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1、中草药有效成分的提取本文只做了解和参考，我们须要依据中药材不同有效成分或活性成分选择不同的提取方法，每种方法也有优劣之分，例如索氏提取适用于提取溶解度较小的物质，但当物质受热易分解而萃取剂沸点较高时，不宜用此钟方法,而J1.提取时间较长，而趣声提取法，可以进行洗洗、干燥、杀菌、雾化及无损检测等，但是趣声波的提取原理与水提不同，所以也要依据实陆状况选择.此处法为当优中药提取各种方法，分而述之。（一）溶剂提取法：1 .溶剂提取法的原理：溶剂提职法是依据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大,对不须要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从精材组枳内溶解出来的方法。当溶剂加到中草药
2、原料（需适当种碎）中时，溶剂由于扩散、渗透作用渐渐通过细胞壁透入到细胞内，溶解了可溶性物蜃，而迨成蛔胞内外的浓度是，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入药材组细胞中,如此多次来回，直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时,将此饱和溶液逋出，按需多次加入新溶剂，就可以把所须妥的成分近于完全溶出或.大部;*出。中草药成分在溶剂中的溶解度干脆与溶剂性质有关。溶剂可分为水、亲本性有机溶剂及亲脂性有机溶剂，被溶解物质也有亲水性及亲胭性的不同。有机化合物分子结构中亲水性基田多，其极性大而疏于油；有的亲水性基闭少，其。极性小而疏于水。这种亲水性、亲脂性及其程度的大小，是和化合物的分子结构干脆相关。一般来
3、说，两种基本用核相同的成分，其分子中功能基的极性越大，或极性功能基数量越多，则整个分子的极性大，亲水性强，而亲脂性就越弱，其分子非极性部分越大，或碳键越长，则极性小，亲脂性强，而亲水性就越弱。各矣溶剂的性质，同样也与其分子结构有关.例如甲醇、乙醇是亲水性比校强的溶剂，它们的分子比技小，有套基存在，与水的结构很近似，所以能够和水随意混合。丁醉和戊醇分子中虽都有羟异，保持和水有相俅处，但分子渐渐地加大，与水性度也就渐渐疏远。所以它们能彼此部分互溶，在它们互溶达到饱和状态之石，丁醇或戊醇都能与水分层.氯仿、苯和石油附建屋类或氯泾圻生物，分子中没有氧，丽于亲脂性强的溶剂。这样，我们就可以通过时中草码成
4、分结构分析，去估计它们的此类性质和选用的溶剂。例如葡鸡糖、蔗粮等分子比较小的多羟基化合物，具有强亲水性，极易溶于水，就是在亲水性比较强的乙等中也难于溶解。淀粉虽然羟息数目多，但分子大大，所以雉;容解于水。安白质和氢基陵都是敌戚两性化合物，有肯定根度的极性，所以能溶于水，不溶于或难;容于有机溶剂。忒类都比其忒元的亲水性强，仆殊是皂忒由于它们的分子中往往结合有多数糖分子，迩基数目多，能表现出校强的亲水性，而皂忒元则丽于亲脂性强的化合物。多数游离的生物应是亲脂性化合物,与酸结合成盐后，能够南子化，加强了极性，就变为亲水的注质，这些生物域可称为半极性化合物。所以，生物城的盐类易溶于水，不溶或根溶于有机
5、溶剂：而多数游离的生物诚不溶或难溶于水，易溶于亲脂性溶剂，一般以在氯仿中溶解度最大。糅质是多羟基的化台物，为亲水性的物质。油脂、挥发油、蜡、脂溶性色索都是强亲脂性的成分。总的说来，只要中草药成分的亲水性和亲脂性与溶剂的此项性屋相当，就会在其中有较大的溶解度，即所访“扪像相溶”的规律。这是选择适当溶剂自中草药中提取所须要成分的依据之一。2 .溶剂的选择：运用苏制提取法的关键，是选择适当的溶剂.溶剂选择适当，就可以比较限当地将须要的成分提取出来。逸挣溶剂要留意以下三点：溶剂对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小：溶剂不能与中苗的成分起化学变更；溶剂要经济、务得、运用平安等。常见的提取溶剂可分为以下三美
6、：1）水：水是一种镣的极性溶剂。中草得中亲水性的成分，如无机盐、轴类、分子不太大的多融类、糅质、氨基酸、妥白质、有机酸盆、生物碱盐及忒类等都能被水溶出。为了增加某些成分的溶解度，也常采纳酸水及碱水作为提取溶剂。酸水提取，可使生物碱与酸生成盐,美而溶出,碱水提取可使有机酸、黄酮、恿能、内布、杏豆素以及酚类成分溶出。但用水提取易解解忒类成分，且易寄坏变质。某些含果胶、粘液质类成分的中草药，其水提取液常常很难受溶.沸水提取时，中草药中的淀粉可被枸化，而增加过通的困难。故含淀粉量多的中草药，不宜废成细粉后加水蒸煮。中药传蜕用的汤剂，多用中药饮片面火点或,加混可以增大中药成分的溶解度外，还可能,有与其他
7、成分产生“助溶”现象，增加了一些水中溶解度小的、亲脂性强的成分的溶解度。但多数亲脂性成分在沸水中的溶解度是不大的，跣使有助溶现象存在，也不初法提取完全。假如应用大量水煎去，就会增加蒸发浓缩时的困雄，J1.会溶出大量杂质,给进一步分别提纯带来麻炀。中草转水提取液中含有g忒及粘液质类成分，在减压浓缩时，还会产生大量泡沐，造成浓痂的困难。通常可在蒸储器上装置一个汽一液分别仿液球加以克服，工业上则常用薄犊浓缩袋五。2）亲水性的有机溶剂：也就是一般所说的与水能混溶的有机溶剂,如乙魁（酒精）、甲醇（木粉）、丙用等，以乙醇超常用.乙醇的溶解性能比校好，时中草药细胞的穿透实力技强。亲水性的成分除茶白质、粘液质
8、、果胶、淀粉和部分多赫等外，大多能在乙醉中溶解。难溶于水的亲脂性成分，在乙醇中的溶解度也较大。还可以依据被提取物质的性原，采纳不同浓度的乙醇进行提取。用乙辞提取比用水量蛟少，提取时间短，溶解出的水溶性杂质也少。乙醇为有机溶剂，虽易燃，但毒性小，价格便宜，未通便利，有肯定设备即可回收反反运用，而且乙静的提取液不易发霉变质。曲于这些壕由,用乙醇提取的方法是历来最常用的方法之一。甲砰的性度和乙够相像，沸点较低（64C）,但有毒性，运用时应留恁。3）亲脂性的有机溶剂：也扰是一般所说的与水不能混溶的有机溶剂，如石油盛、茉、氯仿、乙髓、乙酸乙酯、二氯乙烷等。这些溶剂的选择性能,强,不能或不简洁提出亲水性杂
9、质。但这类溶剂挥发性大，多易燃（氯仿除外），一艇有毒,价格税贵，设备要求校高，且它们透入植物组织的实力就弱，往往须要长时间反及提取才能提取完全。假如药材中含有较多的水分，用这类溶剂就很难浸出其有效成分，因此，大量提取中草药原料时，干脆应用这美溶剂有肯定的局限性。3 .提取方法：用溶剂提取中草药成分，、常用浸清法、渗漉法、蒸素法、回流提取法及连续回流提取法等。同叶，原料的构碎度、提取时间、提取温度、设备条件等因素也都能影响提取效率，必宥加以考虑。1）送渍法：浸渍法系将中草药粉末或碎块装人适当的容器中，加入相宜的溶剂（如乙醇、稀电或水），浸清药材以溶出其中成分的方法。本法比技标洁务行，但浸出率较差
10、,J1.如用水为溶剂，其提取液易于发容变质）须留意加入适当的防腐剂。2）渗漉法：渗漉法是将中草药粉末装在渗浪器中，不断添加新溶剂，使其渗透过药材，向上而下从渗漉粉下部流出没出液的一种浸出方法小当溶剂渗进药构溶出成分比更加大而向下移动时，上层的溶液或痛浸液使2,换其位jt,造成良好的浓度差，使扩散能较好地遂行，故浸出效果优于浸渍差。但应限制流速，在渗波过程中随时自药面上补充新溶剂，使药材中有效成分充分送出为止。或当渗滴液颜色极浅或渗涌液的体枳相当于：原药材史的10倍时，便可认为基本上已提取完全。在大量生产中常将收集的稀渗淮液作为另一批新原料的溶剂之用。3）於去法：煎煮法是我国最早运用的传统的浸出
11、方法。所用容器一般为肉器、砂地或铝制、搪论篇皿,不宜用铁锅，以气药液变色。立火加热时最好时常搅抖，以免局部药材爻热太高，询洁侬栩。有蒸汽加热设备的药厂，多采纳大反应锅、大饼!偶、大木桶，或水泥血的池子中通入蒸汽加热。还可将数个前卷器通过管道相互连接，进行连续煎浸。4）同波提取法：应用有机溶剂加筋提取.需采纳回流加热装置,以兔溶剂挥发损失。小量操作时，可在回底烧瓶上连接回流冷凝器.瓶内装药材约为容量的%,溶剂浸过药材表面约12cm.在水浴中加热回流，一般保持沸约：小时小放冷过谑，再在药液中加溶剂,作其次、三次加热回流分别约半小时,或至基本提尽有效成分为止。此法提取效率较冷浸法高，大量生产中多采纳
12、连续提取法。5）动连续提取法：应用挥发性有机溶剂提取中草药有效成分，不论小型试舲或.大型生产，均以连续提取法为好，而且需用溶剂量较少,提取成分也较完全。试脸室常用脂肪提取器或称索氏提取器。连提取法，一般需数小时才能提取完全。提取成分受热时间校长，遇热不稳定易变更的成分不宜采纳此法。（二）水蒸气蒸愉法：。水蒸气蒸馈法，适用于能随水蒸气蒸飨而不祜破坏的中草药成分的提取。此类成分的沸点多在100C以上，与水不相混溶或仅缴溶，且在约100C时存肯定的羔气压。当与水在一起加热时其蒸气笈和水的.蒸Jt压总和为一个大气压时，液体就起先沸脚，水蒸气将挥发性物质一并带出。例如中草药中的挥发油，某些小分子生物臧一
13、麻黄臧、萧诚、槟榔臧，以及某些小分子的酚性物质。牡丹酚(paeono1.)等，都可应用本法提取。有些挥发性成分在水中的溶解度精大些，常将.蒸储液重新蒸馅，在最先蒸储出的部分，分出挥发油层，或在.瘦馅液水层及盐析法并用低沸点溶剂将成分提取出来。例如我鹿油、原白头翁素(protoanemonin)等的制备多采纳此法。(三)升华法：闺体物质受热干脆5U匕，遇冷后又凝固为闺体化合物，称为升华。中草筠中有一些成分具有升华的性质，故可利用升华法千髓日中草药中提取出来。例如樟木中升华的椁脑(camphor),在本草纲目中已有具体的记战.为世界上最早应用升华法制取药材有效成分的汜述。茶叶中的咖啡城在178C以
14、上就能升华而不被分解。游禹羟基蕙醯美成分，一些香豆素类，有机酸类成分，有些也具有升华的性质。例如七叶内酯及茉甲酸等。升华法虽然蓟洁为行，但中草药炭化后，往往产生挥发性的焦油状物，粘附在升华物上，不易精制除去，其次，升华不完全，产率低，有叶还伴随有分解现象。B.分别和纯,化：上述提取法所得到的中草药提取液或提取物仍旧是混合物，需进一步除去杂原，分别并进行精制。具体的方法而各中草药的性质不同而异，以后将通过实例加以叙述，此处只作一般原则性的探讨。(一)溶剂分别法：一般是将上述总提取物.选用三、四种不同机性的溶剂，由低极性到高极性分步进行提取分别。水浸密或.乙辞浸膏常常为胶伏物，艰以匀称分数在低极性
15、溶剂中，故不能提取完全，可林人适量惰性填充剂，如硅藻土或纤雉粉等，然后低温或自然干燥，物碑后，再以逸用溶剂依次提取，使总提取物中各组成成分，依其在不同极性溶剂中溶解度的后异而得到分别。例如粉防己乙蔚浸舟，碱化后可利用乙会溶出脂溶性生物碱.再以冷茶处理溶出构防己诚.与其结构类似的防己诺林碱比前者少一甲基而有一酚羟基，不溶于冷茶而得以分别。利用中草药化学成分，在不同极性溶剂中的溶解度进行分别统化，是谖常用的方法。广而言之,自中草药提取溶液中加入另一种溶剂，析出其中某种或某些成分，或析出其杂质，也是一种溶剂分别的方法。中草药的水提液中常含有树胶、拓液质、强白质、捌化淀粉等，可以加入肯定量的乙醇，使这
16、些不溶于乙睿的成分白溶液中沉淀折出，而达到与其它成分分别的目的。例如自中草药提取液中除去这些杂质，或自白及水提取液中获得白及胶，可采纳加乙醇沉淀法：自熊新括楼根汁中制取大花粉素，可满人丙酮使分次沉淀析出。目前，提取多糖及多肽类化合物，多采纳水溶解、浓缩、加乙群或丙的析出的方法。此外，也可利用其芸些成分能在酸或成中宓解，又在加碱或加酸变更溶液的pH后，成不溶物而析出以达到分别。例如内酯类化合物不溶于水，但遇盛开环生成拨酸盐溶于水，再加酸酸化，又交新型成内函环从溶液中析出，从而与其它杂质分别：生物臧一触不溶于水，遇酸生成生物碱盐而溶于水，再加碱碱化,又重新生成游禹生物城。这些化合物可以利用与水不相
17、混溶的有机溶剂进行萃取分别。一般中草药总提取物用酸水、碱水先后处厘，可以分为三部分：溶于酸水的为碱性成分（如生物碱），溶于碱水的为酸性成分（如有机酸），酸、碱均不溶的为申姓成分（如8醉）。还可利用不同酸、碱度进一步分别，如酸性化台物可以分为强酸性、弱战性和酷热防性三种，它们分别溶于碳酸重钠、碳酸钠和氢丸化钠，借此可进行分别。有些总生物成，如长春花生物业、石花生物业，可利用不向rH值进行分别。但有些特殊状况，如酚性生物战紫董定城（corydine）在双氧化钠溶液中仍能,为乙裂拈出，蝇蜥葛臧（dauricins）在乙触溶液中能为货.我化钠溶液抽出，而溶于氯仿溶液中则不腌被氢乳化钠溶液抽出：有些生物
18、碱的盆类，如四鼠掌叶防己碱数酸拈在水溶液中仍能为氯仿抽出。这些性质均有助于各化合物的分别恺化。（二）两相溶剂萃取法：1.萃取法：两相溶剂提取又标称萃取法，是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中安排系数的不同而达到分别的方法。萃取时假如各成分在两相溶剂中安排系数相差越大，则分别效率越高、假如在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如紫、氯仿或乙段进行两相萃取，假如有效成分是偏于亲水性的物质，在亲脂性溶剂中难溶解，题须要改用弱亲脂性的溶剂，例加乙酸乙酯、丁辞等。还可以在氯仿、乙整中加入适量乙醇或,甲辞以增大其亲水性。提取黄的类成分时，多用乙酸乙脂和水的两相萃取.提取亲水性
19、强的皂忒则多选用正丁潞、弄戊醉和水作两相萃取。不过，一般有机溶剂亲水性越大，与水作两相萃取的效果就越不好，因为能使较多的亲水性杂质伴域而出，对有效成分进一步耕制影啕很大。两和溶剂萃取在操作中还要留意以下几点：1）先用小试管猛烈振振约1分钟,视察萃取后二液层分层现象。假加简洁产生乳化，大量提取时要避开猛烈报推，可延长萃取时间。如遇到乳化现兔，可将乳化层分出，再用新溶剂萃取；或将芫化层抽述，或将扎化层稍稍加热：或较长时间放近系时常旋转，令其自然分层。孔化现象较严峻时,可以采纳二相溶剂逆流连续萃取装宽。2）水提取液的浓度最好在比重1.11.2之间，过稀则溶剂用量太大，影的操作。3）溶剂与水溶液应保持
20、肯定量的比例，第一次提取时，溶剂要多一些，一般为水提取液的1/3,以后的用量可以少一些，一般1/4-1/6。4）一般萃取34次即可。但亲水性较大的成分不易转入有机溶剂层时，须增加萃取次数，或变更萃取溶剂.萃取法所用设备,如为小量萃取，可在分液漏斗中进行；如系中量萃取,可在较大的适当的下口瓶中进行。在工业生产中大量萃取，多在密闭萃取罐内进行，用搅拌机撞抨肯定时间，使二液充分混合，再放置令其分层：有时将两相溶液喷雾混含，以增大萃取接触，提高萃取效率，也可采纳二相溶剂逆流连续萃取袋比。2 .逆流连续萃取法：是一种连续的两相溶剂萃取法。其装先可具有一根、数根或更多的萃取管。管内用小瓷圈或小的不筑钢丝圈
21、填充，以增加两相溶剂萃取叶的接触面。例如用氯仿从川松树皮的水浸液中萃取川械素。将泵仿乩于萃取管内，而比交小于衣仿的水提取浓缩液吃于商便容器内,开启活塞，则水浸液在高位压力下注人萃取管，遇瓷团投击而分散成细粒，使与氯仿接触面增大，萃取就比较完全。假如一种中草药的水浸液须要用比水轻的茶、乙酸乙酯等进行萃取，则需将水提浓缩液装在萃取管内，而紫、乙酸乙酯贮于高位容器内。萃取是否完全，可取样品用薄质层析、纸层析及显色反应或沉淀反应进行检查。3 .逆流安排法（CounterCurrentDistribution,CCD）:逆流安排法又称遂流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流安排法与两相溶剂逆流萃取法原理
22、一祥，但加祥堂肯定，并不断在肯定容量的两相溶剂中，经多次移位萃取安排而达到混合物的分别。本法所采纳的逆流分布仪是由若干乃至数百只管子组成。若无此仪器，小量萃取时可用分液漏斗代替。预先逸择对渔合物分别效果鼓好，即安排系数差异大的两种不相混溶的溶剂。并参考安排层析的行为分析推断和选用溶剂系统,通过试脍测知要经多少次的萃取移位而达到乩正的分别。逆流安排法对于分别具有拘别相像性屋的混合物.往往可以取得良好的效果。但掾作时间长，萃取管易因机柒振荡而撷坏，消耗苏剂亦多，应用上常爱到肯定限制.4 .液滴逆流安排法：液涌逆流安排法又称液滴逆流层析法。为近年来在逆流安排法基处上改进的两相溶剂萃取法。对溶剂系统的
23、选择基本同逆流安排法.但要求能在短时间内分别成两和，并可生成有效的液滴。由于移动相形成液滴，在细的安排萃取管中与固定和有效地接触、摩擦不断形成新的表面，促进溶质在两相溶剂中的安格,故其分别效果往往比逆流安排法好。豆不会产生孔化现象，用氮气压邪动移动相，祓分别物质不会因遇大气中氮气而氧化。本法必需选用能生成液滴的溶剂系统，且对高分子化合物的分别效果技差，处理样品量小（1克以下），并要有肯定设备。应用液滴逆流安排法曾有效地分别多种微量成分如柒胡亳忒原小柴城型李按碱等。液滴逆流安排法的装置，近年来虽不断在改进，但装.置和掾作较繁。目前，时适用于逆流安排法进行分别的成分，可采纳两相溶剂逆流连续萃取装置
24、或安排柱层析法进行。（三）沉淀法：是在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀,以荻得有效成分或除去杂层的方法。1 .铅盐沉淀法：龄盐沉淀法为分别某些中草药成分的拄典方法之一。由于酷酸错及碱式酷酸搭在水及醇溶液中,能与多种中草药成分生成难溶的培盐或络盐沉淀，故可利用这种性度使有效成分与杂质分别。中性赭酸铅可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅盆。因此，常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、糅质、树脂、酸性皂忒、部分黄阴等。可与成式酬酸铅产生不溶性铅盐或络合物的范围更广。通常将中草药的水或睿提取液先加入酸铅浓溶液，杼迄后逑出沉淀，并将沉淀洗液并入溶液，于滤液中加臧式S酸钻饱和溶液至不发生沉淀为
25、止，这样就可得到ft肢铅沉淀物、碱式静酸铅沉淀物及母液三部分。然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中，通以硫化&三体.使分解并转为不溶性破化铅而沉淀。令错拄母液亦须先如法脱错处理.再浓缩精制。琥化氮脱铅比较拗底，但溶液中可能存有多余的硫化氢，必需先通人空气或二氧化碳让毛泡带出多余的硫化豆Jt体，以免在处理溶液时参加化学反应。新生态的硫化铅多为胶体沉淀，能吸咐药液中的有效成分,要留意用溶剂处理收回。脱脂方法，也可用硫酸、磷酸、硫酸钠、磷酸钠等除铅，但硫酸铅、磷酸铅在水中仍有肯定的溶解度，除悟不彻底。用阳离子交换树脂说铅快而彻底，但要留恁药液中某些有效成分也可能被交换上去，同叶脱铅弼脂再生也较囹难。还应留意
26、脱铅后溶液酸度增加，有时需中和后再处理溶液，有时可用新制备的衣乳化偌、氮氧化铝、鼠乳化料或碳酸铅、明风等代售酸铅,碱式黑酸铅。例如在黄茶水或液中加入明通溶液，黄军武就与铝盆络台生成难;源于水的络化物而与杂质分别，这种络化物经用水洗净就可干瓶供药用。2 .试剂沉淀法：例如在生物碱处的溶液中,加入某些生物碱沉淀试剂（见生物碱性质下），则生物城生成不溶性复起而析出。水溶性生物城难以用萃取法提取分出，常加入畜氏锭盐使生成生物成需氏盐沉淀析出。又如橙皮忒、芦丁、黄冬忒、甘草里式均易溶于感性溶液，当加入酸后可使之沉淀析出。某些蛋白质溶液,可以变史溶液的PH值利用其在等电点时溶解度最小的性质而使之沉淀析出。
27、此外，还可以用明胶、蛋白溶液沉淀揉质：胆能够也常用以沉淀浑地黄皂忒等。可依据中草药有效成分和杂质的性质，适当选用。（四）拄析法：处析法是在中草药的水提液中、加入无机处至肯定浓度，或达到饱和状态，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而与水溶性大的杂质分别。常用作拉折的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸铁、破酸锭等。例如三七的水提取液中加硫酸镁至饱和状态，三七电式乙即可沉淀析出，白黄藤中提取掌叶防己碱.0三颗针中提取小荣诚在生产上都是用氯化钠或硫酸校盐析制各。有些成分如原白头等素、麻城城、苦参应等水溶性校大，在提取时，亦往往先在水提取液中加入宵定量的食酸，再用有机溶剂萃取。（五）透析法：透析法是利用
28、小分子物质在沼液中可通过半透膜,而大分子物质不能通过半透膜的性质，达到分别的方法。例如分别和纯化皂忒、妥白质、多肽、多糖等物质时，可用透析法以除去无机盐、单糖、双糖等杂质。反之也可将大分子的杂质留在半透膜内,而将小分子的物质通过半透膜进入膜外溶液中，而加以分别精豺：透析是否胜利与透析膜的规格关系极大。透析膜的膜孔有大有小，要依据欲分别成分的具体状况而选择。透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜（硫酸纸膜）、受白质胶膜、底峭纸膜等。油常多用市售的底埔纸或动物性半透膜扎成袋状，外面用尼龙FI袋加以爱护,当心加入欲透析的样品溶液，悬挂在清水容器中。常常更换清水使透析膜内外溶液的浓度差加大，必妥时适当加
29、热.并加以搅拌，以利透析速度加快。为了加快透析速度，还可应用电透析法，即在半在半速膜旁边纯溶剂两端放置二个电极.摔通电路.则透析膜中的带有正电荷的成分。无机阳禹子、生物碱等向阴极移动，而带负电共荷的成分如无机阴离子、有机肢等则向FH极移动，中性化合物及高分子化合物则留在透析膜中。透析是否完全，须取透析膜内溶液进行定性反应检查。一般透析膜可以自制：动物半透膜如猪、牛的膀胱膜、用水洗净，再以乙打瓦脂，即可供用；羊皮纸膜可将遮纸浸入50%的硫酸1560分钟，取出铺在板上，以水冲洗制得。其膜孔大小与硫酸浓度、浸泡时间以及用水冲洗速度有关；火棉胶腰系将火棉胶溶于乙陡及无水乙碑，：余在板上，干后放置水巾即
30、可供用，其腹孔大小与溶剂种类、溶剂挥发速度有关，溶剂中加入适量水可使膜孔增大，加入少量醋酸可使膜孔缩小；蛋白质胶（明胶）膜可用20%明胶涂于蛔布上，阴干后放水中，再加甲联使膜凝固，冲洗干净即可供用。近来商品有透析膜管成品出售，国外习称ViskingDiaIysisTubing,有各种大小厚度规格,可供不同大小分子量的多触、多肽透析叶选用.（六）结晶、变结晶和分步结晶法：基定中草药化学成分,探讨其化学结构，必需首先将中草药成分制各成单体纯品。在常温下，物质本身性质是液体的化台物，可分别用分谯法或层析法进行分别精制。一般他说，中草药化学成分在常温下多半是团体的物质，都具有站品他的通性，可以依据溶解
31、度的不同用结热法来达到分别精制的目的。探讨中草药化学成分时，一旦获得触晶，就能有效地进一步精制成为单体他&。他化台物的结晶有肯定的熔点和结晶学的特征，有利于塞定。假如基定的物质不是单体纯品，不但不能得出正确的结论，还会造成工作上的奢侈。因此，求得结晶并制备成单体纯品，就成为卷定中草药成分、探讨其分子结构支要的一步。1 .杂质的除去：中草药经过提取分别所得到的成分，大多仍旧含有杂质，或者是泥合成分。有时即使有少量或然量杂质存在，也能阻碍或延缓结晶的影成。所以在制备每品时，必需留意杂质的干扰，应力求尽可能除去。有时可选用溶剂溶出杂质，或只溶出所须要的成分。有时可用少量活姓炭等进行脱色处理,以除去有
32、色杂旗。有时可通过奴化铝，硅胶或硅燕土短柱处理后，再进行制备结晶。但应用吸附剂除去杂质时，要留意所须要的成分也可能被吸附而损失。此外，层析法更是分别制各单体纯品所常用的有效方法。假如一再处理仍未能使近于纯品的成分结晶化，则可先制备其品态的舒生物,再回收原物，可望得到结热。例如游离生物碱可制备各种生物城如美，羟基化合物可转变成乙酸化物,碳原化台物可制备成采踪衍生物结晶。美登盛在原料中含量少，且反复分别精制雎以得到结晶，但制备成3一溥丙基美登碱结晶后，再注水解除去澳丙基，美登城就能制备成为结晶。2 .溶剂的选择；制备转晶，要留意选择合宜的溶剂和应用适量的溶剂。合宜的溶剂,最好是在冷时对所须妥的成分
33、溶解度较小，而热时溶解度较大。溶剂的沸点、亦不宜太高。一般常用甲醇、丙酗、氯仿、乙醇、乙肢乙隔等。但有些化合物在一般溶剂中不易形成站品，而在某些溶剂中则乃于形成结品。例如葛根索、逆没食子酸(e1.Iagicacid)在冰酸中易彩成，吉品，大班*(emodin)在枇淀中易于结晶，爰草毒素(hemeroca1.1.in)AN.N一二甲基甲秣胺(DMF)中易得到结晶，而穿心蓬亚硫酸氢钠加成物在丙的一水中鼓身得到结晶。又如场烙葛城通常为无定形物大，但能和嬴仿或乙融形成为加成物件晶。3 .结晶溶液的制备：制备结晶的溶液，须要成为过饱和的溶液。一般是应用适量的溶剂在加温的状况下，将化合物溶解再放置冷处,假
34、如在室温中可以析出然品，就不肯定放置于冰箱中，以免伴随结晶析出更多的杂质。“新生态”的物质即新游离的物质或无定脂的粉衣状物质，远较晶体物质的溶解度大，多于形成过悒和溶液。一般经过精制的化合物，在蒸去溶剂抽松为无定形物未时就是如此，有时只要加入少量溶剂，往往马上可以溶解，稍相放置即能析出站晶。例如长春花总弱碱部分抽松后加入1.5倍量的甲醉溶解，放犬后很诀折出长舂碱结晶。又如螭嫡苗碱在乙献中很旗溶解.但当其盐的水溶液用氮液诚化，并马上用乙魅萃取，所得的乙腱溶液，放比后即可析出临场葛成的乙犍加成物件晶。制各结晶溶液，除选用单一溶剂外.也常采纳混合溶剂。一般是先将化合物溶于务宓的溶剂中，再在室洛下海加
35、适量的难溶的溶剂，克至溶液微呈浑浊，并将此溶液微然加温，使溶液完全澄清后放置。例如J-细辛融重结晶时，可先溶于乙醉，再滴加适量水，即可析出很好的结晶。又如白虎妆中提取水溶性的虎杖忒时，在已精制饱和的水溶液上添加一层乙域放置,既有利于;容出其共存的脂溶性杂质，又可降低水的极性，促使虎杖俄的结晶化。自底皮中提取七叶忒(卷发甲素)，也可运用这样的方法。结晶过杼中，一般是溶液浓度高，降温诀，析出结晶的速度也快些。但是其结晶的颗粒鼓小，杂屋也可能多些.有时自溶液中析出的速度太快，超过化合物乱核的形成劝分子定向排列的速度，往往只能得到无定彩粉未。有叶溶液太浓，祐度大反而不易结晶化。假如溶液浓度适当,温度渐
36、浙降低,有可矩析出结晶较大而炖度较高的结晶。有的化合物其结晶的班成须要较长的时间，例如衿兰苏式等，有叶需放比数天或更长的时间。4 .制备终晶操作：制备结晶除应留意以上各点外，在放置过叔中，靛好先塞紧脱塞，避开液面先出现结晶，而致结晶纯度较低。假如放j一段时间后没有结晶析出，可以加入极然量的种品，即同种化合物结晶的微小颗粒.加种晶是诗导品核形成常用而有效的手段。一般他说，姑品化过程是有高度选择性的，当加入同种分子货.离子，结晶多会马上长大。而且溶液中假如是光学异构体的混合物，还可依种品性质优先析出其同种光学异构体。没有种晶时，Sr用破增棒敌过饱和溶液一滴，在空毛中任溶剂挥散，再用以磨擦容器内壁溶
37、液边修处，以谤导结晶的形成。如仍无姑品折出，可打开瓶塞任溶液逐步挥散，渐渐析品。或另选适当溶剂处理，或再精制一次，尽可能除尽杂质后进行结晶操作。5 .重结晶及分步结品：在制备姑品时，最好在形成一批结晶后，马上倾出上层溶液，然后再放就以得到其次批性品。品态物质可以用溶剂溶解再次牯品价制。这种方法称为变结晶法。结晶经支姑晶后所得各部分母液，再及处理又可分别得到其次批、第三批结晶。这种方法则称为分步结晶法或分级结晶法。晶态物虞在一再结品过程中，结晶的析出总是越来越快，出度也越来越高.分步结晶法各部分所得然品，其纯度往往有较大的差异，但常可获得一种以上的结品成分，在未加检查前不要贸然花在一起。6 .岫
38、品纯度的判定：化合物的结晶都有肯定的结晶形态、色泽、熔点和熔距，一可以作为塞定的初步依据。这是非结晶物质所没有的物理性质。化合物结品的彩态和熔点往往因所用溶剂不同而有差异。原托品睡在氯仿中形成校往状结的，熔点207C:在丙的中则班成半球状结晶，熔点203C:在氯仿和丙阳混合溶剂中则形成以上两种晶形的结晶。又如N一氧化若参臧，在无水两酮中殍到的结晶熔点208C,在稀丙阳（含水）析出的结晶为77809。所以文献中常在化合物的晶形、熔点之后注明所用溶剂。一般单体纯化合物触晶的焙距较窄,有时要求在0.5左右，假如炫距较长则表示化合物不纯。但有些例外状况，材殊是有些化合物的分解点不易看得浙晰。也有的化合
39、物熔点一样，熔距较窄，但不是单体。一些立体异构体和集构特别类似的混合物，常有这样的现象。还有些化合物具有双熔点的特性，即在某一温度已经全部触烷.当温度接着上升时又固化，再升温至肯定温度又熔化或分解。如防己诺林碱在176OC时熔化，至200C时又固化，再在242OC时分解。中草药成分经过同一溶剂进行三次支集品，其品筋及熔点一样，同时在薄层层析或纸层层析法经敷种不同城开剂系统检定，也为一个斑点者，一般可以认为是一个单体化合物。但应留意，有的化合物在一般层析条件下，虽然只呈现一个斑点，但并不肯定是单体成分。例如鹿含草中主成分为高熊果砍，弄高熊果忒极难用一般方法分别，经反发结品后，在纸层及聚肽朕薄层上
40、都只有一个斑点，易误认为单一成分,但测其影点在115125C,炫距很长。经制备其甲陡后,再经纸层层析检定，可以出现两个斑点，异高般果成的比移值大于高熊果忒。又如水苔蒲根茎挥发油中的一细辛醵和B-细辛醴，在一般薄层上均为一个斑点，前者为结品，熔点、63C,后者为液体沸点296C,用硝酸粮薄层或,气相层析很简洁区分。有时个别化合物（加家基酸）可能部分地与层析纸或薄层上的凝量金属禹子（加Cu）、酸或碱彩成络合物、盐或分解而产生复斑。因此，判定结品纯度时，要依据具体状况加以分析。此外，尚用液诺、气和层析、紫外光诺等，均有助于检识结晶样品的比度。C.层析法：层析技术的应用与发展，对于植物各类化学成分的分
41、别奘定工作起到重大的推动作用。如中药丹参的化学成分在30年头仅从中分别到3种脂溶性色素,分别称为丹参网HIkIII.但以后进一步的探讨，发觉除丹参网I为蛇品外，I1.、Hk均为混合结品。此行通过各种层析方法，迄今已发觉15种单体（其中有4种为我国首次发觉）。目前新的层析技术不断发展，通为层析理论和赴子学、光学、计算机等技术的应用,层析技术已日趋完善。一.层析法的基本原理:层析过根是基于样品组分在互不相潜的两“相”溶剂之间的安排系数之差（安排层析），组分对吸附剂吸附实力不同（吸附层析），和寓子交换，分子的大小（排租层析）而分别.通常又将一艇的以流淌相为气体的软为毛相层析，流淌相为液体的称为液和层
42、析。一、吸附层析法（AdSorPtionChrOmatOgraPhy）（一）吸附剂、溶剂与被分别物性质的关系：液一固吸电层析是运用较多的一种方法，特殊适用于很多中等分子量的样品（分子量小于1,OOO的低挥发性样品）的分别，尤其是脂溶性成分一一艇不适用于高分子量样品如蛋白质、多糖或离子型亲水住化合物等的分别.吸附层析的分别效果，确定于吸附剂、溶剂和被分别化合物的性质这三个因素。1 .吸附剂：常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、活性炭、旺酸候、聚酰胺、藻土哥。（1）硅胶：层析用硅胶为一多孔性物质，分子中具有硅乳烷的交筵结构.同时在顺粒表面又有很多硅酹基。硅胶吸附作用的强弱与硅界层的含量多少有关。硅睿基能够
43、通过显检的形成而吸附水分，因此硅胶的吸附力随吸着的水分增加而降低。若吸水量起过17%,吸附力极弱不能用作为吸附剂,但可作为安排层折中的支持剂.对硅胶的活化，当硅胶加热至100110C时，硅胶表而因氢键所吸电的水分即能被除去。当温度上升至500C时，在胶表面的硅醇丛也能脱水缩台转变为硅鼠烷纯，从而丢失了因在林吸附水分的活往，就不再有吸附剂的性质，虽用水处理亦不能复原其吸附活性。所以硅胶的活化不宜在较高温度进行（一般在170cC以上即有少量结合水失去）。株胶是一种酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层析。同时硅胶又是一种弱酸性阳禹子交换剂，具表面上的硅辞基能释放弱酸性的氯离子，当遇到较强的城注化台物
44、，则可因离子交换反应而吸附碱性化合物。（2）氧化铝：氧化铝可能带有礴性（因其中可混有碳酸钠等成分），对于分别一些碱性中草药成分，如生物碱类的分别颇为志向。但是碱性氧化铝不宜用于第、酗、ft,内潞等类型的化合物分别。因为有时碱性虱化铝可与上述成分发生次级反应，如异构化、氧化、消退反应等。除去乳化将中绚碱性杂质可用水洗至中性，称为中性氧化铝。中性氧化铝仍属于碱性吸附剂的范畴，本适用于酸性成分的分别。用稀硝酸或稀盐酸处理氧化铝，不仅可中和氧化铝中含有的臧性杂质，并可使氧化铝颗粒表面带有N03-或C1.一的阳,离子，从而具有禹于交换剂的性质，适合于酸性成分的层析，这种氧化将称为酸性属化铝。供层析用的乳
45、化将，用于拄层析的，其粒度要求在100160日之间。粒度大于100目，分别效果是：小于160目，溶液流速太慢，易使谱带广散。样品与氮化铝的用量比.一般在1:2050之间层析柱的内径与柱长比例在1:10-20之向。在用溶剂冲洗柱时,流速不宜过快,洗脱液的流速一般以每半1小时内流出液体的亳升数与所用吸附剂的空量（克）相等为合适。（3）活性炭：是运用较多的一种非极性吸附布。一般须要先用稀盐酸洗涤，其次用乙醉洗，再以水洗净，于80C干燥后即可供层析用。层析用的活性炭，最好选用颗粒活注炭，若为活性发细栉，则需加入适量硅藻土作为助滤剂一并装柱，以免流速太慢.活性炭主要且于分别水溶性成分，如f1.基战、糖类
46、及臬些忒.活性炭的有力吸附作用，在水溶液中最强，在有机溶剂中则较低弱。故水的洗瓦实力最弱，而有枇溶剂则较强。例如以S1.-水进行洗脱时，则随乙伸浓度的递增而洗脱,力增加。活性炭对芳香族化合物的吸酷力大于脂肪族化合物，对大分子化合物的吸附力大于小分子化合物.利用这些吸附性的差别，可将水溶性芳杳族物质与脂肪族物质分开，单糖与多糖分开，氮基酸与多肽分开。2 .溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分别关系极大。在柱层析时所用的溶剂（单一剂或温合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或级层析时常称i开剂。洗脱剂的选界，须依据被分别物质与所选用的吸附剂性质这两者约合起来加以考虑在用极性吸醋剂进行层析时，当敕分别物质
47、为弱极性物质，一般选用的极性溶剂为洗脱剂：被分别物质为强极性成分,则须选用极性溶剂为洗脱剂。值加对某一极性物质用吸附性税弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱,剂的极性亦须相应降低。在柱层掾作时,被分别祥品在加样时可采纳于法，亦可选一相宜的溶剂将样品溶解后加入。溶解样品的溶剂应选坏极性较小的，以便被分别的成分可以被吸*。然后渐增大溶剂的极性。这种极性的增大是一个特别埃慢的过程，称为“样度洗脱二便吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。假如极性地大过诀（样度太大），就不能获得满足的分别。溶剂的洗说实力，有时可以用溶剂的介电常数（）来表示。介电常数高，洗脱实力就大。以上的洗傥依次仅适用于极性
48、吸附剂，如桂胶、乳化铝。对非极性吸电剂，如活性炭，则正好与上述依次相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用，较在脂溶性溶剂中为强。3 .被分别物屎的性盾：被分别的物质与吸附剂，洗说剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此龄密切连。在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分别状况,干脆与被分别物质的每构与性质有关。对极性吸附剂而言.成分的极性大，吸陪住强。当然，中草药成分的整体分子现是重要的，例如极性总团的数目愈多，被吸酷的住能就会更大些，在同系物中碳原子数目少些,被吸附也会强些。总之,只要两个成分在结构上存在差别，就有可能分别，关健在于条件的选择。要依据被分别物质的性虞，吸附剂的吸附强度，与溶剂
49、的性虞这三者的相互关系来考虑.首先要考虑被分别物质的极性。如数分别物质极性很小为不舍我的蒋炜，或虽含我但非极性基因，则需选用吸幅性较强的吸附剂，并用弱极性溶剂如石油会或不进行洗脱。但多数中药成分的极性较大,则须妥选择吸附性能较弱的吸附剂（-艇川w.采纳的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增，或可应用薄层层析以推断林分别物在某种溶剂系统中的分别状况。此外，能否获得满足的分别，还与选珏的溶剂悌度有很大关系。现以实例说明吸附属析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系。加有多组分的混,合物,象植物油脂系由烧,炷、舞烧、驾硝酷美、甘油三肢璃和脂肪酸等组份。当以硅胶为吸附剂时，使油脂被吸附后选用一系列混合溶剂进行洗脱，油脂中各单一成分即可按其极性大小的不同依次被洗瓦。又如对于C-27给体皂忒元类成分，能因其分字中羟基数目的多少而获得分别：将混合皂忒元溶于含有5%氯仿的茶中，加于
