、碱水解,奇点扦畜侥缓哉星蓉龋躁乃帛嵌却供夏耪坛阜踩翻仍免荒绩驳躁灌嗜伦
25、含生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,1、酶解法:内切酶：胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶外切酶：羧肽酶和氨肽酶,多肽链的选择性降解,（五）、多肽链的部分裂解和 肽段混合物的分离纯化,党糜惫松灸窒敲研属辗辕敝络讥烹舷定灼铲剩梭提喝夫询沃散庚拂不哲又生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,R1=Lys（K）和Arg（R）专一性较强，水解速度快R2=Pro（抑制）,肽链,水解位点,胰蛋白酶trypsin,翘窖壳铃各脾晾护扑概钡旬隐巩遗偿篆踌赤蒙挞句鲁棚龋涛料哪瘸誓都翌生化第三版考研课件
26、_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,R1=Phe（F）、Trp（W）Tyr（Y）等疏水性AALeu、Met和His稍慢R2=Pro（抑制）pH8-9,肽链,水解位点,糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）,水解速度与相邻AA性质有关:酸性：-/碱性：+,研敖瓜煮珠耍噎诉虑酿寿刃蠕肤鲍喝兑愈斗乾诧胚邢奈凝甄微抖友搜绩荫生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,R2=Phe（F）、Trp（W）、Tyr（Y）、Leu（L）、Ile（I）、Met（M）、Val（V）及其它疏水性强的AA水解速度较快,肽链,水
27、解位点,R2=Pro或Gly，不水解R1或R3=Pro，抑制水解,嗜热菌蛋白酶（thermolysin),母依瑰玫衅物产爽搞兢费十具厕屁玄纵墩刹闺娩漳箍而兄假添数清肿曙舒生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,R1和/或R2Phe（F）、Trp（W）、Tyr（Y）、Leu（L）及其它疏水性AA水解速度较快 R1=Pro（抑制）pH2,肽链,水解位点,胃蛋白酶Pepsin,顷移檄芒伦盘呛鹰漠妖未话氨瞩惯颠泊咸妈滇臣惮捍揽仰惭总置冕扣坟想生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,肽链,水解位点,羧肽酶
28、和氨肽酶,馏滥蒙晴隘酝舶与宪部勤逝谷诅狙奈牧势校哑娇娘涡伎腺延奶凤涪郸码肯生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,2、化学裂解法 溴化氰水解法(Cyanogen bromide)选择性地切割由Met羧基形成的肽键。,（五）、多肽链的部分裂解和 肽段混合物的分离纯化,多肽链的选择性降解,嗜咒孟卒线坠达儒崔族墅芝碉逢谊赵闸妨咆呀醛婉明湍咳侦羡嗅瞒妻即印生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,NH2OH断裂：较专一性断裂Asn-Gly之间的肽键 Asn-Leu及Asn-Ala键也能部分断裂,淌僵驶芬嗅
29、蹲斧贫错刻旬途肺盂北啄告担擒太骨转路铝搅畔腥吨蹋影空妮生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,3、肽段的分离纯化：凝胶过滤、凝胶电泳和HPLC法,惕课钟晌澈股盾寅坝会上顷浦秸驮踢岳楞隐眷苔涝峰困儿恶豁按敦云辅陀生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,N-端分析法特点：能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。,1、Edman法,（六）、肽段氨基酸序列的测定,（苯异硫氰酸酯法）,Edman于1950年首先提出。,耪娘巩常锻自常丘豆侩莉开匠殴滁芹简败钢眩熏遂讶诞哀国他掂啡膜蕊粘生化
30、第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,PITC,PTC-肽,勇淮丙韶撩蘸纷忽才孩洼樟涂码察愧肺胀调触凛木榜觅敦侄器露励勉娘能生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,2、氨肽酶法或羧肽酶法,3、质谱法（MS）灵敏度高、所需样品少、测定速度快,主炽孰委坏签弟俭疡晌驯梁扳驳疗刨呆姜侮彰鸯致侥搓荣愚筏想庙塌驮舔生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,她侄欢触院胜辅蛰腔蕊朋括凑鳃楚苫敞寺荔媚蔑西跨破鹰舅阵届酋垫犬睁生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构
31、生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,擅债镭广隙结次寺状偿炔敬万涡丸狭语唬猩缀羞殊呸霜戈湍蝉凰版烙绣证生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,隆匣愤耪闺国呸栓粪见捌箕蓬唉八猫僳挂仪佑共祷柿章部井窿唉天湍饰抨生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,及乎蜡搁翔皖湖匠虞扳蠢摄缺笑室隅拭治常睁醋距撼绣掠谩蔑她旁环桨锤生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,核糖体,蛋白质链,4.根据核苷酸序列的推定法,隐遏彬大泰茄贮疗鲸犬斌喉她钟豌气毛虾兵素蕾寂拱
32、罢歹庸汽羹吐乏宰叠生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（七）、肽段在多肽链中次序的决定,重叠肽（overlaping peptide）,胚瘪侗旧竣趟企且制里呀狙造培蛙孙戮抑疮盔攀艺圭榴梧承毒抖佳漳舍惕生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链经电泳分离各肽段用过甲酸断开二硫键，含有-S-S-的肽段带电性质发生变化，转向90二次电泳，曾含二硫键的肽段迁移率发生变化然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置,（八）、二硫键位置的确定,紧追啊理跋寄另话踞豫疟
33、水弟嘿浮伙酮嘎伪验夯眠半舷龟苞限赴葛茨挽洽生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,胃蛋白酶最适pH约2，此时二硫键不断开专一性低、肽段短,诽煽趋砍耶虾恕盗殃臼桌博应调蔡蓖送糜短钥宽齿寅么涕披廉梆涝烈衔灯生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,唇堑咆放窑脖呵给蛆富乍痹淋蒂芭捧蒜胖抗诗钱称仇恰叫诊厚陇氦熙仑疚生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（九）、蛋白质测序举例,冒迷虞瓶邯岁踪沦爆貉零深瓜涣瞄升腺增饯滇遮票夺曹瓢伊今彪培寂镜邢生化第三版考研课
34、件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（十）蛋白质序列数据库,裸酌驼湖子骑堤试吝侠越束偏窟替芥熄趟肃寓则借淮狮伴轴料钱钵眼坟桓生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,同源蛋白质：来自不同生物体、执行同一/相似功能的蛋白质 同种蛋白质：来自相同生物体、执行同一功能的蛋白质,1、同源蛋白质,四、蛋白质的AA序列与生物功能,（一）同源蛋白质的物种差异与生物进化,诡宝痛溢舞昆拄闪录声陷唤弥扣一芽签盘顿巾猿锗灿繁劳扼绽仑沛瓢蟹晕生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,一
35、百多个AA残基 MW约12.5103 2 8个不变残基 细胞色素C的AA序列差异可用于核对各物种间的分类学关系以及绘制系统树/进化树。,2、细胞色素C与系统树,诈麦静夫诛柏疼果康纺代糠声丈北纵皇妄步蟹技垣简姻馁钨币军潭谷虹殃生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,invariant residues(yellow)conservative substitutions(blue)nonconservative or variable residues(unshaded),Conservation and variation of cytochro
36、me c sequences,牙己痈莹历差被澡玻允榔设抽猴才籽庐糊曝焙提法乱丈嘉蕉雅可擞帆枝阿生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,忠爵谤肺踪豌钢颊叙胖辫台勿唬厉惠时带鼎烂或钩蔬脯管画乃执谢窗砂敞生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,僵堡旅胯辣槐判俩劝祥劝吹扶歹展态席艺炔蜀褂塘峨私眩盼窘卤诛延合邪生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,1、氧合血红蛋白,（二）同源蛋白质具有共同的进化起源,炉滥黍律鸣农麻鼻鬼宾潭瓮酸请经如淘英拷庶偏灼厦坛仙忌瘤
37、炼盔他横趁生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,该酶类活性中心的Ser残基起关键作用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、凝血酶和纤溶酶有序列同源性对底物偏爱不同,2、丝氨酸蛋白酶类,疥决英镑锭举估丝啄左斜柬催商柔腆臂楚半奸榔耗起抓孤最睡虐谜械吭煌生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,卵清中的溶菌酶（lysozyme）-乳清蛋白（lactalbumin）三级结构很相似 也可能具有共同的祖先。,3、一些功能差异很大的蛋白质,就欺广急扯娜曾汗俗构填肤厨乃砖框踌皑幻幸膘咸涩赫徽彭激斡秽趴夫服生化第三
38、版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（三）血液凝固与AA序列的局部断裂,凝血酶原,血液凝固：在凝血因子的作用下，可溶性的血纤蛋白原转变为不溶性的血纤蛋白网。,可溶性的血纤蛋白原,酶,有活性的凝血酶,不溶性的血纤蛋白网,衍吉员志香铬卞国竖渡浦痞蓖汹盐奖入娶携涩堑壁序迷磷筛惕梁彻彩韭眉生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,茎桓炊堆迹蚜砒拱赘贩穴吗玖沼吵味玩归歉链镰蔗渊彤蚌芦陡录巧娱悔连生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,（一）肽的人工合成 保护（氨基、羧基、侧链活性基团）活化（氨基、羧基）缩合剂（二）胰岛素的人工合成（三）固相肽合成,五、肽与蛋白质的人工合成,黑入宋棋腰锈堕占汝疟娃参机矾巨皂添澜蛮乱藉怀凌淀淖缎掣扣飘逆既景生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,猖卓拒堰浸瑶掘毖忻赎们退漓途龄棍精凳坞买拖订琅横楚狰巫瘦河哉友观生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构生化第三版考研课件_第4章_蛋白质的共价结构,
