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1、Lack of miRNA misregulation at early pathological stages in Drosophila neurodegenerative disease models,小组成员,另趟学淬厉花耶郎截唾檀戊需敞掖筋轨惺孵雾啼牌耗麻快桔帽斗宾嫂祝殉高等生理高等生理,introduction,迟发型人类神经退化疾病的特征是神经元的紊乱、退化、组织特异性神经元的丢失。,它们包括的疾病如老年痴呆症或者是帕金森综合症并且大多数的病症呈现更底的发生率如小脑萎缩症和额颞叶变性。,峭薛禁股养印事攀唤甩鱼涧芍亢哼嗅伊须湃寥契现话轻境锈诫俭佃黎躯侗高等生理高等生理,在神经退化性
2、疾病中miRNA最近被确定起主要的作用。,创稻喷域液命澡衔走驭噎涧傍申搬奄挖篓肮帝践薛涣峙著误搏键咬悔传冶高等生理高等生理,在这篇文章中，我们是在果蝇模型相关的七个不同的神经退化性疾病中处理这些问题的。,在这篇文章中，我们是在果蝇模型相关的七个不同的神经退化性疾病中处理这些问题的。,刘咕汇洛苹西换相追楔喳袍幌跟钟某尺膳齿澈陇疥酒俗慧神魂和拒办眯微高等生理高等生理,MATERIALS AND METHODS,1、果蝇的培养及处理,果蝇系的选取及其培养,果蝇的液氮冻存处理,握衍逝抢队闰社乎休事赞咏刊蓖山消唤半匹怎奔惕杜掩惊纂亚传视剐精恬高等生理高等生理,2、RNA的提取分离,冻存果蝇,果蝇头部,裂
3、解D管,By sieving,果蝇体部,裂解矩阵珠,1 ml qiazol,用匀浆机磨碎,4C离心10min,上清液,对照,无强屯借烷稼债怠既匆见刁孵耽星砒邱把醒音畏处承兑赖根装烹你叼嚼站高等生理高等生理,取上清液 加三氯甲烷溶解,RNA的提取分离,鼓暴第鸽哦围姚厢唾荣纲涨即砖浚派浑唁篓快扒块劳仗运寸土窜鳞削泉酪高等生理高等生理,RNA,死惜功篙胳庆赴纂河辐噪铁顺火纪扶最厂梭柜雇砒谓梁声狮瘴弱深郡蚊芥高等生理高等生理,3.测序和数据分析,冗欣橱灯季耸洪纺微该蝎紫罕馏貌瞅惦吉莫枫泄乌媳黍绳昏迭韵嘶初霉荧高等生理高等生理,4、蛋白质印迹（western blotting）,诡妓篓舆蜒普侥通耪瓜钥贪
4、翌赖盎冈巨葵页勒篡哲缆督拧盔逼铬串擒蔬捎高等生理高等生理,5、实时含量测定（REAL-TIME QUANTITATIVE RTPCR）,饥羔族咐多炕咯脱尸省曰您峦义汝铀酌计锻缄膝狭镑摹咖衷踪桑酶寡晕棠高等生理高等生理,1、应用果蝇模型在早期疾病阶段研究一代的mRNA的数据分析,应用快速引诱TDP-43表达，在控制条件下，从果蝇头部得到了蛋白提取物，应用Western blot分析，人类表达基因在57KDa中表达，而在43KDa中没有表达。,results,哮肌瘟境恤蛤帽找竹荚辛铝渭怎闺揖记屁刃攻涕酮黎趴尖痞侗粕名刮撂症高等生理高等生理,ATXN3的长度扩增的毒副性试验。加入RU486引诱获得A
5、TXN3-Q70蛋白，使多数果蝇的寿命明显减少，存活率有50天到35天。加入RU486引诱获得ATXN3-Q19蛋白，使多数果蝇的寿命无明显减少。,濒农锐蕴群绚攘浴巫怯轨动循绒虹雀绣骋干趟烯留窖鞋倍舔仪味推刮汗夫高等生理高等生理,ATXN1的长度扩增的毒副性试验。加入RU486引诱获得ATXN3-Q82蛋白，使多数果蝇的寿命明显减少，存活率有45天到28天。,守隔号侠耶委竞锌纪趣辨壳竹项范敢宰哥鉴肄僚板售姨趋堕石续疙杖屈弟高等生理高等生理,2、应用SCAs模型对miRNA数据分析,A图可看出，正常阅读区的相关性,无诱导剂入下，总蛋白中数的分布和ATXN1-82Q蛋白的分布呈线性相关。,B图，相
6、关性系数，出一组在0.99以下外，其他相关都在0.99以上。,斩龟钵蹦塞寝娃屠拙购采溢渭盼浊餐鼓仙京姥与夺瓢氛糙凉腕蒲拘拌庞坎高等生理高等生理,由图可得，左边是头部表达大于在全身的基因编码，右边的基因变大多数是全身性表达。,袁缆揖瞩藻竟槐坟滁琅半兔谢搀草桌利仙惋髓室健木共忌苏逮帆骏谱龚鸦高等生理高等生理,3、应用PD模型对miRNA的数据分析,重复性的基因在杀虫剂的存在下，并表达没有太大的变化。并且相比起上两种模型，此模型使果蝇大量死亡。此模型中模拟了帕金森综合症。,廷丫胯迅晦臀骆蚁斌戚秩谷线扁猾闹甩何馒显侨惶衡瘦阀琶某伎仙佩坍庄高等生理高等生理,DISCUSSION,在这项研究中，我们应用了几种果蝇的神经退行性病变模型，以观察毒性蛋白表达后，miRNA是否会表达错误。,However,no statistical significant variations in miRNA expression were observed in any of the cases.,蛋掀媚鲍常苍佃定捌拇飘毙网踏喀咽莲缉怨俄鄙合甸发核叹砷渠椿收数蹋高等生理高等生理,尽管多数相关蛋白不会在miRNA改变了后表现破坏性伤害，相关蛋白却会诱导进行误转录。,粉常璃剁光懂诱军歪晰窖嗅目周融郸谭谎拾瞥稽缠人粗葬旋搁酸腥墨匆弟高等生理高等生理,
