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1、消毒剂模拟现场和现场消毒鉴定试验1消毒剂对食(饮)具消毒效果的模拟现场鉴定试验1.1 目的鉴定消毒剂对食(饮)具上细菌的杀灭作用，以验证该消毒剂对食(饮)具消毒的实用剂量。1.2 试验器材(1)大肠杆菌(8099)。对尚需用于杀灭其他特定细菌者,可增用该特定细菌进行试验。菌悬液制备按2.1.1.2规定的方法和要求进行。(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)(3)稀释液：见附录A。(4)中和剂(按2.1.1.5方法鉴定合格者)(5)胰蛋白陈大豆琼脂培养基(6)无菌棉拭(7)规格板(用可略弯曲的软性材料制备，中央留一大小为5.0cm5.0cm空格作为采样部位)。(8)试验用食(
2、饮)具样本瓷碗(盘)或竹(木)筷前端(周长ZOcm,长度为12.5cm。1.3 操作程序(1)按产品使用说明书的用法，选定本试验拟用浓度和作用时间，分别进行大肠杆菌杀灭试验。(2)用无菌规格板在试验用瓷碗(盘)中间标出染菌区(5.0CmX5.0cm)。用无菌吸管吸取菌悬液，分别滴加于染菌区，每区0.1ml,用无菌L棒在区内涂匀，置37恒温箱干燥。对筷子取前端12.5Cm长度，蘸染预定量菌液后，并置37C或室温干燥。(3)试验组：将30个染菌碗或3O个筷子样本，依次定时放入含消毒剂溶液的容器中，使其完全浸没。作用至规定时间后取出，弃掉消毒剂，向瓷碗(盘)内的染菌区加入5ml中和剂，用L棒刮洗染菌
3、区，作用IOmin后，分别取LOml样液倾注接种2块平皿。将筷子放入含20ml25ml中和剂的试管中，使其完全浸没在中和剂中，电动混匀器震荡60s或振敲200次，作用Iomin后，分别取1.0ml样液倾注接种2块平皿。将接种好的平皿放37C恒温箱培养48h,计数菌落数，作为试验组。(4)阳性对照组：将3个染菌碗或3只筷子样本不浸泡消毒剂，直接向瓷碗(盘)内的染菌区加入5ml中和剂，或直接将筷子放入含20ml25ml中和剂的试管中。待试验组消毒处理完毕后，随试验组进行采样和检测。阳性对照组菌量应为1.25xlO,CfU/样本1.25x10,Cfw样本(相当于5105cfucm25106cfucm
4、2)o(5)阴性对照组：待试验组与阳性对照组试验结束后，将未用过的同批次中和剂、PBS接种培养基和未种菌的培养基等与上述两组样本同时进行培养，作为阴性对照。(6)按下式计算每件食具上的生长菌落数。每件食具样本生长菌落数(CfW样本)=平板上平均菌落数X检测时样本稀释倍数(7)计算杀灭对数值。1.4 评价规定以每种食(饮)具30个样本中大肠杆菌杀灭对数值均23.00所用消毒剂的浓度和作用时间为消毒合格剂量。1.5 注意事项(1)试验操作过程必须采取严格的无菌技术。直接或间接接触样本的器材必须经灭菌后使用。模拟现场试验所用食(饮)具在染菌前亦必须经灭菌处理。(2)每次试验必须设置阳性和阴性对照，绝
5、不可省略。2消毒剂对医疗器械的消毒模拟现场试验2.1 目的鉴定消毒剂对人工污染于医疗器械上细菌芽抱的杀灭作用作用，以验证对医疗器械处理的实用剂量。2.2 试验器材(1)枯草杆菌黑色变种(ATCC9372)芽胞(下简称芽抱，其悬液的制备按2.1.123(2)规定进行)(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)(3)中和剂溶液(经按2.1.1.5规定方法鉴定合格者)(4)含中和剂的胰蛋白腺大豆肉汤培养基(5)模拟现场试验用样本(将医用止血钳截断，取其由轴至齿端部分，参照2.L124(2)规定方法进行脱脂处理。经压力蒸汽灭菌后，烤干备用)。(6)塑料试管(L8cmx18cm)o2.3
6、 操作程序(1)以载体浸泡定量杀菌试验进行消毒效果的测定。按产品使用说明书的剂量，选定本试验拟用浓度和和作用时间。(2)染菌时，用无菌镶子将止血钳样本齿面朝上，并固定在无菌支撑物上。用0.1ml无菌吸管或定量无菌移液器，将0.02ml芽抱悬液滴染于齿部，用无菌L型铝金丝涂匀，置37C恒温箱内干燥备用。(3)取无菌平皿，按每个载体IOml用量加入消毒液，置2(C2C水浴中保温5min.(4)将30个染菌样本浸没于消毒液中进行消毒处理。(5)作用至规定时间，取出样本，分别移入含Ioml中和剂溶液的塑料试管内。在手掌上振敲200次，分别取样液LOml倾注接种两个无菌平皿，放37C恒温箱培养72h,计
7、数菌落数，作为试验组。(6)以无菌蒸储水代替消毒液，将3个染菌样同样条件处理，然后与试验组样本同法进行活菌培养计数，作为阳性对照组，其菌量应在5xlO5cfu/样本5xl()6cfu/样本。(7)试验结束后，将用过的同批次中和剂、采样液、稀释液接种培养基，进行培养;另将未用过的同批培养基亦放入恒温箱内培养，作为阴性对照。2.4 评价规定在规定作用时间内，阳性对照组均有菌生长，活菌培养计数达到规定的数量，阴性对照均无菌生长时，以对试验组30个样本上人工污染芽抱的杀灭率对数均值23.00,可判为消毒合格。2.5 注意事项与本试验有关的其它试验中的注意事项亦适用于本试验。3消毒剂对医疗器械的模拟现场
8、灭菌试验3.1 目的用于验证消毒剂对人工染有芽泡的医疗器械灭菌效果。3.2 试验器材枯草杆菌黑色变种(ATCC9372)芽袍(下简称芽泡其悬液的制备按2.1.123(2)规定进行)(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)(3)中和齐IJ溶液(经按2.1.1.5规定方法鉴定合格者)(4)含中和剂的胰蛋白陈大豆肉汤培养基(5)模拟现场试验用样本(将医用止血钳截断，取其由轴至齿端部分，参照2.L124(2)规定方法进行脱脂处理。经压力蒸汽灭菌后，烤干备用)。(6)塑料试管(1.8CmXI8cm)3.3 操作程序(1)按产品使用说明书中的最低使用浓度与0.5倍最短作用时间。(2) 2
9、5个染菌样本制备按2.3中(2)规定进行。(3)无菌平皿，按每个载体IOml用量加入消毒液，置20C2C水浴中保温5min。(4)将20个染菌样本浸没于消毒液中进行灭菌处理，作用至规定时间，将样本取出，分别放于含IOml中和剂肉汤的试管内(共20支)，置37C培养箱中定性培养7d,观察最终结果，作为试验组。有菌生长者，肉汤培养基呈轻度浑浊，有皱褶状菌菌膜，轻轻振摇可见絮状沉淀，无菌生长者肉汤清澈透明。(5)以标准硬水代替消毒液，将2个染菌载体依上同样条件处理，然后与试验组载体同法接种、培养、观察结果，作为阳性对照组。(6)另取3个染菌样本，分别放入IOml中和剂溶液塑料试管内。振荡Imin,或
10、在手掌上振敲200次，取样液进行活菌培养计数。培养72h计数菌落。作为菌数对照组，其菌量应为5xl05CfW样本5xl06cfll/样本。(7)试验结束后，将用过的同批次中和剂、采样液和稀释液接种培养基，进行培养，另将未用过的同批培养基亦放入恒温箱内培养，作为阴性对照。(8)试验重复3次。3.4 评价规定各次试验组所有60个样本均无菌生长，同时阳性对照组均有菌生长，菌数对照组活菌培养计数达到规定的数量，阴性对照组均无菌生长时，可判定为灭菌合格。3.5 注意事项(1)灭菌效果观察时，应严格无菌操作，否则可将灭菌合格误判为失败。(2)于本试验有关的其它试验中的注意事项亦适用于本试验。4连续使用稳定
11、性试验4.1 目的验证消毒剂在反复取放浸泡医疗器械条件下的使用有效期。4.2 试验器材(1)枯草杆菌黑色变种(ATCC9372)芽抱(下简称芽也，其悬液的制备按2.1.1.2.3(2)规定进行)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)(3)中和剂溶液(经按2.1.1.5规定方法鉴定合格者)(4)含中和剂的胰蛋白陈大豆肉汤培养基：见附录A。(5)试验样本参照2.1.1.2.4(2)o(6)满载用医疗器械(选用医用剪刀、止血钳等小型器械，或根据需要选用其他器械。(7)无菌带盖搪瓷盘。4.3 操作程序(1)以枯草杆菌黑色变种芽抱为试验菌。(2)试验时，配制双份200OmI消毒液，分别盛装
12、于2个无菌带盖搪瓷盘中。各放入清洁的试验用医疗器械，使达满载要求。每次试验，同时分别对2个搪瓷盘中的消毒液进行检测。(3)搪瓷盘内放入器械后，每日将器械取出，用清水洗涤，沥干，再回放入消毒液中。连续每日将器械取出、洗涤、沥干、再放入，直至试验结束。(4)放入器械至说明书上连续使用的最长时间，吸取消毒液样木，医疗器械消毒按消毒剂对医疗器械的消毒模拟现场试验(2),医疗器械灭菌按消毒剂对医疗器械的模拟现场灭菌试验(3)的方法，测定该消毒液对芽也的杀灭效果。4.4 评价规定试验重复3次，以3次试验均达到合格要求，可判为连续使用稳定性试验合格。4.5 注意事项(1)盛装消毒液的搪瓷盘，在每次操作完毕后
13、应加盖。(2)灭菌效果观察时，应严格无菌操作，否则可将灭菌合格误判为失败。(3)本试验有关的其它试验中的注意事项亦适用于本试验。5消毒剂对手消毒模拟现场试验5.1目的用于测定消揖剂对人工污染于手表面细菌的杀灭作用，并作为确定该消毒剂对手消毒实用剂量的参考。5.2试验器材(1)大肠杆菌8099或NCTClO538,对尚需用于杀灭其他特定细菌目的者，可增用该特定细菌进行试验。菌悬液制备按2.LL2规定的方法和要求进行。(2)胰蛋白陈大豆琼脂培养基(TSA)：见附录A。(3)胰蛋白陈大豆肉汤培养基(TSB)：见附录A。(4)中和剂(以TSB为溶剂，经鉴定合格)。(5)液体肥皂200gLo(6)参考样
14、品：正丙醇60%(V/V)与异丙醇60%(VZV)0(7)标准硬水：见附录A。(8)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)o(9)无菌纱布巾。(10)吸管、试管、平皿若干。(11)振荡混合器。5.3试验步骤菌悬液的制备取2支在TSB中培养18h24h的大肠杆菌培养物分别接种于IErSB大三角烧瓶中，在36C1C培养箱中培养18h24h,用TSB将其稀释为2108cfuml-2109cfuml菌悬液。(2)将12名15名志愿者随机分为两组，第一组使用参考样品，第二组使用试验样品(3)使用液体肥皂洗手Imin去除手表面污染的自然菌，然后用无菌纱布将手擦干。(4)将2xl8cfumL2
15、xl()9cfuml大肠杆菌的菌悬液放入一无菌容器中，(5)将手掌中间到指尖部位浸入菌悬液中，手指分开，停留5s,将手离开菌悬液，在空气中干燥3(6)干燥后立即将拇指与其他手指尖在含10mlTSB的平皿中搓洗1min,取适当稀释度接种平皿。计数菌落数，作为试验前菌数。(7)不再重复污染手，立即进行消毒处理。(8)试验样品组：按说明书介绍的用量、作用时间和使用频率以标准的洗手方法(如图2-1)搓擦30s60s(卫生手消毒)或最长5min(外科手消毒)。以流动的自来水冲洗5s,抖掉手上残留的水。立刻将拇指与其它手指尖在含IOml中和剂的平皿中搓洗Imin,做适当稀释后，分别取样液LOmI以倾注法接
16、种两个无菌平皿，放37恒温箱培养48h,计数菌落数。(9)参考样品组：对于卫生手消毒，取60%异丙醇3ml到入手心中，按标准的洗手方法用力搓擦30s。以确保手的所有部位均匀接触异丙醇。重复使用异丙醇按上述方法搓擦使总的搓擦时间为60s。对于外科手消毒，使用60%正丙醇3ml,按标准的洗手方法用力搓擦，当接近干燥时，再加3ml正丙静搓擦。以保持作用3min用流动的自来水冲洗5s,抖掉手上残留的水。其余步骤与试验样品组相同。3.手指交错掌心对掌心搓擦L掌心对掌心搓擦2.手指交错掌心对手背搓擦6.指尖在掌心中摩擦1.1 手互握互搓指背5.拇指在长中转动搓擦图21标准的洗手方法(10)在试验当日，第一
17、组与第二组样品对换，重复上述试验。(11)分别计算参考样品组和试验样品组的菌数减少的对数值。5.4 评价规定(1)试验样品的杀灭对数值大于或等于参考样品的杀灭对数值为合格。(2)若试验样品的杀灭对数值小于参考样品的杀灭对数值，应进行统计学处理，以确定差异是否显著。(3)若试验样品的杀灭对数值不显著小于参考样品的杀灭对数值，可判为消毒合格。若试验样品的杀灭对数值显著小于参考样品的杀灭对数值，表明该试验样品不符合本规范的要求。5.5 注意事项(1)试验必须在同一受试者、同一天、相同环境、同样条件下进行，使试验样品和参考样品的结果具有可比性。(2)所有受试者应年满18岁，身体健康。手部皮肤应无破损、
18、无皮肤病，手指甲短而干净。(3)试验用菌悬液应在第1只手浸入后3h内使用。在1次试验中，无论使用试验样品还是参照样品，所有受试者手的染菌都应使用同一批菌悬液。(4)对受试者，在每次试验结束时，应及时对双手进行彻底的消毒处理。6消毒剂对手消毒现场试验6.1 目的测定消毒剂对手表面自然菌消毒所需使用的剂量，以验证该消毒剂对手消毒实用剂量。6.2 试验器材(1)中和剂(中和剂经鉴定合格)(2)无菌棉拭(3)稀释液0.1%吐温80的0.03molL磷酸盐缓冲液pH7.2(4)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2),(5)标准硬水：见附录A。(6)无菌纱布巾(7)胰蛋白陈大豆肉汤培养基(T
19、SB)：见附录A。(8)胰蛋白陈大豆琼脂培养基(TSA)：见附录A。(9)振荡混合器(10)吸管、试管、平皿若干。6.3 试验步骤(1)在使用现场，随机选定受试者。试验不少于30人次。(2)消毒前，在受试者双手相互充分搓擦后，让受试者左手指并拢，用无菌棉拭在含IOml稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后，在五指屈面指尖至指根，往返涂擦2遍，每涂擦一遍，将棉拭转动一次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入中和剂试管内，作为阳性对照组样本。(3)根据消毒剂使用说明书的方法对右手进行消毒，对手的卫生消毒一般设定作用时间为Imin,对外科洗手后的泡手一般设定作用时间为3min消毒后用中和剂代替稀释液，与
20、阳性对照组同样的方法对受试者右手上残留的自然菌采样一次，作为试验组样本。(4)分别将未用过的同批中和剂、稀释液各1.0ml、棉拭1份2份作为阴性对照组样本。(5)分别取试验组、阳性对照组和阴性对照组样本各1ml,以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37C恒温箱中培养48h,观察最终结果。(6)计算杀灭对数值6.4 评价规定阳性对照组应有较多细菌生长，阴性对照组应无菌生长，以对30人次手上自然菌的平均杀灭对数值2LoO可判为消毒合格。6.5 注意事项(1)本试验需有志愿者参与，重亚人次较多，一人可多次受试，但不得在一批试验或同日反复参与，否则可影响结果的准确性。(2)受试者接受试验时，
21、不得触摸任何表面，以免使手的试验部位沾染杂菌。(3)棉拭涂抹采样，较难标准化，为此应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量，以及洗菌时敲打的轻重等先后保持一致。(4)擦拭消毒时，涂药量要适宜，涂抹要均匀。(5)现场样本须及时检测，室温存放不得超过2h。否则应放4冰箱内，但亦不得超过4h。7消毒剂对皮肤消毒模拟现场试验7.1 目的测定消毒剂对人工污染于皮肤表面细菌的杀灭作用，以验证该消毒剂对皮肤消毒实用剂量。7.2 试验器材(1)试验菌株：金黄色葡萄球菌ATCC27217,对尚需用于杀灭其他特定细菌者，可增用该特定细菌进行试验。(2)胰蛋白陈大豆琼脂培养基(TSA),见附录A。(3)璘酸盐
22、缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)o(4)中和剂(中和剂经鉴定合格)。(5)液体肥皂200gL.(6)金属筒(直径2.2cm、高度3cm)。(7)尼龙刮菌棒。(8)无菌纱布巾。(9)吸管、试管、平皿若干。(IO)振荡混合器。(11) 一次性接种环(直径4mm)。(12)抗生素软膏。(13)皮肤消毒剂。(14)恒温箱。7.3 试验步骤(1)菌悬液的制备按2.1.1.2.3规定的方法和要求进行。(2)使用液体肥皂清洗受试者前臂内侧Imin,用自来水冲净残留皂液，然后用无菌纱布擦干，以去除前臂内侧表面污染的自然菌。(3)用一端醮有印墨直径为3.0cm的玻璃筒扣印在受试者的每只前臂中段(不
23、要在手腕和肘皱褶处)，划分出一个试验区。(4)使用加样器取10l上述菌悬液，接种于前臂试验区(使回收菌落数为2xl()6cfu/试验区lxl()7cfu/试验区)，用一次性接种环，把菌悬液涂成一圆形，与试验区边缘应有4mm5mm的距离，在空气中自然干燥。(5)根据消毒剂使用说明书的方法对右前臂内侧进行消毒，一般设定作用时间为Imin3min(6)消毒后用中和剂对前臂上接种的区域进行取样。采样时，将金属筒放置于试验区中间部位，罩住染菌区，不要接触到盖有印墨的边缘。将LOml中和剂吸移至金属筒内，用尼龙刮菌棒刮洗金属筒罩住区域内的皮肤60s,将筒内液体吸移至试管内，再加l0ml中和剂对该区域内的皮
24、肤进行第二次刮洗30s,将第二次擦洗的液体，注入含第一次刮洗液体的试管中，作为试验组样本。(7)以蒸储水代替消毒剂对左前臂中段做同样处理，作为对照组样本。(8)每次试验分别将未用过的同批中和剂、稀释液各1.0ml作为阴性对照组样本。(9)分别取适宜稀释度试验组、对照组样本和阴性对照组样本各LOml,以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37恒温箱中培养48h,观察最终结果。(10)计算杀灭对数值。(Il)试验不得少于15人次。7.4 .评价规定对照组回收菌落数为2xl()6cfu/试验区lxl()7cfu/试验区，阴性对照组应无菌生长，且对每一人次皮肤表面人工污染的金黄色葡萄球菌的杀灭
25、对数值均23.00可判为消毒合格。7.5 注意事项(1)受试者录用标准1)年龄介于18岁至65岁的男性或女性；2)受试者应身体健康；3)前臂皮肤应完好无损且没有皮肤病及其它皮肤问题。(2)排除受试者的标准，如果受试者有下列情况之一，不能被录用参加试验1)怀孕妇女；2)诊断患有糖尿病、肝炎、艾滋病(HlV阳性)、器官移植者。(3)试验采样结束后，先用70%的酒精对受试者前臂进行消毒，然后用皮肤消毒剂对两只前臂进行消毒处理，处理后清水冲洗，擦干，再涂少量的抗生素软膏于试验区，以防皮肤感染。(4)在试验完成后的48h至72h内，受试者如发现前臂上有小脓疱、水疱，隆起的红色痒疱，应及时通知检验单位。8
26、消毒剂对皮肤消毒现场试验8.1 目的测定消毒剂对皮肤表面自然菌消毒所需使用的剂量，以验证该消毒剂对手消毒的实用剂量。8.2 试验器材(I)中和剂(中和剂经鉴定合格)。(2)无菌棉拭。(3)稀释液0.1%吐温80的0.03molL磷酸盐缓冲液pH7.20(4)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)(5)标准硬水：见附录A。(6)无菌纱布巾。(7)规格板(用牛皮纸制备，中央留一3.0CmXlO.0Cm的空格作为采样部位)121C15min灭菌备用。(8)胰蛋白陈大豆琼脂培养基(TSA)。(9)振荡混合器。(10)吸管、试管、平皿若干。8.3 试验步骤(1)在使用现场，随机选定受试者。
27、试验不少于30人次。(2)消毒前，让受试者将左右前臂内侧中段相互充分对搓后，将规格板放于受试者左前臂内侧中段表面,用无菌棉拭在含IomI稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后，在规格板框定的区域内，横向往返涂擦10遍，纵向往返涂擦3遍，每涂擦遍，将棉拭转动一次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入采样液试管内，振打200次。(3)根据消毒剂使用说明书的方法对右前臂内侧进行消毒，一般设定作用时间为Imin3min消毒后用中和剂代替稀释液，与阳性对照组同样的方法对受试者右前臂内侧表面残留的自然菌采样次，作为试验组样本。(4)分别将未用过的同批中和剂、稀释液和棉拭作为阴性对照组样本。(5)分别取适宜稀释
28、度的试验组、阳性对照组和阴性对照组样本各LOmI,以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37。C恒温箱中培养48h,观察最终结果。(6)计算杀灭对数值8.4 评价规定阳性对照组应有较多细菌生长，阴性对组应无菌生长，以对30人次批皮肤表面自然菌的平均杀灭对数值21.00,可判为消毒合格。8.5 注意事项(1)本试验需有志愿者参与，重复人次较多，一人可多次受试，但不得在一批试验或同日反复参与，否则可影响结果的准确性。(2)受试者接受试验时，不得触摸任何表面，以免使试验部位沾染杂菌。(3)棉拭涂抹采样，较难标准化，为此应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量，以及洗菌时敲打的轻重等先后
29、保持一致。(4)擦拭消毒时，涂药量要适宜，涂抹要均匀。(5)现场样本须及时检测，室温存放不得超过2h。否则应放4C冰箱内，但亦不得超过4h。9消毒剂对其它表面消毒模拟现场鉴定试验9.1 目的用于鉴定消毒剂对人工污染于一般物体指除本规范已有专门规定如食(饮)具、医疗器械等以外的物体表面细菌的杀灭作用，以验证该消毒剂对上述表面消毒的实用剂量。9.2 试验器材(1)大肠杆菌(8099)与金黄色葡萄球菌(ATCC6538)。如需用于杀灭其特定微生物者，可增用该特定微生物进行试验。菌悬液制备，按2.L1.2规定的方法和要求进行，检测菌量应在1.25x1()7cfu样本1.25xl()8cfu样本(相当于
30、5105cfucm25106cfucm2)(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)(3)稀释液(含0.1%吐温80的PBS溶液)(4)中和剂(按2.1.1.5方法鉴定合格者)(5)胰蛋白陈大豆琼脂培养基(6)无菌棉拭(7)规格板(用不锈钢材料制备，中央留一5.0CmX5.0Cm的空格作为采样部位)9.3 试验步骤(1)以人工染菌实物如桌面、地面、墙壁等为消毒对象。在无特殊要求情况下，可用木制桌面为代表，进行消毒效果观察。(2)每次试验，各类物品表面测试30个样本。(3)染菌时，选物品较平的部位，于规格板中央空格内用无菌棉拭沾以菌悬液均匀涂抹被试表面的60个区块(各为25Cm)
31、待自然干燥后进行试验。30个区块作为阳性对照区，30个区块为试验区。(4)阳性对照组：将无菌棉拭于含5ml稀释液试管中沾湿，对30个对照组区块涂抹采样，每区块横竖往返各8次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内，振打200次，作用IOmino用稀释液做适当稀释。(5)试验组：根据说明书中介绍的使用剂量将消毒剂喷雾或涂擦于物体表面进行消毒。消毒后，将无菌棉拭于含5ml中和剂试管中油湿，分别对30个消毒区块进行涂抹采样，每区块横竖往返各8次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原中和剂试管内，振打200次,作用IOmin。必要时用中和剂作适当稀释。(6)试验结束后，将用过的同批次
32、中和剂、稀释液各LOml接种培养基，作为阴性对照组样本。(7)将阳性对照组、阴性对照组和消毒组样本，每份吸取1.0ml,以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37恒温箱中培养48h,观察最终结果。(8)计算杀灭对数值。9.4 评价规定试验重复3次，阳性对照组菌数符合要求，阴性对组无菌生长，所有样本的杀灭对数值均N3.00,可判为消毒合格。9.5 注意事项(1)试验操作必须采取严格的无菌技术。(2)每次试验均需设阳性和阴性对照，绝不可省略。(3)消毒前后采样(阳性对照组和消毒试验组)，不得在同一区内进行。(4)棉拭涂抹采样较难标准化，为此应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量，洗
33、菌时敲打的轻重等等先后一致。(5)现场样本须及时检测。室温存放不得超过2h,否则应置4C冰箱内，但亦不得超过4h。10消毒剂对其它表面消毒现场鉴定试验10.1 目的用于鉴定消毒剂对一般物体指除本规范已有专门规定如食(饮)具、医疗器械等以外的物体表面自然菌的杀灭作用，以验证消毒剂对上述表面消毒的实用剂量。10.2 试验器材(1)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03molL,pH7.2)(2)中和剂(3)稀释液(含0.1%吐温80的PBS溶液)(4)无菌棉拭(5)规格板(用不锈钢材料制备，中央留一5.0CmX5.0Cm的空格作为采样部位)(6)胰蛋白月东大豆琼脂培养基103操作程序在使用现场，按说明书介
34、绍的用量、作用时间、使用频率和消毒方法消毒物体表面，检测样本数应力30份。(1)随机取物体表面(桌面、台面、门等)，用规格板标定2块面积各为25cn?的区块，一供消毒前采样，一供消毒后采样。(2)消毒前，将无菌棉拭于含5ml稀释液试管中沾湿，对一区块涂抹采样，横竖往返各8次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内，震荡20s或振打80次，做适当稀释后，作为阳性对照组样本。(3)根据规定的剂量，将消毒剂喷雾或涂擦于物体表面进行消毒。消彘后，将无菌棉拭于含5ml中和剂试管中沾湿，对消毒区块涂抹采样，横竖往返各8次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原采样液试管内，电动混匀器震荡2
35、0s或振打80次，作为消毒组样本。(4)试验结束后，将用过的同批次中和剂、稀释液各Ioml接种培养基，作为阴性对照组样本。(5)将阳性对照组、阴性对照组和消毒组样本，每份吸取LOml,以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37恒温箱中培养48h,观察最终结果。(6)计算杀灭对数值。10.4 评价规定试验重复3次邛日性对照组应有较多细菌生长,阴性对组应无菌生长,消毒样本的平均杀灭对数值可，可判为消毒合格。10.5 注意事项：(1)在现场试验中，自然菌的种类较复杂，平板上常出现大面积霉菌生长，导致无法计数菌落。此时，在两个平行的平板中如有一个平板可数清菌落数，即按该平板菌落数计算结果。如两平板均有大面积霉菌生长，应重新进行试验。(2)试验操作必须采取严格的无菌技术。(3)每次试验均需设阳性和阴性对照，绝不可省略。(4)消毒前后采样(阳性对照组和消毒试验组)，不得在同一区块内进行。(5)棉拭涂抹采样较难标准化，为此应尽量使棉拭的大小，用力的均匀，吸取采样液的量，洗菌时敲打的轻重等等先后一致。(6)现场样本须及时检测。室温存放不得超过2h,否则应置4冰箱内，但亦不得超过4h。
