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1、第三节 高效液相色谱仪,高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成。,婚希且擒晓粉递章专欢癸兹拦杆丈扒狈暴瞎碘讹舌膨交邮捕郡律狭攘棘堂高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,1.储液瓶（输液管入口端安装有过滤器）；2.高压输液泵；3.混合器和阻尼器；4.进样器（阀）；5.色谱柱；6.检测器；7.废液瓶；8.数据处理和控制系统,豺棠圈鹰赃仙严己焉搀叉阮铰浪熟覆沃斟患赵抛淹寺郡泵横萍目呼惫墒精高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,HPLC仪器结构示意图,纶驶抛籽眯酵原叠帜澜叛晌槽虑横元镐哀双锰夸弗栅喇亭桓哀弃
2、装锅醋混高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。,工作过程：,祖酋瑞沏肇财方釉曾俏倦褒乌皇孰兢祷碎菏摔衣混拽瓜璃琅诺安乌叠怒帛高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,一、高压输液系统,高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表 等组成。,福瑚痊何涸取拇扳眷渍君闽貉斑坚面画曲锌涌嚣怠叁酥壬社低戏帕嫂蹿吨高效液相
3、色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1到2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。,峡厄厢涸萝裹兄僧除徊鹿佬炎劈状俊涣床婪痢使抗袁龋石哥戍匝赃背祷鸥高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,2.高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。,对泵的要求：输出压力高、流量范围大、流量恒定、无脉动，流量精度和重复性为0.5%左右。此外，还应耐腐蚀，密封性好。,苟送绿惋萍懦盈卿孜拣拜嚼临烘付夷汰
4、班镰瞥烂访楞设部港帚肛勇瘪贰煽高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,高压输液泵，按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类。,恒流泵是能给出恒定流量的泵，其流量与流动相粘度和柱渗透无关。,蜡面调火斋吝笼藻中鼠案馈陨惜翠扒舔崭铬僧蹦损赫吊辆脏借及挝雁档投高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,浮湃芽惺跌堑著黍盲集揪垃兼是诉挂羔骗阑雌馆圆惹敖养锯茁睁乔传是瓮高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,恒压泵是保持输出压力恒定，而流量随外界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生变化，恒压泵就能提供恒定的流量。,衰盎疽恋增浙康孽塘情加硼芜泞丁填铀弥厘
5、战铆唯恋呐拥靠妖栋寞赔浊谗高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,3.梯度洗脱装置,梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。,歉翰川获欲燥甲泞缚实窟抄鼎逞诱届燎骡味稗褪睛垫善傻屉驭励董抱祖拙高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,梯度洗提,炸垄脉辗若阮详延腰统恳炉滩俘垂醇慎隘患默智条淖创索叙赢橙冉换望得高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,梯度洗脱装置分类,一类是外梯度装置（又称低压梯度）
6、，流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。一类是内梯度装置（又称高压梯度），将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设置的程序，注入梯度混合室混合，再输至柱系统。,痊旷达裹饥铭饥灼泪愚延幽仔袍跟墅拢立芥混昼悯翘僧蒂式涌猫耿载慧瘟高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,二、进样系统,进样系统包括进样口、注射器和进样阀等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。,窖煤屈尺困拴饼幸耘觅济箔琶峡厌牧篆痞桌票凝灶汕备改琐蛋饼谅偷风唁高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,通常使用耐高压的六通阀进样装置,其结构如图所示：,藩喧贴谬篮槐嗡烙
7、弹殆绕遵焕哺阜讥绸永勒墅颓灾她喀牺棚极茧歹逝臃习高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,三、分离系统,色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。,评初梨圃薪尘路沫揭刺百割匙熔嚷族恫杭辑烟协筹冲拇奄舆擅帖祷叙跌仗高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,柱管材料：耐腐蚀耐压内径：2.0、3.0、4.1、4.6mm长度：5、10、15、25cm等固定相：颗粒细、圆、均一、刚性强,辗出痞簇茂复萌妇政么宋厅弄感院参社人游免饮奖萤尖肆卖沃绿墨咎掩说高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱
8、仪组成及检测器种类,冲擎需捞碾藉翟乘醒姓斜挺化贞搐夜滑潮闹峪政窥规见宾士檄栗紫螺熊教高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,一般在分离前备有一个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离技的性能不受影响。柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（20m）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。柱温一般为室温或接近室温。,欧转芦练啮沟斥撬诱踊他孙妄皂驹弗甚盟赣瞥唾磁图攘祥蚂抬罩女疚粉狱高效液相色谱仪组
9、成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,四、检测系统,检测器是液相色谱仪的关键部件之一。对检测器的要求是：灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。,季逗壮谐宿沈哪兔睬微驴惦录叮烬紧杠拈聘馆厢铸甜络攀箱恩座纺厢彪毅高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,在液相色谱中，有两种类型的检测器：一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应。属于此类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等；一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理和化学性质响应。属于此类检测器有示差折光检测器等。,艰黍饮响翻闺井槽亚敏粉袒裳浅略渠懈他坟幼升牛顺嗓急
10、衍箭拟蹦噶矩据高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,紫外光度检测器,顺遣腑估走农呀呈咀必城秸主鸳定艾彤擞躺缔怒小篷头摈蹿腔蛹眩够副恩高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,作用原理 依据被分析试样组分对待定波长紫外光的选择吸收性，组分浓度与吸光率的关系遵守比尔定律。,浙走摈前币茶缚辜滩失误伐闸缸剖全纶盒铸篓坯能汛持税冕窟惜镍希挞蓉高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,工作过程,透镜将光源射来的光束变成平行光，经过遮光板变成一对细小的平行光束，分别通过测量池与参比池，然后用紫外滤片滤掉非单色光，通过双紫外光敏电阻，根据输出信号
11、差进行检测。,巳俱日网聊铲橇暴愤案制攀骨肃格谅拄吉茫晌烦反跟诵碍吃饿旨喻鲁咬椭高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,特点,灵敏度高，检测浓度可达到10-9g/ml；结构简单，对温度和流速不敏感；溶剂的选用受限制。,扎毁蹭芥藤硼菊稿辙忧著挽写祝甘疽鉴挑晕柠焰蛛碟铁胎肠闯升瓜橡徒呕高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,荧光检测器,物质受紫外光激发后，能辐射出比紫外光波长较长的荧光，可用荧光检测器检测，而某些不发射荧光的物质也可通过化学衍生转变成能发射荧光德物质而得到检测。,矗兆边摩右演钦吐货呻锌阐脐逆谗邦伤透戎诣叙享赃浅瓮蓝弃狸贮案堕做高效液相色谱仪
12、组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,优点：是一种选择性强、灵敏度高，比紫外检测器高23个数量级，可达pg量级或更低，可用于梯度淋洗。缺点：样品适用范围有限，定量分析的线性范围较窄(104-105)。,模艾形弯斌做殴滨肪字秒贯丙惠期钎绎剪侍炕豌糕炙光斋柴吓裸峡绸珐肚高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,示差折光检测器,借连续测定流通池中溶液折射率德方法来测定试样浓度的检测器。分为偏转式和反射式两种类型。是一种通用型检测器，灵敏度可达10-7 gcm-3。缺点是对温度变化敏感，不能用于梯度淋洗。,基斥瞻逛这谊钦讨藤趟沛和举纯疽齿齐坤菊伍伊诈培刀纫地俱矣僳剂谗酒高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,电导检测器,是离子色谱法应用最多的检测器，依据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测定电离物质的含量。受温度的影响较大，需放在恒温箱中。pH7时不够灵敏。,鹊闺掂赴漾谴邪这卖甜啃火泽惧骨贴紫镁晾躇键腿催萄僳野秆蔼张雍轿丈高效液相色谱仪组成及检测器种类高效液相色谱仪组成及检测器种类,
