《玉米顶腐病检验鉴定技术规程（征求.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《玉米顶腐病检验鉴定技术规程（征求.docx（17页珍藏版）》请在课桌文档上搜索。
1、ICSDB62甘肃省地方标准DB62T-X-2022玉米顶腐病检验鉴定技术规程（征求意见稿）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施甘肃省市场监督管理局发布前言1 .范围12 .规范性引用文件13 .术语与定义14 .原理15 .试剂与材料16 .仪器与用具27 .取样方法28 .田间症状鉴定29 .检验方法310 .结果判定411 .样品保存与处理4附录A培养基配方及制作方法5附录B玉米顶腐病菌菌体形态特征6本文件按照GBT1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则规定起草。本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本文件由甘肃省粮油作物栽培标准化技术委员会归口
2、。本文件主要起草单位：河西学院本文件参与起草单位：甘肃前进生物科技发展有限公司、甘肃省农业信息中心、高台县农业技术服务中心、临泽县农业技术推广中心、张掖国家级玉米种子生产基地种子质量监督检验中心、张掖市建国作物种质创新育种工作室、酒泉市通盈种苗有限公司本文件主要起草人：雷玉明、马金、张婿、郑天翔、公晓佳、刘晓刚、孙志、马丽娟、濮超、李自峰、李涛、杨国振、石建国、张琪本文件由河西学院负责解释。各单位或个人在执行本文件过程中如发现需要修改和补充之处，请随时将意见和建议反馈至玉米顶腐病检验鉴定技术规程编制组（地址：甘肃省张掖市甘州区北环路846号河西学院，邮政编码：734000,E-mail:Zyy
3、mlei,联系电话:13993672655）玉米顶腐病检验鉴定技术规程1 .范围本文件规定了玉米顶腐病检验取样方法、田间症状识别、实验室检验、结果判断及样品保存与处理的技术要求。本文件适用于玉米制种亲本材料、杂交种玉米顶腐病的检验和鉴定。2 .规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本标准。本文件中未引用相关标准文本。3 .术语与定义以下术语与定义适用于本文件。3 .1亚粘团镰抱霉一种引起玉米顶腐病的真菌，属半知菌亚门、丝抱纲、丛梗抱目、痛座抱科、镰抱霉属的一种真菌
4、。3.2 菌落筛选需要从分离培养基培养生长出的大量菌落中，根据菌落形状、颜色、大小、菌丝形态等的各种特征，从中挑选出具有明显表型特征的目标菌落的过程。3.3 转接在无菌条件下，将目标菌落转移到适宜其生长的人工合成培养基而形成单一菌株的过程。4 .原理玉米顶腐病是一种土壤、种子传播的真菌性病害，其病原菌亚粘团镰泡霉主要在土壤、病残体、种子中越冬。玉米植株叶片、叶鞘、茎秆、果穗表现症状特征是玉米顶腐病田间诊断的初步依据；采用PSA培养基，从不同的带菌材料中分离出亚粘团镰抱霉根据病原菌形态特征最终进行玉米顶腐病鉴定。5 .试剂与材料5.10.1%升汞HgCl2称取升汞0.1g,用少许酒精溶解，再加蒸
5、储水至IOOmLO5.2乳酚油将苯酚结晶加热熔化后取20mL加入20mL乳酸中搅拌均匀，再先后加入20%甘油40mL和蒸馅水20mL搅拌均匀。5. 3硫酸链霉素C2IH41N7Oi6S6. 4蔗糖C12H22O117. 5琼脂Agar8. 6马铃薯potato9. 仪器及用具天平、高压灭菌锅、培养箱、生物显微镜、微量移液器、移液器、离心机、解剖刀、接种棒、培养皿、烧杯、载玻片、盖玻片、吸管等。10. 样方法10.1 子取样每个品种随机选取100粒种子，放入新种子袋，填写完整的取样标签，送实验室检验。7. 2组织取样8. 2.1叶片、叶鞘取样出苗期至抽穗前、抽穗后，进行田间调查，发现具有玉米顶腐
6、病疑似叶片，取新鲜整个叶片、叶鞘，放入保鲜塑料袋或乳酚油的标本瓶中，送入实验室检验。9. 2.2根系取样玉米16叶期，进行田间调查，挖下玉米顶腐病疑似植株，将发病根系剪下，放入保鲜塑料袋或乳酚油的标本瓶中，送入实验室检验。10. 2.3茎杆取样玉米抽穗前后，进行田间调查，取穗位节或穗位节以下玉米顶腐病疑似茎杆，放入保鲜塑料袋或乳酚油的标木瓶中，送入实验室检验。11. 3土壤取样12. 3.1定点取样对具有玉米顶腐病典型症状或疑似症状的植株，直接取植株根部周围0.2d0.3/范围内、5cm深的表土，四分法制样后，取土样约500g送实验室检验。7. 3.2随机取样对玉米顶腐病发生田块进行整田病原调
7、查时，对角线5点取样，每点在2/范围内取5cm深的表土约IOOOg,将各点土样混和后，四分法制样，取土样约50Og送实验室检验。8田间症状鉴定8. 1畸形或枯死苗型出苗期，植株生长缓慢，叶片边缘失绿，出现黄色条斑，叶片皱缩、扭曲，叶缘出现“刀切状”缺刻，严重时幼苗基部变灰、变黄、变黑而形成枯死苗8. 2叶缘缺刻型玉米抽穗前，玉米植株上部叶片基部或边缘出现缺刻状，其上下叶缘呈黄亮色条斑，严重时12个叶片的沿中脉半边或全叶脱落，仅剩中脉及中脉上残留的少量叶肉组织。13. 3断叶状或枯死型玉米抽穗前,玉米植株上部叶片尖端呈黄褐色斑块,有时撕裂或呈断叶状,严重时顶端45叶尖端或全叶枯死。8.4扭曲卷裹
8、型玉米抽穗前，玉米植株顶端叶片扭曲卷缩呈鞭状直立或倾斜，有的形成鞭状时将新抽叶片卷裹不能伸展形成弓状，或缩成一团,缠结的叶片撕裂、皱缩。8.5弯头型玉米抽穗前，穗位节叶基和叶鞘发病变黄，叶基部缺刻状或撕裂，茎秆组织变黄软化，并向一侧倾斜，形成弯头。8.6顶叶丛生型玉米抽穗前，玉米植株顶端叶片丛生、直立。8.7叶片基部腐烂抽穗后，在穗位节上下叶片边缘产生灰褐色腐烂，并逐步向中脉扩展，叶基部出现不均匀褪绿，严重时叶肉全部腐烂或脱落，只留中脉。8.8叶鞘、茎秆腐烂抽穗后，穗位节叶片基部变褐色腐烂的常在叶鞘和茎秆髓部也出现腐烂，鞘内侧和紧靠茎秆皮层呈铁锈色腐烂，剖开茎部，部维管束和茎节出现淡褐色或红褐
9、色病点或呈片状腐烂,重时从树干基部至硬位节呈黑褐色腐烂，的茎秆中空，内生灰白色霉状物，风时容易折倒。8.9空秆畸形型抽穗后，玉米植株生长低矮、扭曲。雌、雄穗败育畸形或空秆，叶皱缩扭曲，抽穗结实,雌穗短小，籽少而不实。9检验方法9.1种子检验9.1.1吸水纸检验法将测定的玉米品种的种子先用蒸储水冲洗2次,链霉素消毒，无菌水冲洗2次,然后,将种子放入垫有三层消毒吸水纸的90mm或120mm玻璃培养皿内，每皿放入10粒，每个品种测定10粒种子。重复4次，然后将种子放在2425C恒温箱内培养8dIOd,最后,用体视显微镜和高倍显微镜相结合观察种子上真菌菌落生长习性及形态特点。9.L2培养基检验法将玉米
10、种子在70%酒精中浸15s20s,然后移入0.1%升汞液中杀菌0.5minImin,再用无菌水冲洗3次。将经表面杀菌的玉米籽粒置于盛有PSA平板上，每皿摆放10粒，每一品种重复3次。于25C1C温箱中培养4d5d,当种子周围长出菌丝体或种子表面有紫色霉层时，将菌丝或霉层移入PSA培养基上进行纯化培养，待长出子实体后进行真菌鉴定。PSA培养基配方及制作方法见附录A9.1.3菌落筛选和转接检查培养5d后的平板，若出现紫红菌落，将其转接至PDA培养基上，并在25C1C黑暗培养4d5d。9.L4病原菌鉴定观察微菌落的形成情况，并挑取种子周围菌体、PSA平板上的培养物进行显微镜检查，根据附录B描述的病原
11、菌形态特征进行鉴定。9.2组织检验9.2.1制样选取有典型症状的植株材料，叶片、叶鞘材料取病健交界处组织，切成大小为O.lcm0.2CmX(Mem-0.2cm见方的组织块；根、茎杆材料直接切取维管束变色部分组织每个长约0.5cm。9.2.2病原菌分离培养将取得的植物组织置于PSA培养基平板上，每个平板放置10个，每个样品设3个重复。平板置于25C1C黑暗培养5d,若组织周围出现紫红色菌落，将其转接至PSA培养基上获纯培养物，以备鉴定。9.2.3菌落筛选和转接方法同9.1.3。9.2.3病原菌鉴定方法同9.1.4。9.3土壤检验9.3.1制样取待检土壤每个样IOOg放入50OnlI烧杯中，加入I
12、OOml无菌水，充分搅拌Imin,静止30s。取上层悬浮液备用。9.3.2病原菌分离培养取200l壤悬浮液滴加于PSA培养基平板上，用接种棒涂抹均匀，每个样品设3个重复。平板置于25七1黑喑培养IOcL9.3.3菌落筛选和转接方法同9.1.3。9.3.4病原鉴定方法同9.1.4。10结果判定符合8中规定任何一种症状，且显微镜下观察其形态特征，符合附录B描述的亚粘团镰胞霉形态特征，培养物为引起玉米顶腐的病原菌，判断样品为玉米顶腐病。11样品保存与处理完成检验后，样品和分离物制成斜面试验菌种低温保存，制成浸渍标本或玻片标本，并妥善保存。使用的材料和用具，在使用完毕后进行煮沸、焚烧等消毒除害处理。附
13、录:附录A（规范性附录）培养基配方及制作方法A. PSA培养基配方及制作方法A.1配方马铃薯200g,蔗糖IOg20g,琼脂17g20g,硫酸链霉素，水IoOOm1。A.2制作方法将洗净去皮的马铃薯切碎，加水IOOOml煮沸约20min30min,用纱布滤去马铃薯，加水补足1000ml：加入蔗糖和琼胶，加热使琼脂完全熔化后，分装，12OC125C高压灭菌30mio附录B（规范性附录）玉米顶腐病菌菌体形态特征8.1 PSA培养基菌落特征B.1.1菌落形态气生菌丝绒毛状至粉末状。8. L2菌落颜色菌落2d3d为粉白，4d5d渐变为淡紫色，中部淡紫色，背面菌落淡黄色，边缘略呈淡紫色。8. 2产胞方式
14、产胞细胞内壁芽生，单、复瓶梗式产抱，以单瓶梗居多。8. 3小型分生抱子特征8. 3.1形状特征小型分生抱子长椭圆形或拟纺锤形，较小，呈假头状不呈串珠状着生。8. 3.2大小大小5.7m13.5m2.3m5.1m,无隔或1隔。8. 4大型分生胞子特征8. 4.1形状特征镰刀形，较直而细长，脚胞足跟不十分明显，顶端渐尖。B. 4.2大小具25隔，以3隔居多。2隔者平均18.9m3.9m;3隔33.1mx4.8mM隔48.9mx4.9m;5隔52.7m5.3moB.5生物学特性B.5.1温度菌丝生长的适宜温度为2（C25C,分生小抱子和大抱子的萌发适宜温度均为2530CB.5.2PH菌丝生长的最适p
15、H512,抱子萌发的最适pH79,产生抱子的最适pH680B.5.3光照光照处理菌丝生长的无影响，12h光+12h黑暗交替条件下产狗量最大；连续光照条件下抱子萌发率100%。玉米顶腐病检验鉴定技术规程地方标准编制说明一、工作简况（一）任务来源2019年12月25日，由河西学院申请制定地方标准的立项，根据甘肃省粮食与栽培作物标准委员会推荐的地方标准制订，甘肃省市场监督管理局批准第4批甘肃省地方标准制定计划要求，计划制定编号2019-4098,标准名称：玉米顶腐病检验鉴定技术规程。（二）起草单位及参与人员主要起草单位：河西学院本文件参与起草单位：甘肃前进生物科技发展有限公司、甘肃省农业信息中心、高
16、台县农业技术服务中心、临泽县农业技术推广中心、张掖国家级玉米种子生产基地种子质量监督检验中心、张掖市建国作物种质创新育种工作室、酒泉通盈种苗有限公司主要起草人：雷玉明、马金、张靖、郑天翔、公晓佳、刘晓刚、孙志、马丽娟、濮超、李自峰、李涛、杨国振、石建国、张琪。二、制定标准的必要性和意义（一）玉米顶腐病的发生现状玉米是世界上分布最广的作物之一，属于禾本科玉米属。全世界玉米播种面积仅次于小麦、水稻居第三位。我国玉米种植面积2545万hm2,占全国粮食作物总面积的25%,总产13000万3约占全国粮食总产量的28%。东北玉米制种基地萎缩后，甘肃凭借自然优越条件一跃成为全国玉米制种大省,每制种面积达1
17、50万亩以上，产种量是全国玉米播种量的60%,甘肃玉米制种生产的种子质量、数量对全国玉米安全生产有极其重要的影响。特别是河西走廊玉米制种面积己达120万亩，海拔1800m以下的市县75%的耕地都属玉米制种种植地，平均亩产值达到近1500元，制种农民人均制种纯收入达1500元以上。因此，玉米制种已成为农业生产的“黄金”产业，也是农民增效的“摇钱树二由于玉米制种面积的扩大，且自交系抗病资源贫乏，加上多年连作和耕作质量下降，近千份的玉米品种（系）和种质材料无序引入，造成感病品种（系）种子带菌和土壤病原菌积累，致使威胁玉米生产的顶腐病日趋严重，遇到感病品种和有利于病害发生的环境条件，可造成毁灭性损失，
18、真可谓是玉米制种产业上的“禽流感”。玉米顶腐病作为甘肃省制种玉米田发生的新病害，目前危害呈上升趋势，产量损失大，潜在危害性高。甘肃河西走廊高台县骆驼城乡20h?制种玉米发病率达70%以上，甘肃发病面积达6万多hrA发病率在0.3%35%之间，制种企业近9万多ht2的玉米制种田自交系无一幸免，发病率40%60%以上的达2666.61）1112,发病率20%以上的达6666.7hr发病率5%10%以上的达3.3万hiA按照发病植株平均损失率按14.3%计算，损失杂交种4247.13万Kg,经济损失达近1.6亿元。因此，玉米顶腐病不但成为甘肃玉米制种业的严重制约因素，而且还会严重威胁全国玉米的安全生
19、产。目前发病严重的种子企业虽在采取各种减灾防患措施，但多属盲目行施,得不偿失，人为的又给企业和农户不自觉地制造新的损失。玉米顶腐病是一种新病害，在玉米整个生长期间均可发病，而且其症状表现复杂多样，玉米植株感病程度不同、发病时期不同，所表现的症状特点也各有差异，某些症状特点尚未被人们普遍认知。此外，人们对病害的危害性尚无足够的认识，防治措施也很难适当应用，从而会对病害的发生和流行造成某种程度的失控，加重病害流行。应引起各级农业行政部门、生产推广部门、植物保护部门和科研、院校等相关部门的高度重视，积极开展调查研究，加弓蚕协作攻关，组织技术培训，并采取相应的应急控病措施，降低病害流行蔓延速度，减少损
20、失。（二）标准制定的目的1 .本技术标准的制定填补了我国和甘肃省玉米顶腐病检验鉴定技术规程的空白。2 .为生产推广部门、植物保护部门、种子生产企业提供了玉米顶腐病检验鉴定的提供一个标准规范。规范农业行政部门、生产推广部门、植物保护部门等单位对玉米顶腐病的等病害的监管、执法力度，保证玉米种子质量，维护各方利益。3 .规范了种子生产企业与农户诊断识别玉米顶腐病流程，使玉米田病害检验、鉴定有一参考依据。更重要是提高甘肃省玉米种子生产能力和抵御自然灾害能力，确保国家粮食生产用种质量和数量安全。（三）标准制定的意义L为政府在玉米有害生物科学预警和科学执法提供规范性文件，提高了企业经营生产者的预冕性，增强
21、了“预防为主”和防患减灾意识，显著地减少了农户、企业的经济损失,为抗病育种提供科学依据。对我国玉米产生具大的社会、经济、生态效益。2.为编制、评估和检验玉米种子、种植规划提供重要依据。三、编制的原则和依据（一）原则本标准的编制依据中华人民共和国标准法和地方标准管理办法的规定，按照GB“Ll-2020标准的结构进行编写。（二）依据1.制订依据玉米顶腐病发生规律进行编写。2,制订检验、鉴定玉米顶腐病技术参照植病研究法执行。3 .该标准是本项目组结合承担的2013年甘肃省财政厅、甘肃省农牧厅下达甘肃省农业科技创新项目(GNCX-2013-10)“制种玉米病害综合治理技术集成与示范推广”的研究成果,同
22、时参考国内对玉米顶腐病的相关研究进展，制定的甘肃省玉米顶腐病检验鉴定技术规程。4 .建议将本标准作为推荐性地方标准批准发布，用于指导和规范我省玉米顶腐检验检疫、田间鉴定和综合防治。四、主要起草过程(一)调查研究任务下达后，起草单位组织主要起草人员，对河西走廊玉米种子生产基地顶腐病的发生情况及顶腐病原菌检验、田间鉴定参考依据进行了调查研究，对种子管理部门、植物保护部门对玉米顶腐病及其检验检疫科学依据咨询，对种子生产企业、农户在对玉米顶腐病的诊断中存在问题、遇到困难进行实地调查。起草人员收集参考相关玉米病虫害标准文本4个。目前相关玉米病虫鉴定技术规程仅见几种行业标准，如玉米抗病虫性鉴定技术规范，第
23、1部分：玉米抗大斑病鉴定技术规范(NY/T1248.1-2006),第2部分：玉米抗小斑病鉴定技术规程(NYT1248.2-2006)、第3部分：玉米抗丝黑穗病鉴定技术规程(NY/T1248.3-2006).第4部分：玉米抗矮花叶病鉴定技术规程(NY/T1248.4-2006)o参考文献5篇，1部著作。经整理资料，编制标准草稿，起草小组讨论后形成征求意见稿，向15家单位、企业发出征求意见，收到15份反馈意见报告。起草小组对征求意见认真进行讨论，对征求意见稿进行修改，形成送审稿。(二)制订主要技术内容1 .范围主要规定了本标准的适用区域。2 .规范性引用文件目前尚未查阅到相关顶腐病行业标准和地方
24、标准，故未列出引用文件。3,术语与定义规定了以下术语与定义适用于本标准，如亚粘团镰抱霉、菌落筛选、转接。4 .基本原理主要涉及玉米顶腐病菌传播途径、方式，越冬越夏场所，检验鉴定顶腐病菌理论基础。5 ,试验与材料主要规定了顶腐病菌检验、分离过程中需要制作培养基的材料，药剂品种，稀释药剂所用稀释剂要求。6 .仪器与用具主要规定了顶腐病菌分离、鉴定所需要的各种仪器名称和配备的用具作出了具体要求。7 ,取样方法对种子取样规定取样的数量。对组织取样规定了取样的部位、时期及取样的用具，取样处理方法。规定了土壤取样方法、样品的处理方法等内容。8 .田间症状鉴定规定了玉米9种症状表现特征，对每一种症状类型表现
25、时期、发生部位、表现的特征等进行详细描述,为鉴定提供具体的要求。9 .检验方法规定了种子检验、土壤检验、组织检验部位与方法，病原分离与纯化培养方法、鉴定方法。对每一种检验方法进行规定说明。10 .结果判定依据检验培养病原菌特征，规定了判定结果。IL样品保存与处理规定了检验、鉴定保存方法和使用过材料处理方法。五、试验验证过程一是开展田间症状观察与病原分离鉴定验证，主要开展田间症状类型与致病菌引起病害的吻合性试验。经验证田间畸形或枯死苗型、叶缘缺刻型、断叶状或枯死型、扭曲卷裹型、顶叶丛生型、叶鞘、茎秆腐烂、空秆畸形型等症状组织上分离出的致病菌分离率达100%,田间诊断准确性高，病原分离率高。二是从
26、种子表面和种子内部、叶片叶鞘材料取病健交界处组织、根茎杆材料直接切取维管束变色部分组织、土壤中分离致病菌，验证种子、病残组织、土壤中存活病原体与病害发生关系，从三类组织中分离顶腐病菌分离率达100虬分离病原菌通过接种试验，均能引起相应组织症状类型，准确性高，说明种子、病组织、土壤中是病原菌越冬越夏的主要场所，选择这三种组织做为病原菌检验的场所是科学合理的。三是依据田间发病情况、种子调运、生长环境、检验检疫等问题，采取随机选取IOO粒种子、叶片叶鞘取样、根系取样、茎杆取样、土壤定点取样、随机取样进行病原菌检测,检测准确性高，方法全面，具有代表性强，能反映玉米顶腐病发病的基本规律，说明取样方法是科
27、学合理的。四是经田间症状诊断、室内病原分离鉴定，病原菌生物学特性测定，分析症状与病害、病原检验和病原鉴定与病害间关系，在2年多病原检验和病害鉴定方面，依据制定的判定标准，在田间症状诊断、病原菌鉴定方面，准确性高，采用方法在田间可操作性强，科学合理，为种子企业和种植大户、植保部门提供顶腐病田间鉴定提供统一标准程序，为开展及时开展防治和种子检验检疫提供了统一的方法和程序。五是通过采样、症状类型观察、病原分离鉴定、判定标准等的验证，效果较好，经种子企业、农业技术推广部门、执法部门等单位检验，能满足玉米种子检验检疫和顶腐病的鉴定的需要。六、重大意见分歧的处理结果先后向22家单位、企业发出征求意见，收到22份反馈意见报告。其中，种子生产企业6家，行业主管部门8家，技术部门、事业单位9家。共计征求意见14条，并按照共性意见进行了意见汇总（见意见汇总表），起草小组一一进行讨论，对其中的意见，起草小组均采纳，并对其中的11条意见进行修改。玉米顶腐病检验鉴定技术规程起草小组二O二二年五月十八日
