《血清二氧化碳酶试剂法测定法 血清糖化蛋白四氮唑蓝测定法.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血清二氧化碳酶试剂法测定法 血清糖化蛋白四氮唑蓝测定法.docx（7页珍藏版）》请在课桌文档上搜索。
1、血清二氧化碳酶试剂法测定法1.实验原理使用磷酸烯醇丙酮酸竣化酶（PEPC）和稳定的NADH类似物的酶检测终点法。磷酸烯醇丙酮酸+HCO3PEPC+Mg2*草酰乙酸+H2PO1草酰乙酸+NADH类似物+Hmdh苹果酸+NAD类似物上述反应会破坏下列平衡:CO2+H2OH2CO3Ht+HCO3促使CO2向HC（V的转换，由此可以检测出血清或血浆中总CO?的浓度。在405nm或415nm波长处检测吸光度的下降，反映还原型的辅因子NADH类似物的减少，和样品中的总二氧化碳浓度呈比例。2 .标本：2 .1病人准备：无特殊。3 .2类型：血清、肝素血浆。3 .标本存放：应尽快分离血清或血浆，并保存于28。
2、不可将标本暴露于空气。分离的样品需密闭保存，防止二氧化碳的损失，并在收集后的最短时间内完成检测。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：超时送检的、细菌污染的标本。6 .实验材料6.1试齐I申能CO?测定试剂盒（货号：109509910试剂6X10Oml）6.1.1试剂组成试剂（R）：PH7.512.5mmol1.400U/1.4100U/1.0.6mmol/1.缓冲液磷酸烯醇丙酮酸（PEP）磷酸烯醇丙酮酸竣化酶（PEPC）苹果酸脱氢酶（MDH）NADH类似物活化剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂适量6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28,
3、若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCalBicarbonate标准品对自动分析仪进行校准。校准稳定期：10天。具体参见生化检验校准品和质控品SOP文件。6.3质控品：每批样品检测时，建议使用DiaSys公司提供的Tru1.abBicarbonate控制品进行内部质量控制。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AUlO
4、oO生化分析仪8 .操作步骤8 .1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AUlOOo生化分析仪项目测定参数.SOP文件9 .2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AUlOOO生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与11质控（DR0061&62）做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TrUCalBiCarbOnate标准品碳酸氢盐浓度校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。12 .参考值范围成年
5、人：2229mmol1.参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义山2】：二氧化碳检测用于血液酸-碱平衡的诊断。检测值的升高和降低表明代谢和呼吸系统酸-碱平衡失调。14 .操作性能14.1线性范围：450mmol1.014 .2精密度：精密度的评估是根据NCC1.S推荐的标准方法，AUlOOO批内精密度小于3%,总精密度小于3%o用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCC1.S的规则。批内精密度n=20X(mmol/1.)S(mmol/1.)CV(%)样品120.80.311.48样品227.50.431.56样品345
6、.50.531.1615 .3方法学比较：本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对92个样品进行CO?检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.96x+0.56mmol/1.；r=0.984o14 .4灵敏度：本试剂的检测限为ImmOI/1.。15 .5病人结果可报告范围：450mmol/1.16 .超出范围结果处理：本法对二氧化碳的检测范围为4-50mmol/1.o当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/1.氯化钠溶液作1+1稀释后，重新测定，结果乘以2。17 .病危报警值的处理18 .方法局限性17 .1本法对二氧化碳的检测范围为450mmol1.0当样品测定值超过上
7、限时，应将样品用9g1.氯化钠溶液作1+1稀释后，重新测定，结果乘以2o18 .2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/1.,结合胆红素浓度860mol/1.,游离胆红素浓度684mol/1.,血红蛋白浓度5.00g1.,甘油三酯浓度15.8mmol1.时没有观察到干扰。18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19参考文献1. Mu1Ier-Plathe0.Acidbasebalanceandbloodgases.In:Thomas1.,editor.Clinicallaboratorydiagnostics.1s,ed.Frankfurt:TH-BooksVerl
8、agsgesellschaft;1998.p.318329.2. NorrisKA,AtkinsonAR,SmithWG.Colorimetricenzymaticdeterminationofserumtotalcarbondioxideanalyser.ClinChem1975;21:1093-1101.3. USpatent#5,801,006.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。血清糖化蛋白四氮嗖蓝测定法1 .实验原理血清糖化蛋白（即：果糖胺）是一种大分子酮胺类化合物。碱性条件下可将四氮噗蓝还原成紫色甲月替，其生成量与血清果糖胺浓度成正比。
9、用比色法在54Onlm（530-55Onnn）、以糖化血清蛋白作校准物测出反应中甲月替的生成量从而得出血清果糖胺的浓度。2 .标本：2. 1病人准备：无特殊。2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。应使用新鲜标本。标本必须避光保存！3 .标本存放：标本在28C可稳定7天，-20。C保存至少稳定6个月。4 .标本运输：常温条件下保存运输。5 .标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。6 .实验材料6.1试剂南京波因特GSP测定试剂盒（试剂1X7OnII）6.1.1试剂组成：硝基四氮喋蓝、碳酸盐、稳定剂。6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂在28C保存，自生产日起
10、可稳定12个月。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂和样品可因仪器要求不同，按比例增减；间隔时间可按仪器不同进行调整，但为减少样本中还原物质的干扰，延迟时间不应低于300秒。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂6.2校准品：使用南京波因特提供的糖化血清蛋白校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AUlOoO生化分析8 .操作步骤8 .1项目基本参数：参见AU100O
11、生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU100O生化分析仪操作规程.SOP文件9 .检验结果的判断与分析：10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与11质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。Ik计算方法：南京波因特提供的糖化血清蛋白校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/1.报告。12 .参考值范围2-31.40-2.95mmol1.参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值
12、。13 .临床意义：血清糖化蛋白是葡萄糖与血清蛋白质进行非酶促化作用而形成的一种具有酮胺结构物质，其生成量与血糖浓度有关。糖尿病人血清果糖胺含量明显高于正常及非糖尿病人，血清果糖胺的代谢周期与血清蛋白相同，半衰期为17天左右，在1-3周内发生代谢变化，因此，测定血清果糖胺可反映被侧前10-20天内连续变化的血糖浓度的平均水平。实验研究表明：血清果糖胺是糖尿病诊断、病情监测和治疗过程中疗效观察的一项重要指标。14 .操作性能14. 1线性范围：0-6mmol1.o14 .2精密度：精密度的评估是根据NCe1.S推荐的标准方法，AUlOOO批内精密度小于3机总精密度小于3机用于分析的质控血清和数据
13、处理符合以上的NCC1.S的规则。测定GSP的变异系数4.0%。15 .3方法学比较：本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对20个样品进行GSP检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.95x+l.05mmol1.;r=0.992o14. 4灵敏度：本试剂的检测限为0.2mmol1.014.5病人结果可报告范围：0.2-6mmol1.o15 .超出范围结果处理：本法的检测范围上限值为6mmol1.当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1.氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。16 .病危报警值的处理，无。17 .方法局限性17 .1本法的检测范围上限值为6mmol1.o当样品测定值超过上限时，应将样品用9g1.氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。18 .2干扰物质：无。19 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。20 .参考文献：南京波因特试剂说明书。21 .其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。
