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1、梅毒感染现状与实验室诊断,梅毒流行与防治介绍梅毒的实验室检测,全国梅毒流行现状,中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）,先天梅毒,梅毒,MSM人群梅毒和HIV感染率,宜昌地区梅毒螺旋体感染情况,宜昌地区梅毒感染情况总结,梅毒感染呈现逐年增多趋势女性多于男性年龄分布主要集中在20-40岁之间梅毒患者多来自门诊，但不自觉的现症感染者逐渐增加。,梅毒预防与控制措施,广泛开展宣传教育，普及梅毒防治知识开展综合防治，阻断梅毒传播提高监测检测质量，开展主动检测，促进梅毒早期发现提供规范化梅毒医疗服务预防和控制先天梅毒加强国际合作和应用性研究,中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）,到201
2、5年底实现以下目标梅毒预防和诊疗服务专业人员相关知识和技术标准掌握合格率达到85%；孕产期保健人员预防梅毒母婴传播相关知识和技术标准掌握合格率达到80%。到2020年底实现以下目标梅毒预防和诊疗服务专业人员相关知识和技术标准掌握合格率达到100%；孕产期保健人员预防梅毒母婴传播相关知识和技术标准掌握合格率达到90%。,筛查与检测,制定和下发梅毒实验室检测规范梅毒检测三级实验室网络建立性病门诊的梅毒主动筛查HIV咨询检测服务中纳入梅毒筛查医疗机构主动提供的HIV检测咨询中的梅毒检测社区药物维持治疗门诊中的梅毒检测孕产妇梅毒筛查高危人群外展服务中的梅毒检测,梅毒流行与防治介绍梅毒的实验室检测,梅毒
3、病原体,小而纤细的螺旋状微生物长520m，粗细0.2m，有6 12个规则的螺旋 基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕行动缓慢而有规律 围绕其长轴旋转中前后移动 伸缩其圈间之距离而移动 全身弯曲如蛇行,传播途径,性接触是主要的传染途径 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后2年，通过性接触一般无传染性母婴传播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染给胎儿病期越长，传染性越小;输血传染,梅毒的诊断,梅毒的诊断早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隐性梅毒）必须依靠病史、症
4、状及实验检查进行综合分析 梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义,常用梅毒实验室检测方法,病原学检测血清学检测,病原学检查,取材方法一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液暗视野显微镜、镀银染色法和直接荧光法在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。,病原学检查的临床意义,病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体
5、，并不能排除患梅毒的可能性。,梅毒血清学检测方法,问题,Q1：实验室诊断梅毒的两类血清学检测方法是什么？Q2：为什么需要这两类血清学检测方法？,梅毒血清学检测分类,非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,原理（抗心磷脂抗体）：人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。主要是IgM和IgG混合抗体。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,抗体产生时间 感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周一般在感染后57周（或硬下疳出现后23周）产生。（郭红亮，中
6、外健康文摘2010年第20期）抗体作用无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。Q3：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法,原理和方法,反应原理抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见抗原基本成分心磷脂、卵磷脂和胆固醇方法包括：快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)不加热血清反应素(USR)甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）性病研究实验室试验(VDRL)等。,试验特点,原理和成分与试验相同 血清不需要灭活 不需要显微镜观测结果 可作定量试验 有现成的试剂盒携带方便 操作简单 价格便宜,RP
7、R/TRUST检测流程,试验前期准备RPR仪(水平旋转仪器)必须滴！试剂 50l移液器、吸头 记号笔、废物缸 工作服 一次性手套、口罩、帽子 生物安全柜,梅毒自动旋转仪,检测流程,操作步骤：将检测试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟。测RPR自动旋转仪转速。在RPR纸卡上编上相应的待检样本的编号。,测速:100转/MIN（2转）,测旋转幅度:19mm,检测流程（定性）,加样：吸取50l血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。加抗原：将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗原。反应：将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观察结果。,检测流程（定量）,稀释液准备：在圈内加入50l生理盐
8、水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。加样：吸取50l血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并涂布满整个圈内。重复定性试验后两步。,临床意义,早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。,临床意义,早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。【感染57周（或硬下疳出现后23周）】经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,假阳性问题,假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性技术性假阳性由于
9、标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。生物学假阳性是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性,急性生物学假阳性反应的疾病,风疹水痘传染性单核细胞增多症传染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹,慢性生物学假阳性反应的疾病,系统性红斑狼疮 自身免疫性溶血性贫血盘状红斑狼疮 结节性多动脉炎 类风湿性关节炎 桥本氏甲状腺炎,风湿性心脏病干燥综合征毒品瘾者 慢性肾炎肝硬化老年 麻风(是唯一产生慢性生物学假阳性的感染性 疾病),妊娠的假阳性反应,这是一种生理情况下的生物学假阳性 假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。,假阳性问题,
10、梅毒假阳性反应的处理 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。,前带现象,原理指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果。处理将血清稀释后再进行试验。,血清固定,耐血清性（血清固定）指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,试验原理,检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（IgG 和IgM）。特异性
11、IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。Q3：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？,实验方法,梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）化学发光免疫分析法（CLIA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）,TPPA/TPHA,TPPA试验原理与TPHA试验基本相同TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞特点梅毒螺旋体全抗原,TPPA原理示意图,荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）,原理将有完整形态的梅毒螺旋
12、体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。,TP-ELISA,原理用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。特点本法可用于大规模血清检测。,免疫层析,临床应用,梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳
13、性。一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。,方法特点,特异性强，敏感性高很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有1%的生物学假阳性发生。如系统性红斑狼疮患者血清可使FTA-ABS试验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使TPHA呈假阳性。麻风患者也可使特异试验呈阳性。,临床意义,作为RPR初筛阳性标本的确证试验。不能作为疗效观察的指标。阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合RPR结果进行诊断。,假阳性问题,存在交叉反应的抗体处理方法：用Reiter株吸收血清中交叉反应的抗体。,老年人抗体阳性的问题,1、真阳性 2、假阳性：这些老年患者所
14、患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或抗T.pallidum抗体的交叉抗原；,梅毒血清学试验结果解释,梅毒血清学试验结果的临床意义,RPR结果解释示意图,阳性 阴性,TPPA结果解释示意图,阳性 阴性,梅毒血清学试验适用范围,梅毒检测策略与流程,梅毒检测技术规范,非梅毒螺旋体抗原血清试验：RPR、TRUST、VDRL梅毒螺旋体抗原血清试验：TPPA、TPHA、TP-ELISA、RT、FTA-ABS、CLIA、梅毒IgM抗体检测、WB,策略一采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛,策略二采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛,以临床诊断为目的检测策略一,以临床诊
15、断为目的检测策略二,梅毒实验室检测策略思考（1）,梅毒实验室检测策略思考（2）,？初筛目的和方法选择敏感性、特异性（试剂评估）操作流程（可及性）试剂的价格、结果时间（可接收性）,策略一和策略二比较,2010年梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果,2010年非梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果,小结,1、非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性往往是梅毒现症感染者，临床上即可开展治疗。2、定量试验可作为疗效观察的指标。3、特异性：假阳性反应。4、敏感性：约1%-2%的二期梅毒病人可以出现因为抗体过量引起的前带反应现象导致结果假阴性。5、可作为梅毒螺旋体抗原血清学试验的确诊试验。,小结,尽早完善操作的标准化，杜绝有个人特点的操作。对于只做TRUST检测的患者要注意：定性：阴性，TP-ELISA阳性的稀释定量后报告，排查前带现象后报告。阳性，TP-ELISA阴性，报告备注中提示“生物学假阳性的可能”。没有TP-ELISA结果的一定要加做检测。,小结,标准化操作。对TP-ELISA结果有争议的，可用TPPA进一步验证。或是用reiter株对血清进行吸收后再检测。,小结,根据目的选择检测方法及检测策略。可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。策略一采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛策略二采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛,
