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1、地中海贫血基因检测在临床诊断上的应用,地中海贫血,地中海贫血，又称海洋性贫血，是一种常见的单基因遗传性溶血性血液疾病。广泛分布在全世界沿海地区。中国常见于东南沿海、西南 地区以及台湾地区。,地中海贫血的分布,地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一,地中海贫血,地中海贫血的共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，致使血红蛋白的组成成分改变。地中海贫血分为-地中海贫血和-地中海贫血。,-地中海贫血,-地中海贫血（简称-地贫）是一种由于-珠蛋白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基因遗传血液病。多由-珠蛋白基因的缺失突变所致。研究发现中国地区常见的3种-地
2、贫主要由-SEA、-3.7、-4.2缺失(左缺失）引起。,-50kb-10kb 0kb 10kb 20kb 30kb,(-SEA)Deletion(-4.2)Deletion(-3.7)Deletion,2 1,导致地贫的不同类型的基因缺失,非缺失型-地贫,概念：基因发生点突变或少数几个碱基的缺失。中国常见的非缺失型突变：Hb CS 2 CD 142 TAACAA(Gln)Terminator mutation Hb QS 2 CD 125 CTGCCG(LeuPro)Unstable HbHb WS 2 CD 122 CACCAG(HisGln)Unstable Hb特点：常发生于2基因，比
3、缺失型导致更严重的珠蛋白链合成的减少。,-地中海贫血,-地中海贫血是一种由于-珠蛋白基因突变导致肽链合成减少或缺乏而产生的单基因遗传血液病，多由-珠蛋白基因点突变所致。在中国人群中常见的突变位点有CD41-42M，-28M，IVS-II-654M，CD71-72M等,-地中海贫血突变类型,编码区的移码突变、无义突变和起始密码突变：如CD41-42，CD71-72，CD17突变后形成终止子，表现为0。非编码区IVS-1和IVS-2突变如IVS-II-654突变影响mRNA的拼接，表现为。影响转录的突变：如-28，-29的突变影响基因的转录，表现为。,世界上不同种族的常见地贫突变类型,种 族 突变
4、类型,地中海人 IVS-1,position 110(G A)CD39,nonsense(CAG TAG)IVS-1,position 1(G A)IVS-2,position 745(C G)IVS-1,position 6(T C)IVS-2,position 1(G A)黑人 29,(A G);88,(C T)Poly(A),(AATAAA AACAAA),东南亚人,中国人 CD 41-42,Frameshift(CTTT)IVS-2,position 654(C T)28,(A G);Hb E(G A)CD17,nonsense(AAG TAG)IVS-1,position 5(G C
5、)亚洲印地安人 IVS-1,position 5(G C)CD 8-9,Frameshift(+G)IVS-1,position 1(G T)CD 41-42,Frameshift(CTTT),世界上不同种族的常见地贫突变类型,种 族 突变类型,珠海,韶关,广州,汕头,湛江,广东省五个地区地中海贫血遗传流行病学调查,西,南,东,北,中,Journal of Clinical Pathology,2004;57(5):517-22.,中国南方地中海贫血人群携带率,Xu,et al.J Clin Pathol 2004,57:517-22.Cai,et al.Chi J Epidemiol 200
6、2,23:281-5.,广东省人群中地贫的携带者频率,广东省人群中地贫的携带者频率,地贫是严重致死、致残性遗传性血液病,常染色体隐性遗传病 受累基因：地贫-珠蛋白基因（16p13.3）地贫-珠蛋白基因（11p15.3）突变纯合子：重型地贫-致死 中间型地贫-致残 病理学基础：/链比例失衡,人类不同时期血红蛋白的组成,胚胎期血红蛋白：Hb Gower 1（x2 e2）Hb Gower 2(a2 e2)Hb Portland(x2 g2)即Hb Portland 1另有少量Hb Portland 2(x2 b2)，Hb Portland 3(x2 d2)胎儿期主要血红蛋白：HbF（a2 g2）成人
7、主要血红蛋白：HbA（a2 b2）约占血红蛋白总量96.597.5%HbA2（a2 d2）约占血红蛋白总量2.53.5%HbF（a2 g2）约占血红蛋白总量1%以下。,血红蛋白分子示意图,地贫纯合子：致死性出生缺陷,重型地贫:胎儿水肿综合征 早产死胎或出生前后死亡 可导致严重产科并发症 无理想治疗方法,重型地贫 出生后1年内发病 多于未成年前因严重贫血而夭折 输血和去铁治疗可维持,代价昂贵,地中海贫血的临床特征,小细胞低色素性溶血型贫血(中、重度)黄疸肝脾肿大(脾大明显)骨髓扩增发育迟缓合并感染Barts 水肿胎(地贫,宫内或出生后半小时内死亡),地中海贫血的血液学表型特征 RBC 参数 MC
8、V MCH 细胞形态变化 Hb电泳分析 Hb A2()或()Hb Barts Hb H()Hb E(),a地贫的基因型与表现型,正常,静止型单一基因缺失或丧失功能 临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅平均红细胞体积(MCV)位于正常值下限。,a地贫的基因型与表现型,血红蛋白H病3个基因缺失或丧失功能肝脾肿大，中度贫血。小细胞，低色素，HbH含 量较高，易发生溶血，有些病例需不定期输血，症重者甚至需切除脾脏。,标准型2个基因缺失或丧失功能临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细胞大小不均一，平均红细胞体积(MCV)及平均血红蛋白含量(MCH)明显偏低。,a地贫的基因型与表现型,Hb Bart
9、s 水肿胎儿综合症 4个基因缺失或丧失功能患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水肿，肝脾肿大。由于胎儿无法合成亚基，脐血血红蛋白（Hb Barts，4）含量高。,a2a1T a2-a1a2Ta1-a1T-,a地贫疾病严重程度的单倍型顺序,地贫的基因型与表现型,重型-地中海贫血所有患者有组织缺氧症状，可出现“地中海贫血面容”，生长发育迟缓。红细胞体积小且低色素。过剩的游离链形成链包涵体，引起溶血性贫血，靠输血维持生命。,/、0/0、0/（纯合子或双重杂合子）,轻型-地中海贫血患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。红细胞脆性降低，小细胞，低色素，MCV、MCH较低。,A/、A/0（杂合子）,中间
10、型-地中海贫血患者临床症状介于重型和轻型之间，如中度偏重贫血，生长发育迟缓，黄疸等。血液检查呈小细胞低色素贫血症。,/、/0（纯合子或双重杂合子）,地贫的基因型与表现型,中国南方高发区的主要突变类型,根据-地贫基因缺失特点，利用多重GAP-PCR技术可同管检测三种缺失型及正常四种基因型。通过电泳条带大小来判断。操作简便快捷，结果直观可靠。,-地中海贫血基因检测,-地中海贫血基因检测的临床意义,对-地中海贫血进行基因确诊，结果准确可靠。同时检测-SEA、-3.7、-4.23种缺失型可检出无临床症状的静止型-地贫（/-3.7、/-4.2）应用：婚前检查、产前检查及产前诊断。,-地中海贫血基因诊断操
11、作流程,-地中海贫血基因诊断,M DNA Marker1.(/)1.8kb2.(/-4.2)1.8kb;1.6kb3.(/-3.7)2.0kb;1.8kb4.(-4.2/-SEA)1.6kb;1.3kb 5.(-3.7/-SEA)2.0kb;1.3kb6.(/-SEA)1.8kb;1.3kb,M 1 2 3 4 5 6 M,-珠蛋白基因型PCR产物片段长度-3.72.0kb 1.8kb-4.21.6kb-SEA1.3kb,临床报告单样式,-地中海贫血点突变基因检测,同时检测 CS、QS、WS点突变,Wild typeCSMWSMQSM,临床意义：作为-地中海贫血三种缺失型的补充，对怀疑-地中海贫血有漏诊的患者进行 CS、QS、WS点突变的诊断，确定具体的基因突变类型,-地中海贫血基因诊断,可对17个突变位点(8个常见位点及9个少见位点)进行检测 合理的探针设计明显减少了非特异性杂交反应的发生位点设计更合理，绝大部分突变位点都有相应正常对照，结果易于判定,-地中海贫血基因诊断操作流程,-地中海贫血基因诊断结果判读,654M/71-72M,17M/N,EM/EM,41-42M/N,临床报告单样式,
