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1、第三章 血型与输血（2）,三、Rh血型系统,Rh阳性：含D抗原的红细胞Rh阴性：不含D抗原的红细胞汉族人中Rh阴性率1%,（一）Rh血型系统抗体,1.Rh抗体的产生Rh抗体绝大多数是通过Rh血型不合输血或妊娠产生的免疫性抗体，这些抗体均为IgG 2.Rh抗体的种类主要有5种，即抗D、抗E、抗C、抗c、抗e，最常见的是抗D，凡被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集为Rh阴性3.Rh抗体的特性为免疫性抗体IgG,（二）Rh血型鉴定方法及评价,1.酶介质法 分为直接酶介质法、间接酶介质法2.抗球蛋白试验（Coombs test）分为直接抗球蛋白试验（DAT）和间接抗球蛋白试验（IAT）3.凝聚
2、胺试验（polybrene test）4.人源盐水介质抗D试验(临床应用广泛)5.低离子强度（盐）溶液试验,在酶处理下IgG抗体可凝集RBC,1.酶介质法,1.酶介质法,离心看结果,37,37水浴30分钟,2.抗球蛋白（Coombs）试验,DAT（直抗）:直接检测红细胞表面有无不完全抗体吸附的试验。IAT（间抗）：通过体外致敏红细胞，再检测红细胞上有无不完全抗体吸附的试验。,在盐水介质中,IgM抗体凝集RBC示意图,在盐水介质中、IgG抗体不凝集RBC,抗球蛋白,2.抗球蛋白试验,3.凝聚胺技术,原理 凝聚胺（Polybrene），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红
3、细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。,在凝聚胺处理下IgG抗体可凝集RBC,4.人源盐水介质试验,原理：加入蛋白变性剂，使IgG抗D抗体转变为类似大分子的“IgM”，在盐水中发生肉眼可见的凝集反应。,临床应用广范,5.LISS(低离子强度溶液)的原理,（三）Rh血型鉴定的临床意义,1.输血前的检查 2.新生儿溶血病诊断 3.协助治疗,医院坚持验血后输血 失血孕妇苦等6小时逝去,稀有血型孕妇董明霞在引产时出现大出血，家属要求先输血救命并愿意承担一切后果，但医院坚持严格按照法律规定输血。经过6个多小时的焦虑
4、等待，这位山东济阳的孕妇终于9日下午在山东大学齐鲁医院含恨死去。（齐鲁晚报 2008年10月10日）,血液中心冷冻库提供的4个单位（800ml）RH阴性O型血浆，每个单位按照常规最快也要3个小时才能解冻，且不能满足需要，只能临时从稀有血型志愿者中采集7个单位（1400ml）的血液，这样的血液又需要3个小时的检验，待其筹足之时，抢救的最佳时间已经过去。,尽管病人家属要求先输血救命并愿意承担一切后果，但医院仍坚持严格按照法律规定等到血液检验完毕才能输血。经过6个多小时等待后，引产大出血的济阳患者董明霞最终于9日下午不幸去世,一个省会所在的大医院，为什么自己不备有RH阴性O型等稀有血浆？为什么不建立
5、稀有血型志愿者队伍？在紧急情况下，为什么不及时组织稀有血志愿者紧急采集？,四、红细胞血型系统交叉配血试验,交叉配血试验的原理,交叉配血试验中红细胞血型抗原与相应抗体的凝集反应，可用盐水配血试验、酶介质试验、抗球蛋白试验、凝聚胺试验、低离子强度溶液试验及微柱凝胶试验进行观察。,盐水介质配血方法,离心看结果,交叉配血试验（盐水配血法）,原理：完全抗体分子链较长，在电解质学液中，能克服红细胞表面电荷排斥力，与相对应的抗原结合，使红细胞凝集，从而发现配血不合，有对应抗原抗体存在。方法：1、自被检者静脉采血23ml,分离血清，并配制5%红细胞悬液。2、主侧：病人血清+献血员红细胞 次侧：献血员血清+病人
6、红细胞混匀，1000转/分，然后观察结果。,报告方式：交叉配合试验（*法）受血者*（*）型血清+*（*）型红细胞不凝集，无溶血。受血者*红细胞+*血清不凝集。无溶血结果判断：同型配血，主侧、次侧均不凝集，表示无配血禁忌，可以输血；异型配血时，主侧无凝集，无溶血，次侧凝集，但效价1：64，无溶血，可以输给少量，如次侧不凝集时，应追查原因。,大量交叉配血,献血员之间应进行交叉配备如：献1血清+献2红细胞 献1红细胞+献2血清,抗球蛋白配血方法,患者,献血者,主侧,次侧,37水浴30分钟,三洗,抗球蛋白方法配血方法,加抗球蛋白,离心看结果,阳性,阴性,酶介质配血方法,主次侧均加酶,酶介质配血方法,离
7、心看结果,37,37水浴30分钟,凝聚胺技术,原理 凝聚胺（Polybrene），一种高价离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。,聚凝胺(Polybrene)配血方法,室温放置1 分钟,主次侧均加聚凝胺,聚凝胺(Polybrene)配血方法,离心,聚凝胺引起红细胞非特异性凝集,主次侧均加重悬液看结果,基本操作方法1、试管中加入待检血清或血浆1滴2、加入用LIM溶液配置的23的红细胞悬液23滴3、摇匀，室温放置1分钟（时间长，效果好）4、加聚凝胺试剂1滴，
8、混匀后3400rpm离心15秒5、轻摇观察由聚凝胺引起的红细胞非特异性凝集，若未见红细胞凝集则需重做试验6、加入1滴重悬液，轻摇观察结果 由聚凝胺引起的非特异性凝集应在1分钟内完全散开，若是由免疫抗体引起的凝集反应则不会散开,微柱凝胶介质配血法,红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶介质中发生凝集发应,凝胶试验使用的试剂和器材,交叉配血试验的方法学评价,方法 优点 缺点盐水配血试验 简单、快速 检不出IgG型抗体酶介质试验 简便、经济 准确性、稳定性差抗球蛋白试验 最准确、可靠 复杂、费时、试剂贵凝聚胺试验 快速、准确 需特殊试剂及器材微柱凝胶试验 灵敏 成本高,交叉配血的质量保证,检测前：标本、试剂
9、及实验器材的要求检测中：工作态度严谨，高度责任感检测后：标本存放7天以上,交叉配血的临床意义,保证输血安全 发现亚型和不规则抗体,第五节 新生儿溶血病,(一)ABO新生儿溶血病,是由于母婴血型不合，母体的IgG抗A(B)经过胎盘进入胎儿血循环破坏胎儿红细胞所引起。,ABO溶血症,父母血型匹配，子女才能优生。如果父母血型不匹配，子女很可能得母婴血型不合溶血症。,此种溶血症主要发生在母亲为O型，婴儿为A型或B型者。所以也叫ABO溶血症。,(二)Rh血型引起的新生儿溶血,分娩 时胎儿 红细胞大量进入母体使母亲受到免疫,HDN 的发病示意图,二、实验室检查（产前检查）,1.血型鉴定2.检查没亲血清中有
10、无IgG性质的抗体并检测其效价3.羊水分析,二、实验室检查（患儿血标本检查）,直接抗球蛋白试验红细胞抗体放散试验:与直接抗球蛋白相同，也是检测新生儿红细胞上是否存在免疫抗体。游离抗体试验:是检测新生儿血清中的血型抗体。,三、新生儿溶血病治疗与预防,1.药物治疗与血浆置换2.提早分娩3.宫内换血4.光照治疗与换血疗法5.预防,第六节 自动化血型分析技术,1.微柱凝胶法2.微板法(血站较普及)3.全自动血型分析仪检测法,小结,本章节的重点内容是：ABO血型亚型、血型的鉴定、交叉配血的方法及临床意义！,一、名词解释血型 血型鉴正向定型 血型鉴反向定型 交叉配血试验二、选择题1、交叉配血时,当血清和红细胞发生肉眼可见的凝集反应,则血清中的抗体是 A IgM B IgG C IgE D 以上均是,课后练习,2、ABO新生儿溶血症可见于母亲为O型,胎儿的血型可为A A型 B B型 C A型和B型 D O型,
