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1、批注A1J:修改见批注I胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中锌指蛋白139、血管内皮生长因子的表达及临床意义薛孝斌，刘刚2,任冬莉3西安市长安区医院普通外科工肿痛科工麻醉科3,陕西西安710100【通讯作者】刘刚，邮箱:【基金项目】陕西省卫生事金项目(2018D126)摘要：目的：研究锌指蛋白139(ZNFl39)、血管内皮生长因子(VEGF)在胃瘟原发灶和区域淋巴结转移灶中的表达差异及其临床意义方法，选择2019年2月至2020年8月在西安市长安区医院就诊的78例胃癌患者,共分离出78份癌组织和42份转移淋巴结组织，记录患者临床病理学特征。通过免疫组化法检测患者原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFl3
2、9、VEGF表达率，采用X原发灶中ZNFI39、VEGF表达与临床病理学特征的关系.结果S胃W；区域淋巴结转移让ZNFI39和VEGF表达率分别为78.57%、73.81%,明显高于其原发灶表达率隹L53.85%、50.00%,差异均有统计学意义(PVO.05)；胃癌患者原发灶中ZNFl39、VEGF表达率在不同肿瘤分化度、不同TNM分期、有无淋巴结转移患者间比次差异均有统计学意义(P0.05):经Spearman相关性分析结果显示，胃癌患或原发灶中ZNFI39、VEGF表达阳性率与肿瘤低分化、TNM高分期、淋巴结转移发生呈正相关(PUlUdVthCcD【c、i“ndifference3、zi
3、ncfingerprotein139(ZNFI39)andVascularentiothelialrowthfactor(VEGF)inprimaryRaStriCCanCerandregionallymphnodemetastasisanditsCIiniCalsignificance.Methods:FrOrnFebrUarV2019IoAUgUSl2020.78PaliCnlSWilhgaslricCUnCCrWCrCSCICCICdfromChanganDiStriClHKSPilalOfXian.AIOIalOf78CanCerIiSSUeSand42metasialicIYmDhn
4、ode【i&suesWereisolated,and【heCliniCoPathologiCalfealurcsOfIhCPaliCnlSWCrCrecorded.ImmUnohiSIOChCmiSIrYWaSUSCdIodeteciIheexpressionralesOfZNFI39andVEGFinDalienisDrimarYfocusandregionalIVmDhnodemetastasis,andehi-quaretetIhCrdalionshipbetweenIhCexpressionOfZNFl39andVEGFinprimaryfccuUndCliniccrMihNcizic
5、aIfe;MUrc、WaSanalyzedlhrouahSDeSrmanCOlTelationanalysi,Results:theexpressionratesofZN-139anlI(iiregionalI；nphiuhIcmetastasisofgastricCanCerWere78.57%and73.81%,restectivelv,WhiChWereSianifkanHVhigherIhanIhOSeinPrimaryRkus(53.85%and5().(X)%.respectively).WilhSignifiCanldifference(P0.()5).ThKexpression
6、ratesOfZNF139andVEGFinIheDrimarVfocusOfgaslricCanCerDatienISWereSignifiCanHVdifferentamongDatientSWithdifferenttumordifferentiation,differentTNMStageSandIymPhnodemelasasis(0.05).TheresuksOfSDearmanCorre山IiOnanalysisShoWedIhal【hePOSiIiVCraleOfZNF139andVEGFCXDrCSSioninDrimarYfocusOfHaSlriCCaIICerPaIiC
7、ntSWaSPoSiIiVelyCorrelaledWilhIoWdiffereniaionOfIUnK)r.highTNMSUIgeandIymPhnodemcaslasis(P5cm者33例；伴淋巴结转移者42例。L28曜纳入标准：患者为初次发病，1消确诊为胃腺痛：均行手术治疗H愿意配合术中病理组织留样：术前无抗肿瘤治疗既往史:研究与患者知悉同意，,排除标准：病情危肃者：伴其它部位恶性肿掩者：伴先天性疾病及心、肺、肝、肾等严重器质性障碍者：伴严重免疫系统疾病者，1.3方法1.3.1 _ZNF139、VEGF检测将分离组织的石蜡切片切为厚4.0m片的薄片，脱蜡后通过免疫组织化学染色法招标本染
8、色。首先用0.50%高锌酸钾浸泡水洗520分钟，再用1.0%草酸浸泡25分钟实现脱色（通过癌组织大小和镜下观察脱色度具体判定），脱色后对抗原热修复25分钟，招薄片至于30%H2?室温下孵育12分钟，柠檬酸钠伴高温促进抗原的修复，随后冷却IO分钟并清洗，使用小牛血封闭液封闭胃癌组织和转移淋巴结组织20分钟后清洗3次，每次两分钟。随后用兔抗人ZNF139单克隆抗体（美国Sigma公司提供）、鼠抗人VEGF单克隆抗体（上海长岛抗体诊断试剂有限公司）：均按说明书配比稀释，稀释后在4C环境下孵化一夜。清洗后37C环境下孵化二抗半小时。再用链霉亲和素-生物素复合物免疫组化剂孵育半小时，复温50分钟后用链赛
9、亲和素-生物素复合物免疫组化剂孵育0.50小时，二氨基联苯胺显色10分钟，苏木素再染色5分钟后清洗、脱水、固定封片即可镜下观察。1.3.2 染色观察结果判定标准细胞质或细胞核在镜下可见棕揭色颗粒物为ZNF139和VEGF表达阳性表现，其中YEGF主要集中在细胞质，打阳性细胞占比和染色强度用，J分级计分，及后综合判定表达是否是阳性。ZNF139和VEGF染色强度评价标准：无色、淡黄、棕黄、棕褐依次对应。分、1分、2分、3分.ZNF139表达阳性显色细胞所占比例计分标准：WI居、15%V占比W55%、55%占比W75%、75%依次记为1分、2分、3分、4分。VEGF表达阳性显色细胞所占比例计分标准
10、：10%、10占比W25%、26%5050依次记为O分、1分、2分、3分。ZWI39阳性判定标准：阳性细胞占比和染色强度评分相加为1分计为阴性，1分计为阳性。VEGF阳性判定标准：阳性细胞占比和染色强度评分和乘，。为阴性，21为阳性。1.54统计学方法应用SPSSl8.O统计学软件进行数据分析,计量资料以均数土标准差（2s/4W巳更改表示，计数塔料比较采用X检验；两变量不满足直线相关性分析条件空用Spesrman相关性分析，以P005为差异有统计学意义。2结果2.1日癌原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFl39和VEGF表达率比较胃癌区域淋巴结转移灶ZNFI39和VEGF表达率明显高于其在原发灶表
11、达率，差异均有统计学意义（V。05）,见表1,其中ZNFl39、VEGF免疫组化染色结果见图1和图2。表I胃癌原发灶和区域淋巴结转移灶中ZNFI39和VEGF表达率比较I例（）J组别例数ZNF139VEGF阳性阴性阳性阴性原发灯7842(53.85)36(46.15)39(5().(X)39(50.00)区域淋巴结转移灶4233(78.57)9(21.43)31(73.81)11(26.19)图IZNF139免疫组化染色（“PO图2VEGF免疫组化染色（x400）2.2胃癌癌组织ZNF139表达率与临床病理特征的关系一胃癌癌组织ZNFi39表达率与肿瘤分化度、TNM分期、淋巴结转移有关（P0.
12、05）,见表2。表2胃癌腑组织ZNF139表达率与临床病理特征的关系比较例（）】工ZNFi39/变量例数P阴性（n=36）阳性（n=42）性别男442d（%）24（%）0.0200.888批注依2）:全部补充I3416（%）18(%)年龄50岁3115160.1030.74850岁472126分化程度高分化3021911.1540.001低分化481533TNM分期I、Il期39261313.206().001III期39IO29肿瘤大小5cm331320淋巴结转移是42123011.3200.001否3624122.3胃癌癌组织VEGF表达率与临床病理特征的关系胃癌癌组织VEGF表达率与肿瘤
13、分化度、TNM分期、淋巴结转移有关（P0.05）,见表3。表3胃癌癌组织VEGF表达率与临床病理特征的关系【例（）】比较-g变量例数VEGF/P阴性(n=39)阳性(n=39)性别男4419(%)J25/%L1.8770.171批注A3）:全部补充1年龄女050岁50岁34314720(%)15(%)2414(%)16230.054().817分化程度高分化3()2197.800().005低分化481830TNM分期I、H期39271211.5380.001IlI期391227肿瘤大小5cm3115160.0540.8175cm472423淋巴结转移是42301216.7140.0010否3
14、69272.4胃癌癌组织ZNF139与VEGF的表达与临床病理特征的相关性一胃癌症组织ZNFI39与VEGF的表达水平与肿瘤低分化、TNM高分期、淋巴结转移呈正相关(PSHIND,LEEJ,PARKJH,etal.DoublePlantHomeodomainFingers2(DPF2)PromotestheImmuneEscapeOfInfluenzaVirusbySuppressingBetaInterferonProductionJJJ.JVirol.2017-.91(12):.16.鲍效周掘患者化疗前后血清VEGFCA199水平的变化及临床价面Jl.实用癌症杂志.2018.93(4)：2
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16、流行病学研窕进展山.中国肿瘤临床，2019,46:22-27,H21et-等温PL膜中的衣达及临床,比义山.河北医药,2018.40(11):434，,131原伟伟，黄晋熙，王程虎.胃鹿组织中MiR8d5p表达水平及与血管生成的关系山.热带医学杂志.201919(11):8083.14管福军.方志华.任立群.等.抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和.39：329-334.1W吴宝萍,_刘亚静._王小兰.一锌指蛋白139及基质金属蛋白酷7在子密内膜腺癌中的表达及意义J一中国综合临床,_2017,_33(3):-254258.3_任建林.一祝明洁,陈峰,一等.一胸背磷酸化醇和血管内皮
17、生长因子在大肠癌原发灶和淋巴结转移灶中的表达及意义J中国组织化学与细胞化学杂志,_2019,_28(1):_44-49.4H171YAoJ,OlANK,CHENC,elaLZNF139/CirCZNF139DronlOIeSCeHDroliferaiion,migralionandinvasionViaaclivulionoPI3K，AKTPaIhWayinbladderCanCCrJI.Aging(AlbUnyNY),2020J2(10):9915-9934.1.ISL李勇王力利,一王银洁，等一胃癌原发灶和淋巴结转移灶中锌指蛋白139与肿痛细胞凋亡和生存素及B细胞淋巴瘤/白血病-2的关系及意
18、义研究口._中国全科医学Nol5,_9(3):_250-254.1191田伟峰,郎小梅.CPEB4和VEGF-C在胃娓中的表达及其临床意义Ul.临床与病理杂志.2017,37(9):1833-1839.1201沈源.保丽玲.吴桂霞.等.淋巴管噌度、微血管潸度与VEGF在胃癌中的生.物学意义IJL馁南大学学报自然科学与灰学版D2018,39(3):223-228,1211修丽姐.刘龙.刘炕.等.胃需组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3蛋白表达及其临床意义J1.第二军医大学学报,2017.38(11):1458-1461.用1221匕丈廉.万、?新.屈中K.VEGF及具受体Fil、KD
19、R发达与目癌临床病理特征的关系IJI.医学临床研究.2016.33(3):476478.WL23J熊真胃癌组织中-miRNAs-及下游靶基因表达量分析及其与临床病理分期的关系探究|J._海南医学院学报2016.1(8):_732-735.例241赵璐，杜小明.血管内皮生长因子和性别决定区-Y柩蛋白-2在胃痛中的表达及与预后的关系J1.安徽医药,2020,24(4):74&750.作者简介：薛孝斌，男，本科，单位：西安市长安区医院，普通外科，副主任医师，研究方向：普通外科，邮箱：，地址：，邮编:710100通讯作者：刘刚，男，本科，单位：西安市长安区医院，肿瘤科，副主任医帅，研究方向：乳腺、胃肠道肿痛的诊治，邮箱：
