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1、快速冰冻病理技术,概述 冰冻病理的目的 冰冻切片制备 快速病理的注意事项 术中快速病理诊断会诊意见及签发 冷冻切片后剩余组织的处理 资料管理,一、概述,冰冻病理是通过手术切取一小块活组织，通过特制的包埋剂，将组织冻结于-20度左右，切成薄片并染色，进行镜下观察、诊断，以帮助临床医生确定手术方案的一项技术。是临床手术科室与病理科的一种紧急会诊。,快速冰冻病理技术发展,*1818年由Pieter 首先创造发明的。*1891年Halsted和Accarty将冰冻切片技 术列为正式诊断方法。*1960年Cryostat冰冻切片机正式应用于临床后，冰冻切片质量有了很大提高。,目前,此项技术已普遍应用于临
2、床，解决手术中的病理诊断问题。随着冰冻切片技术和临床外科手术的发展，要求做冰冻的病例逐年增多。如：乳腺、甲状腺、卵巢等等。,冰冻病理的目的,主要：1.确定病变的性质（炎症、肿瘤及其良恶性）；2.确定切除肿瘤的边缘有无癌组织残留 以明确手术范围。3.确认切除的组织 例如甲状旁腺、输卵管及异位组织等。4.确定切除的淋巴结有无转移及转移程度。,乳 腺 纤 维 腺 瘤,乳 腺 浸 润 癌,淋巴结转移癌,卵巢粘液性囊腺瘤（交界性）,卵巢粘液性囊腺瘤,二、准备工作,1快速活检患方知情同意书 相关临床医师应向患者和（或）患者授权人说明快速活检的意义和局限性，取得患者和（或）患方的同意，并在手术中快速活检患方
3、知情同意书上签字。,冰冻快速病理诊断知情同意书,术中冰冻快速病理学检查是实施手术过程中与手术方案相关的病理诊断手段，如确定病变的性质、病变扩散情况、确定边缘或切端有无病变残留等，但因技术方法的限制，如时间短促、取材有限等，存在一定的局限性和误诊的可能性（通常是5%的误诊率）。某些病例难以快速做出明确诊断，需待常规石蜡切片进一步完成诊断，故向病人及家属说明。,-科患者-（男/女，年龄-岁，住院号-）和家属已知晓上述情况，同意手术中快速冰冻病理检查。签字人-与病人关系-身份证号-年 月 日,2.向病理科递交快速活检申请单临床手术医师应向病理科递交快速活检申请单 申请单需填写：患者的病史，重要的影像
4、学、实验室检查结果和 提请病理医师特别关注的问题等。尽可能不在手术进行过程中临时申请快速活检。,3.手术中快速活检应由副主任医师以上的病理医师主持。尚不具备相应条件的病理科不应勉强开展手术中快速活检业务。,4负责快速活检的病理医师应了解患者的：临床情况 手术所见 既往有关的病理学检查情况。,三、快速冰冻切片的制备（一）申请单和标本的验收、编号和登记 手术中快速活体组织病理学检查申请单和标本的验收、编号和登记参见普通活体组织病理学检查常规。时间的记录！（介绍附属医院情况）,（二）标本的巨检、取材和记录1.病理科验收快速活检申请单和标本后，应参照普通活体组织病理学检查常规的有关规定，立即进行标本的
5、巨检、取材和记录。2.主持快速活检的病理医师应亲自参与标本的巨检和取材（或指导取材）。3.通常选取具有代表性病变组织1或2块，需要时，增加取材块数,（三）组织切片的制备 冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法，半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等。现在常用的是低温恒冷箱冰冻切片法。,低温恒冷箱冷冻切片机,机箱面上有电子控制板，八个键：1.冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，进行工作状态，可持续10mins。启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉，可持续15mins。2.照明键，启动该键可照明工作间，有利工作及观察组织的冰冻状况。,3.消
6、毒键，启动该键，可对工作间进行消毒。4.两个快速自动进退键，两个微小进退键，一个手动旋钮，调节修组织块时的进退。冷冻箱内左边的冷冻台，温度可达-60左右，中间为一台切片机，工作间的温度在0-30之间。,低温恒冷箱冷冻切片机,操 作 过 程,1.取材，未固定的组织取材，不能太大、太厚，最好为24242mm。2.取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。,3.将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，将组织修平。4.调好切片厚度，一般在510um间。5.调好防卷板。切片时，切出的切片能在
7、第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。,6.应视不同的组织选择不同的冷冻度。1.切未经固定的脑组织、肝组织和淋巴结时，温度不能调太低，在-10-15左右。2.切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-1520左右，3.切带脂肪的组织时，应调至-25左右，切含大量的脂肪时，应调至-30。,冰冻切片的快速染色法,冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，这样制作固定切片好，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存。,染 色 方 法,取
8、材包埋、冰冻切片固定30秒1分钟水洗染苏木素35分钟,盐酸分化氨水返蓝20秒伊红1020秒脱水透明中性树胶封片,快速冰冻切片制备流程,取材,包埋冰冻,切片,固定,脱水,染色,水洗,透明,封片,1.完成冷冻HE染色切片制备的时间通 常为2025min。2.恒冷箱切片机制片：至少应于切片前1h开机预冷，冷室温度一般为1520。3.常规开展冷冻切片快速病理的病理科，恒冷箱切片机宜处于24h恒温待机状态。,冰冻切片时的注意事项,1.防卷板、切片刀和持刀架上的板块应保持干净，因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，使切片不能完整切出。,2.多例多块组织同
9、时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。3.放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。,4.临床快速冰冻切片，不要预先固定！一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。,5.当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以
10、此来软化组织，再行切片。另外，可调高冰冻点。,6.用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。这样可使温度高的载玻片与温度低的切片牢固地附贴在一起。如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，贴附不牢固。,三、快速病理的注意事项（一）快速病理诊断的优缺点：优点：在手术过程中随时取材，迅速做出准确可靠的病理诊断，为临床医生提供正确手术方案，减少了病人二次手术的痛苦。,缺点：1.切片厚，细胞大，层次多，可能与石蜡切片组织像相差较大，造成假阴性诊断；2.冰冻切片诊断要求报告快，没有更多思考讨论余地，一旦报错，将造成严重的无法弥补的后果；3.有的病例难以快速诊断，需要等待常规石蜡切片进一
11、步明确诊断。,A.乳腺冰冻切片,B.同一病例常规石蜡切片,（二）以下几项不宜作快速病理,1.疑为恶性淋巴瘤者。2.过小的标本(标本长径0.2cm者)。3.术前易于进行常规活检的，例如：肠镜、胃镜、支气管镜、穿刺组织 标本等。4.脂肪组织、骨组织、钙化组织和脑组织。,5.需要依据核分裂相计数判断良、恶性的软组织肿瘤。6.主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤。7.已知具有传染性的标本(例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病等)。8.钳夹、烧灼后的标本不能进行冰冻切片。,（三）慎用范围,涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本，需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过
12、常规活检确定。,四、手术中快速活检会诊意见及签发,1.有条件的病理科宜由两位具有中、高级职称的病理医师共同签署快速活检的病理学诊断意见。2.对于病变疑难、手术切除范围广泛和会严重致残的手术中快速活检，应由两位具有高级职称的病理医师共同签署会诊意见。,3.主检病理医师签名的字迹应能辨认。4.快速活检诊断意见一般在收到送检标本后30分钟内发出。同一时间段内相继收到的多例患者标本或是同一例患者的多次标本，其发出报告的时间依次类推。对于疑难病变，可酌情延时报告。,5.对于难以即时快速诊断的病变（例如病变不典型、交界性肿瘤病变或送检组织不足以明确诊断等），主检病理医师应向手术医师说明情况，需要等待常规石
13、蜡切片进一步明确病理学诊断。,6.主检病理医师签署的快速活检病理学诊断意见，宜以文字形式报告。快速活检病理学诊断意见报告书发出前应认真核对无误。,五、冷冻切片后剩余组织的处理,1冷冻切片后剩余的冷冻组织（简称“冻对”）和冷冻切片取材后剩余、未曾冷冻的组织（简称“冻剩”），均应保存，用以制备常规石蜡切片，以便与冷冻切片进行对照观察。2“冻对”、“冻剩”组织的蜡块和切片须与同一病例手术后送检的切除标本编为同一病理号，并做出综合性诊断。,3.当冷冻切片病理学诊断意见与其“冻对”组织的常规石蜡HE片的病理学诊断不一致时，该例的病理学诊断一般应以石蜡-HE片诊断为准。,六、资料管理,手术中快速活体组织病理学检查的资料必须妥善管理，有关规定参见病理学检查资料的管理。,1.各种病理学检查的文字资料装订成册保存。2.常规活检、快速活检、尸检病理学诊断的原始组织切片和查见肿瘤细胞及疑为肿瘤细胞的的玻片须妥善保管，未查见肿瘤细胞的切片在报告发出后保存2周。,3.已经发报告的申请单、组织蜡块及切片阳性的玻片，按号码及时存档，不得私自外借。4.各种资料存放前需认真核对，保证其完整性。文字资料每100份装订一册，蜡块封存入档，切片胶干后封存入库。全部资料保存至少15年。,1.患者查询资料期限：门诊送检标本保存15年 住院患者标本保存30年2.活检标本保存期限：自签发病理学诊断报告书之日起保存两周。,
