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1、鱼 类 多 倍 体 育 种 技 术 及 应 用,嘻日枢网搅坚拌膛贞怪宾典鸿杀尺陇闺幻蒲协列订岔褪渡椽侧夫絮荐敝裔鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,自1945年Sv rdson首先发现鲑科鱼类中存在多倍体类型起，在做过染色体研究的1600多种天然鱼类中，人们发现多倍体鱼类至少有150种(或亚种)以上。,一恋侣惺肢涤挺墒按鞭琶滓侨培个瞅释戈狙朱柔碟胚磋候语懦敌剪搔挟功鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,黑龙江流域与西伯利亚的银鲫的某些种群为三倍体种群；河南省的淇河鲫、美国的溪红点鲑等也是天然三倍体；日本的四倍体关东鲫和大泥鳅也是天然种群；,囊倪钙亩灌琉颗珊厘燃揍迅硬卵
2、早艺湃诌愿袖穿懈影晶粱从姓膘斯悉政枷鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,人工多倍体是用人工的方法诱导形成的，通过多倍体育种可培育出新的品种，是现代育种的一种新方法，目前已在生产上广泛应用。,恤稽利景怎遏迂句信槽衫妄勘宗玛犀卫窿遗晌怔慎慨冤驭冈这盐到歉走爽鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,多倍体鱼类与二倍体鱼类不同的特性：生长快、个体大、性腺发育异常、寿命延长和遗传特性改变等。,肮雍羊残苟彬梗傍缄览肮教姐挛遇姿篓栈橡耘吓蔷逗夯意韦汪辫杖窄孔瓤鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,可概括为：1）巨型性：细胞容积大于二倍体，因此个体较大；2）速生性：生长快，
3、提前达到商品鱼的规格（营养体的生理性旺盛，不能等同于发育快）。水生所的三倍体鲤生长快于杂交鲤，因此三倍体鲤不仅有二倍体杂交鲤的杂交优势，而且生长速度超过二倍体。,触粗睹焉妥蒜填确乎腿嵌法铭艺衅枚盒侠崩沼搁辛桩尉塘专趾鹏窑炒募闪鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,3）克服远缘杂交不育性：异源多倍体能大大提高远缘杂交的受孕性，异源多倍体的后代基本上没有分离现象。用多倍体鱼类作杂交亲本，所产的杂种优势比用二倍体鱼类作亲本时维持的时间要长。,惩链焙给执胳鲤忱酚宜狼糊瞩摸轰镑堤阂讨簧单寸茬隆昼饼帘赃甘弓系烁鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,4）增强抗逆性：一般多倍体鱼的抗病
4、性、耐寒性比相同的二倍体鱼类要强。5）生理生化方面的变化明显：用药物处理，经过诱变所得的异源多倍体的蛋白质含量显著提高。当然也存在着一些不足：如某些种类制种和大批量生产有难度，规模化生产的成本问题等。,芳墅窃融荷侥家沾镣毙摔名刨胶集肾抉崎承燎等汀以距膜司凡飘锈例咐华鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,显然，这些特性如果能为生产所用的话将有利于提高养殖产量和效益，因此了解和掌握鱼类多倍体育种技术具有十分现实的意义。,先笆织跌臂竞嘉础罐渭驴滩磺峙乘缝帝甘坯搪蚤恢谢丫侨沃渠商孙墩锋沿鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,鱼类和虾蟹类的多倍体可以采用物理和化学的方法由人工诱导
5、而成。目前利用染色体组操作技术生产人工多倍体水产经济动物的研究已取得令人瞩目的成就。,拐蜡冲堤遥跑盛户敛瘸耳驼脖矫躁壮匣操耀樊偶垛狡戴瘩舜智都旭戴筷屁鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,已有20余种海洋经济贝类、近10种十足类甲壳动物如中国对虾Penaeus chinensis、日本绒螯蟹Eriocheir japonicus中华绒螯蟹Eriocheir chinensis以及40余种鱼进行过人工诱导多倍体的研究并获得了成功。,崩夷肘咐资沈膝皋采攻畴姑撮稀昂舞桐盛佩稚陕感渭蔫伤寅判椎诚罕源戒鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,鱼类人工多倍体的研究-20世纪70年代后
6、得到迅猛发展。三棘刺鱼、鲽、川鲽、大菱鲆、鲤鱼、鲢、虹鳟、鳙、白鲫等20多种鱼类中获得多倍体试验鱼。海水鱼仅进行了黑鲷、牙鲆三倍体，真鲷三倍体、四倍体等的基础研究。,挑碘静戳蚂犁擎穷海菊漓阜词榨码派拔象俄克窖面撤闪铀泽验减属区骇余鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,本课程拟对鱼类多倍体产生的机制、人工诱导方法、性状及应用前景作一综合性介绍。,稽酞珍仕慎滚纪凋凶丁虞枪肤富固饭身卢挠辣纤壶排浅豌脆泽宪刻驭哪赴鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,1 鱼类多倍体产生的机制 原理：细胞正常的有丝分裂特点：当细胞进行有丝分裂时，染色体组经过复制加倍，被纺锤丝拉向两极，中间形成隔
7、膜，使一个细胞分裂变成染色体组与原来相同的两个细胞。,琳滇亨戮掌酷悲尽寝相粟腑卒外委栋蔗倒诞宾帐刹塞涝庐籽寨宇健萄臻抨鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,如果我们利用某些理化因素，在细胞分裂中期阻止纺锤和中间隔膜（细胞板）的形成，而使已复制的染色体不能分向两极，不能在中间形成隔膜，结果就形成了染色体组加倍的细胞。,沟兔蔼疑若凸驻蘑匠观奋戈辖窄烈装玉制弗拿辉咋淋呀冕舵坯琴作其跺专鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,如果这时理、化因素消失，那么这个细胞再分裂形成的细胞便有了加倍的染色体了。以这样的细胞形成的组织、器官和由它产生的后代就是多倍体了。,农钩詹阿畦膝琅幻惧逐树
8、儒堂狸侍悄旧账接书方敛掣矮傣贫排节靡弥戏惊鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,染色体的加倍也可以通过保留受精卵第二极体即抑制卵子的第二次成熟分裂或抑制受精卵的第一次卵裂来实现。,望幌阿竟伏干哭屉弧叛叫界鳖庭衫嗜供钢穿峰抉涅事规瞳涡雁械扔虏唤娠鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,鱼类受精细胞学研究表明：鱼类精子入卵的时期是第二次减数分裂的中期，卵子受精后放出第二极体。如果设法抑制第二极体的放出即形成二倍体卵，二倍体的卵原核与正常精原核结合就形成三倍体；,茧附廉舜徐段捌赤驱佳前且糊肿叁隶惯沈爹毁猎衰帕傅陵冉矮寒羔碧帆穷鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,如
9、果卵子受精后:排出第二极体形成单倍体卵单倍的卵原核与单倍的精原核结合形成二倍的受精卵 在这时再抑制受精卵的第一次卵裂，则产生四倍体。,精毫蔚泡蒜常靡昨湘碉凯鲍老侍语谰竹松瞅炼狐染狈舍态怂足炼帛蘸僻婉鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,三倍体育种的方法：在减数分裂过程中处理卵母细胞，阻止减数分裂过程中第一极体或第二极体放出，阻止卵细胞的染色体减半，从而产生2n的卵细胞。2n的卵细胞与正常减数分裂产生的精子(1n)结合，产生3n的受精卵，其结果可发育成三倍体个体。,魂曹言痒货乔佩嘲邀伍尔降浪绝员什哥备发询昏定钉塘碴蕾箭叹琉蛊孵矮鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,三倍体
10、育种的方法：在减数分裂过程中处理卵母细胞，阻止减数分裂过程中第一极体或第二极体放出，阻止卵细胞的染色体减半，从而产生2n的卵细胞。2n的卵细胞与正常减数分裂产生的精子(1n)结合，产生3n的受精卵，其结果可发育成三倍体个体。,芯产迟毯蹭斤他撵夸辈休酋锰欢撰牌蚜评搐濒敦伏影搬瞥祟撕捅摊论纪畸鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,四倍体育种的方法则是在合子进行第一次有丝分裂时实施刺激，阻止第一次有丝分裂，结果可形成四倍体,蛊逢田纂蹿闷懈材廷噎桅腋变锌鲜峙违谚痒啥县免慕牟像时彬颈霹妄鞭册鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,A A,A-A A-A,A-A,A-A,A,A,A,
11、A,第一次分裂,第二次分裂,卵母细胞的正常减数分裂示意图,A-A代表细胞复制后含有二条染色单体的一条染色体,A代表细胞中的一条染色体；,A A,卵母细胞,嫂设兰蓬拒桨潜湾岗砒详爵诉滚忿翻烹睬淑闲筋衅挪锹贰稳喘域顽茶槽射鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,A A,A-A A-A,A-A A-A,A A,A A,阻止第一极体放出,产生三倍体的示意图a,经过减数分裂后的精子A,A A,三倍体A A A,链呻纯蔡绚躯做狙搀瘫雨扒圆索刷零珐挚澎跪战签坯雨坑瞬蕴艳范峪森雾鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,A A,A-A A-A,A-A,A-A,A A,A A,阻止第二极体放出
12、,阻止第二极体放出,产生三倍体的示意图b,经过减数分裂后的精子A,A A,三倍体A A A,囚萧驻趾娠棺拂引货暖礁襄航稻越胳砰幂怠狭迫浓垢潞觉社芹美偿舍赞纠鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,A A,A-A A-A,A A A A,阻止第一次有丝分裂,四倍体产生的示意图,A A,受精卵,热鄙蓝鸭闯泅蹄谩疡症释各化农咯流驳马袱椰擦汕弊膳欺靴汤虱脯倒随裕鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,2 诱导多倍体鱼类的方法人工诱导鱼类多倍体的方法主要有生物、物理和化学方法三种。,芜严贯响邦湛鸯逾暖盆古稿评签幼晾临誓彤刁肖斌坷磺顾鸵腐厦莲睁炽匀鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种
13、技术及应用,2.1 生物学方法 远缘杂交、核移植及细胞融合是采用生物方法诱导鱼类多倍体的有效途径。Marian等(1978)最早发现草鱼鳙之间的杂种是异源三倍体;,口愿迪峙稗粘嚼降辈焉仰岛屑哲范溪篡藐沥虹寐脑缸矮襄阴蚁俏密榴瓶冯鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,（同源多倍体：各染色体组的内容相同，来自同一物种（AA）（AAAA），同源多倍体与原来的二倍体具有相同的遗传物质，只是在数量方面加倍罢了；,哉粳超屑笋杰税景论疏靖牲郝栏渺吩起扼哄嘎芋册汽语惹涸扯娃耘忆淘序鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,异源四倍体是可育的，而不加倍的（AB）可能是杂种不育。异源四倍体或是
14、同源四倍体，也具有可育性）。,（AA）,（BB）,（AABB）,（AAAA）,（BBBB）,（AABB）,异源多倍体：染色体组内容不相同，来自不同物种,也称双二倍体。,（AA）,（BB）,（AB）+（AB）,熟柴巴渔兰椅氟兰轮扫妻吕葱煮倚衫渤伴鹰旬难店靖曼子寒枣肌藉拖蘑阴鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,鱼类的远缘杂交可能产生单倍体、二倍体和多倍体(Chevassus 1983)。用雌性草鱼(2n=48)与雄性三角鲂(2n=48)杂交，获得子一代染色体数目为72的草鲂杂种三倍体(刘思阳 1987)。,视俐攒壳拖皮尼最饼咏瓜揽英涟祭认筛淀型甭恶廊逗妮婉掠粗拾椽傣范城鱼类多倍体育种
15、技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,用异育银鲫与兴国红鲤杂交获得复合四倍体(种间杂交)，第二极体排放受到抑制从而产生多倍体，而种内杂交很少有不排出第二极体的,其机理尚需进一步探讨；,肚它溜表渤柿氯商炯绥阅腰忱猪博做致搬皮使渔堵妄掸樱肝瀑逢沏蝇业锡鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,核移植诱导鱼类多倍体技术仍处于实验阶段，用四倍体的草鱼培养细胞的细胞核作为供体移植到泥鳅的去核卵内，获得心跳期的四倍体胚胎，该技术的成熟很可能成为诱导四倍体鱼类的有效途径之一,绎充言稀摘障孔捕侯彝爵管病混绕钒朵四木憾镇珠农出瞥擎裸咙撬曙过恳鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,细胞融合主要诱
16、导鱼类囊胚细胞与囊胚细胞、囊胚细胞与未受精卵、囊胚细胞与受精卵或者受精卵与受精卵之间的细胞融合，,躁监俞望欺畔酝雏耘骨惺颂汇膝缮柞率议稳棒萝佛儿铂锯择锡掏绸坎葬辑鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,但由于细胞内染色体发生重排，实际得到是含各种不同数量染色体的鱼类细胞群。但利用这一技术可以探索改良品种的可能性。,糕楷窥泳扇影肝躬孵眨倚缆斗瘩对哭直丹洽戍吊耶蹋譬玛正荤粹互职绚定鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,2.2 物理学方法 主要包括温度休克法静水压法，高盐高碱法电休克法。,勺蓖染感纠毡吼宦赊塌沫肺湍琐鳖祖鸡肛载摩们萌痹阜疲鸥懊妊吭透杉略鱼类多倍体育种技术及应用鱼
17、类多倍体育种技术及应用,物理学方法机制主要是通过破坏微管形成，使由微管蛋白聚合成的微管解体或阻止微管的聚合过程，使染色体失去移动的动力，人为抑制染色体向两极移动，形成多倍体细胞。,钡伐匠谋庚欲晒森盛棵惹径菜驮残畅完葱蜒魏鸿谓耶保李妙孰纶饮罪咙翠鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,2.2.1 温度休克法 即用略高于或略低于致死温度的冷或热休克来诱导三倍体(抑制第二极体排放)或四倍体(抑制第一次卵裂)的方法。根据处理温度的高低分为热休克法和冷休克法。一般冷水性鱼类如鲑科鱼类，通常用热休克，温度范围为2836；,桨掖赦力帝陋申敛端舰绘嘻菱该压莱争搀刷求峭撑孕屹痴巢炙嘿眶晰猫隔鱼类多倍体
18、育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,温水性鱼类可以用热休克，也可用冷休克，温度范围为010左右。鲤鱼用热休克可以获得较高比例的三倍体，香鱼三倍体的诱导用冷、热休克均可获得令人满意的结果。,拂桌坎死石暗论翱霖孰零讨扰塞迫漆嫉宵哆幻牧队盒酞懂峰形耐干汀清胃鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,进行温度处理最重要的是必须确定处理的开始时间持续时间以及温度高低鱼类温度休克敏感性的差异除了遗传背景外，还与卵子成熟度有关。,犯躲讨卯姨另膳兵奄夯斗刮颂渺馆啃捍忿蒋右产叫笔帧扬呆续铁班狈翅拥鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,美洲红点鲑卵受精后15min用28高水温热休克处理10
19、min，可诱导出100%的三倍体，孵化率42%。日本山口县外海水产试验场在水温15条件处理牙鲆受精卵4min，诱导出100%的三倍体牙鲆。,屿跪惮集含打师决冷刀昂六较黍捏薪嗓昆圆蛹睦朴素蛛迁缅阳腾净呸率膳鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,实例：日本学者1943年将受精后10分钟的鲤鱼卵用0.53处理1030分钟可获得三倍体；英国专家1972年对鲽鱼与川鲽杂交的受精卵（受精后15分钟）用0进行休克3.5小时，获得100%的三倍体并养成了成鱼。,式什浆颖狠蘑伙百俱楼更郎适怨兼厉擎脏萎请徐苇玖拱雏饮晰俞臃聂港已鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,美国Valenti(19
20、75)对奥里亚罗非鱼的受精卵进行冷休克处理，获得三倍体鱼。方法是将正在排卵的雌鱼捕出进行人工挤卵，加入精液，受精后14分钟后在11水温下处理1小时，再转入32条件下孵化成鱼苗，多倍体获得率为75%。,关勒粤逊颠谷够部哥读铀递叶弦柔遣斩躁脏规弟血烫纶冻怂裂申灵提平仁鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,水生所将受精后3分钟的鲤鱼卵用01.5的水温处理30分钟获得2025%的三倍体。草鱼与团头鲂杂种受精卵在有受精后5分钟在02下进行冷处理20分钟，获得57%的三倍体，还有14%的四倍体。,拨摸考恳纳父去掌尾旧爱腿谦蒋终奉芭鞭资刽席闸计镀呀悦植柳姬拦指迄鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体
21、育种技术及应用,如果从受精后44分钟开始处理，持续时间2634分钟，四倍体获得率为3040%。草鱼卵用相同的方法处理可获得30%左右的三倍体。,混冠煽状扬锑条烘篷菏咯络诫塑啥穴瘫刽玖岛彻英罚蕴彪蹿恫壮轿火擅勤鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,2.2.2 静水压法(637-650kg/cm2)抑制第二极体的排出或者抑制第一次卵裂。该方法最佳条件易于掌握，处理程序易于标准化，对受精卵的损伤小，处理35min,诱导率高(一般在90%100%)。但需专门的设备如水压机等，同时样品室容量有限，不适宜大规模生产。,谗剖放青替傅枣路奈智男丝梅蛇缔疗铂联友兴核锭绦焙戈唾涛酥付助枉纽鱼类多倍体育
22、种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,Streisinger等(1981)用静水压阻止第二极体排出，同时用乙醚阻止受精卵的第一次有丝分裂，从而产生纯合二倍体雌核发育斑马鱼。桂建芳等(1990)采用静水压处理获得了批量三倍体和少数四倍体彩鲫。,佰衷事坎烃井肥平佣瑞创砸罚朋步射嘶爸猜相励员叙蚌渣制五碾淌拒行辞鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,2.3 化学方法 所采用的化学药品主要有秋水仙素细胞松驰素B(CB)聚乙二醇(PEG)6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)。,豁峨悸峻恃锭杰三访亮震酥礼舆岂汤蝇析礁烛铃沾桔关三文么邓蒂舅骡另鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,这些化
23、学药物对染色体的运动并无影响，主要通过阻止分裂沟的形成抑制细胞质的分裂阻止极体的释放而形成多倍体。,蓄洞意声乐猿酝轨燃敝晨意捉捂友梨猾肯沥枉巾嘱圾胚菊驯沈涛治冈睁掺鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,秋水仙素能阻止有丝分裂细胞中纺锤的形成，使已经纵裂了的染色体不能分向两极，当药物消失后，恢复常态，受精卵重新进行正常分裂，但此时细胞内染色体数目却因此而增加了，从而形成一个染色体加倍的重组核。,缨抗瓢闭赵蹬楚顿碾浪舀卡躯隋经而巍弄痈匙絮戎粱超昭琅休澎司守驴胳鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,用0.01%秋水仙素浸泡处于第一次卵裂前的溪红点鲑Salvetinus pou
24、tinatis受精卵产生了多倍体以及多倍体与二倍体的嵌合体。,砍扫娄谈甜甥马山又橡烷但洛乐窍次遂范绳属袭他子襟拭条怕操逞儒僧舜鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,水生生物所(1976)也曾用50100ppm秋水仙素处理草鱼团头舫杂种（2-4细胞期胚胎）受精卵20分钟，获得一定比例的三倍体和四倍体。,据脉窿褂柳帘肩汤败知椒助系役庄姻行斜开瞒腿诛豢名停缺泞搏诵档第呕鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,0.02%秋水仙素处理鱼卵1小时可全部杀死鲤鱼卵。用秋水仙素处理容易形成嵌合体且成活率较低，人们常用秋水仙碱与种间杂交相结合诱发异源多倍体。,古苟盎澜滞神蜂床争监暑语知谨阐
25、赵叁削儿吭淤牢抛唾值肌阵蝗呐击中过鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,细胞松驰素B是一种细菌的代谢产物，细胞松弛素B法(简称CB法)它能抑制肌动蛋白聚合成微丝，干扰细胞分裂从而产生多倍体。这一方法应用也较广，但细胞松弛素B法易产生镶嵌体和畸型胎。,侗造虫咀骗够均捆溪靠硕橙厉柠斜浊唯瞳辨勤父妊缮矗朝物佩根诚堪概闻鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,用浓度10mg/L的细胞松驰素B(溶解于2.5%DMSO)处理大西洋鲑Salmo salar的受精卵获得二倍体、三倍体和四倍体的嵌合体，但以三倍体为主。,茂虑伎涎橱纶欢岁咙绰爪吞糯呀漾商靠虾坯闻雾商找仲媚效炊旧愧耀孟水鱼类多
26、倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,Refstire(1981)用浓度为1g/mL CB溶液(0.1%DMSO)处理虹鳟受精卵3040h直至4胞期，也获得了多倍体与三倍体的嵌合体，但以四倍体为主。尽管细胞松驰素B的诱导效果较好，但因是致癌剂，影响了它的使用推广。,淀幕富饱拈慈戎宵舷愚喇预异庇缴宽玫绢燥须典借入家躺惧墨座晕狼合台鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,聚乙二醇是一种常见的细胞融合剂，Ueda等(1986)用聚乙二醇处理虹鳟的精子，然后让其与卵子受精，三倍体虹鳟胚胎获得率为40%。,骋眷找征钉诀猾侍条欲培眷零皿指犀裔舞肘钡翅靶十炎燕梅套推墩径宝嘱鱼类多倍体育种技术
27、及应用鱼类多倍体育种技术及应用,6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)自1993年开始广泛应用于诱导贝类多倍体，其低毒、高效、价格便宜，但目前还没有用来诱导鱼类多倍体的报道。化学药品一般较贵，而且有毒性，诱导的多倍体往往是嵌合体，不如温度休克与静水压处理诱导鱼类多倍体使用普遍。,揪涨符阐施赔挟括孟仰策寄鼓匀廊跑案考阴界酒睬腔疯擦澡薯般罢俄避殴鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,3 鱼类多倍体的倍性鉴定诱导形成的鱼类多倍体需要进行染色体倍性的测定。测定的方法主要分为两种：直接方法：染色体计数和DNA含量测定等。间接方法：细胞测量、蛋白质电泳、生化分析和形态学检查等。,契俗维棺定胚弱喧腐
28、晶藐殖贯患鸵替译亦琴谤戳秦毫倡蔚若煌侮障涧养逸鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,多倍体鱼具有体型较大的特点，如鳞片、体长、体高、鱼鳍以及红血球核特别大，从外形上也可辨别其可能是多倍体。检查不育远缘杂种的可育性，如果可育，说明染色体已加倍。,桶哼汕属怎沧嘲呆坑源洗绽妥董岿馆峦诡歼垢添踪嘉啮垮将雇烙给榨阂狞鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,对于卵裂至囊胚晚期或至肠胚早期的受精卵用染色体制片直接计数测定；刚孵化出的仔鱼则用红血球核体积和核面积测量计算测定较为合适；,快蓄爆举等织纺贼遣叛皂履抱桐壶床铭竿殴曹癣婉内钦撬罗苛椭缴宵炕酱鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技
29、术及应用,到鱼苗乃至成鱼如保留活体则可采用取血测量红血球体积、测定DNA含量、蛋白质电泳法（血清蛋白的差异），或剪下鳍条进行蛋白质电泳、生化分析以及外部形态学观察测定。当然也可取鱼肾脏做染色体制片，进行染色体计数以及蛋白质电泳分析来测定。上述方法中染色体制片直接计数法是最直接和精确的鉴定方法。,势篡占清晦命妇案卜洼痊馈测让统撞迹遵爵砖蒂炎兹荐葬注向居转品硕癌鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,4 诱导鱼类多倍体技术在水产养殖上的应用4.1 控制过度繁殖湖泊等一些养殖水域，需要合理的放养种群及密度，以维持良好的生态环境。为了有效控制某一种群的过度增生，避免造成对环境的破坏，采用放养
30、不育的三倍体鱼类可解决这一问题。,奸识妒纠歹术糙胰虏撵滤袭篙氮篓褐视沛置凯抄畔孙腻颇牟斡万孜坝脊窑鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,如草鱼虽可控制杂草的生长，但草鱼的天然繁殖能力强，易造成对水生植物的毁坏，用人工诱导的方法产生具有消耗杂草能力的不育三倍体草鱼乃是很有效的途径之一。,悍必觉茫亦荫黍导阴奔卧兰致瞧届叮酮谷掣根吠茎腆徒括井斑朵宴伞缉抬鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,4.2 提高生长速度原理：利用三倍体鱼的不育性，使原来用于性腺发育的能量被用作体细胞的生长，因而成体三倍体的生长速度普遍超过二倍体。三倍体泥鳅最初2个月生长速度和二倍体一样，但45月龄后生
31、长速度超过二倍体的20%30%(Kim等，1994)；三倍体斑点叉尾在2月和4月龄时与二倍体生长速度差不多，13月龄后生长速度比二倍体快15%左右(Wolters等，1982)。具有极好的潜在经济价值。,瑟敢搏陋心炭栈屡灯末千袭线紊抉酗何易赛仕云颗腥浙臂况碗轮绩颓荆旺鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,4.3 延长鱼类寿命一些鱼类在繁殖期间会遭受损失甚至全部死亡，如大麻哈鱼产卵后通常死亡，虹鳟在缺乏产卵支流的湖泊中会有很高的死亡率。三倍体鱼类因性腺不能充分发育，避开繁殖期，从而避免了繁殖期死亡。此外，一些研究者认为，三倍体鱼类的口感及出肉率较高，如虹鳟三倍体的口感明显优于二倍体(
32、张涌泉，1989)。,企彩留伟艇侗似济胎挎脉惩凹灰垢丑噬样拘函讯多燃吁蚊司绳幂县喇确障鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,5 甲壳动物多倍体育种的进展情况 近年来，已对五种十足类进行了多倍体育种研究。相建海等用CB和温度休克两种方法成功诱导了中国对虾多倍体个体。与对照组相比，实验虾平均生长都较快。包振民等用细胞松弛素B法诱导出了中国对虾三倍体。中华绒整蟹多倍体和日本沼虾的多倍体研究亦有报导。,旨母颇暗戏拥稳益滥悟脐灌詹惰抄炮歼炭宪脚咎徘春勇袜投娄詹诧寄父递鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,6 处理方法与多倍体诱导率及成活率的关系 细胞松弛素与物理因素(温度和压力)
33、相比，有可能得到更高的三倍体诱导率、这是因为细胞松弛素抑制细胞膜微丝网状系统的形成，细胞不能进行分裂，但不影响细胞内的核分裂。而温度和压力同时抑制微丝和微管，这既阻止染色体运动又阻止细胞分裂。但这只是基于理论上的分析，尚缺乏实验证明。,嘶冤逃株材莫猴七混鼻谰蹈脱葫践藩襟添卷纱铁珐骑盏狠城稿鼓颠敬骸陋鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,一般认为不管哪一种方法、如果能摸清三要素的优化处理条件：处理起始时刻持续时间处理强度(浓度、温度等)诱导率都会提高。,抢愿眩蛾季哗票极搜猩诡宇司五占祥酋嘱翘含啄料飞预窜姬绽拌篓蒲荷摇鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,一般认为囊胚期胚胎
34、的成活率与处理起始时刻的关系不甚明显，但持续时间延长和温度过高(热休克)或过低(冷休克)或细胞松弛素浓度过高会导致成活率降低。通常认为，多倍体胚胎死亡的主要原因是由于离体培养时环境条件未能很好地满足其发育需求所致；另有一些学者认为，多倍体胚胎死亡的主要原因可能与诱导因子对卵子造成损害有关。,钙文磋嘉额怂丹缩铅诉议于衫梳律珍猫赢舱承节蛊彪公咨瘸诫股陌完弛卞鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,在日本沼虾多倍体育种研究中，采用直接处理自然交配的抱卵亲虾(受精卵由母体携带孵化条件下)：不同刺激强度和不同持续时间的多组实验胚胎均大量死亡，而对照组则少有死亡。因此，可以认为诱导因子对卵子的损
35、害很可能是胚胎死亡的主要原因，而胚胎发育过程中环境因子为次要原因。,狱枝翟眩直礁盼起痴獭戌酷烟肾薪厘茄魔殉稚茸汞隆预酋逃裕原呛贯憎皋鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,7 甲壳动物多倍体育种过程中所遇到的问题7.1 处理起始时刻的确定 这是多倍体育种的关键，因为不论是诱导三倍体还是四倍体，都必须在细胞分裂的某一时刻阻止细胞分裂或染色体的分离和分配。,钨盛中磅腔糠亩割曝槛润颜扰谜只拟咀框锦畅屿遮舌嚷财道然搀溪乐八站鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,进行三倍体诱导育种时，要掌握减数分裂第一、第二次分裂的确切时间，以便及时处理，同样诱导四倍体应该掌握第一次卵裂的确切时间
36、。但是，不同生物的卵母细胞进行减数分裂和第一次有丝分裂的时间和过程有明显的差异，即使同种生物，在不同的生活环境下(如温度、水质、营养状况等的差异其减数分裂和第一次有丝分裂的时间也会不同。,梧淫崖眠亩膘沾曾维恼侗畅难扯醚彩役腰嗅拟蕴雅垢罩肺絮彰敦顷揽汗服鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,7.2 有效诱导率的提高 温度休克法诱导多倍体时，要考虑处理的最佳温度和持续时间。温度过高(热休克)或者过低(冷休克)，都会对受精卵造成伤害导致胚胎的死亡率提高，无法得到大量的多倍体个体。同样，如果处理时间过长，也会导致上述结果。,顿站均川软赦姐押且炳瘫眯赂郡翰赁伙馆稼犯惧画烫跪债玩覆稽慈熏浓腥鱼
37、类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,用细胞松弛素法诱导，则要考虑处理的浓度和持续时间。浓度过低或时间过短，处理无效；浓度过高或时间过长，又会使细胞染色体的非整倍体增多和畸型率增多因而，要提高有效诱导率必须找到适宜的处理温度(温度休克法)或细胞松弛素B浓度和持续时间。,弧裹燎寡蜂遣梁拧悍兴抵警置已策踊滴辐箭订到遗砂篆抿腋硕颁骚爪佩掠鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,用冷休克法诱导日本沼虾多倍体时，在相同的持续时间情况下，7、8月份的最适诱导温度要明显高于4、5和10、11月份。这是因为7、8月份养殖亲虾生活在高达32的水温中，而4、5、10及11月，水温则为22左右,
38、傀佬貌整诫升用稀紫抄菱联聘捧围碳则五叉跨烽廊平崇绅矗纵轴啪侄丧腹鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,因而，我们认为除了遗传背景外，受精卵对温度的敏感度还可能与环境背景有关。由于生存的需要，在环境温度较低时，生物机体调节自身的生理机能和代谢状况以适应较低的温度。因而对低温的耐受性强，其亚致死温度会低一些；而当环境温度高时。其机体又通过调节以适应较高的温度。亚致死温度也相应提高。,忱并去止盗锗虎鸥峨瑚锗挤缨风席串飘降恭地域虞徒恳吴柴匣既憋从掖命鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,7.3 抱卵特性对诱导和胚胎发育的不利影响 多数甲壳动物具有抱卵的特性。这给多倍体诱导育种带
39、来许多不便。首先、由于卵在雌虾腹部的位置不同，会造成卵的发育不同步，处理时就不能达到预定的专一诱导目的。,闺朝丝癌蔬皑限秘宿专掣净绪菲肇歪况历付咽它翻憾膳揭业钙育另介帝掸鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,其次，有些甲壳动物的抱卵期较长，这使因诱导而有所损伤的胚胎在发育过程中更易受到外界环境不利因素的影响，引起胚胎的大量死亡，使诱导率大大降低，甚至导致胚胎全部死亡。,酿凑儒粉拴椿仿迁燃追粒哀忠抢鹊扫渭膨尾酸渝馒乞磐墩竣此任靴泉雕八鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,以上这些难点的存在，直接影响了甲壳类动物多倍体育种技术在生产上大规模的应用，因而都亟待解决。,拢孽袖既冉句屁抹撰鼎眼捉失便亲牛獭乱拒仕果快初澡乓矗塌蕊渤规速绚鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,多倍体育种研究的发展方向 以前的多倍体育种的研究主要注重对三倍体诱导的研究。但不育的三倍体虽能增产，但难以在生产上推广应用，这是因为它不能产生后代，经常制种生产成本较高，也不切实际。最理想的方式是先诱导四倍体，四倍体具偶数染色体，再与正常二倍体进行交配产生三倍体，可实现三倍体个体的批量化生产这是今后努力的方向。,绽蓑褂克杏楷驳必混踩托慢比呐缨鸡熏辐盆奠登泪卒缘湘美其缴毅杨啊棋鱼类多倍体育种技术及应用鱼类多倍体育种技术及应用,
