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1、婴儿期输血前红细胞血型血清学检测中国专家共识【关键词】婴儿期红细胞血型血清学专家共识根据国家卫生健康委员会（原卫生部）颁布临床输血技术规范“要求，临床输血前必须进行血型血清学检测，至少包括但不限于：ABO血型（正反定型）和RhD鉴定、红细胞血型意外抗体筛查（简称：意外抗体筛查）与交叉配血。婴儿期指从出生到满1周岁以前的一段时期。由于新生儿出生时红细胞上抗原或（和）B抗原数目较成人低，在进行ABO血型正定型时，会出现漏检弱抗原。另外，由于机体免疫功能尚未成熟，其血清中的抗或（和）抗B效价相对较低，且存在来FI母亲的抗体干扰1S极易引起ABO血型正反定型不符。另外，婴儿出生6个月后因来自母体获得的
2、被动免疫力逐渐消失，机体自身免疫功能尚未成熟，易患各种感染性疾病；乂由于此期间婴儿造血器官功能也不够完善，易出现贫血等，输血治疗不能避免。美国促进血液与生物治疗学会（ASSoCiationfortheAdvancementofB100dABiotherapies,AABB）”和英国血液学标准委员会（BritishCommitteeforStandardsinHaemato1.ogy,IiCSH）规定4个月婴儿应进行ABO血型正反定型检测；国内WS/T794-2022输血相容性检测标准也明确规定V4个月婴儿标本不需要做反定型。然而，欧美国家目前的血型鉴定等血型血清学检测绝大多数采用微柱凝集法，而
3、我国地域广阔，各级各类医疗机构采用的血型血清学检测方法不尽相同，其检测结果的判定存在相当大的差异。因此，为了确保1周岁内婴儿的输血安全性与有效性，我们组织相关领域专家制定婴儿期输血前血型血清学检测中国专家共识，以便规范婴儿期血型检测的行为。1采用GRADE系统证据水平与推荐级别IT1.1 GRADE系统证据水平GRADE系统证据质量分为高、中、低、极低即A、B、C、D共4级。高质量（八）：进一步研究也不可能改变该疗效评估结果的可信度:我们非常确信真实的效应值接近效应估计值。中等质量（B）：进一步研究很可能影响该疗效评估结果的可信度，且可能改变该评估结果：对效应估计值我们有中等程度的信心，真实值
4、有可能接近估计值，但仍存在二者很不相同的可能性。低质量（C：进一步研究极有可能影响该疗效评估结果的可信度，且该评估结果很可能改变：我们对效应估计值的确信程度有限，真实值可能与估计值大不相同。极低质量（D）：任何疗效评估结果都很不确定：我们对效应估计值几乎没有信心，真实值很可能与估计值大不相同。（注:早期定义；当前定义）1.2 GRADE系统推荐级别：GRADE系统推荐级别只分为“强”、“弱”即1、2两级。当明确显示干预措施利大于弊或者弊大于利时，将其列为强推荐（推荐级别1）0当利弊不确定或无论质量高低的证据均显示利弊相当时，则列为弱推荐（推荐级别2）。2ABO血型鉴定推荐1月龄4个月婴儿可只进
5、行正定型检测：月龄24个月婴儿应进行正反定型检测。（证据级别IHnn：1A）推荐2正定型检测：抗A或（和）抗B凝集强度23+（强度评分J1.O分）。反定型检测:月龄N4个月婴儿微柱凝集法、月龄N6个月婴儿室温试管法和4C试管法A1.细胞或（和）B细胞凝集强度2（强度评分力2分）。（证据级别：1A）推荐31周岁内婴儿ABO血型正反定型不符时，由于红细胞上A或（B）血型抗原数量较少，通常不使用血型血清学检测技术进行ABo血型亚型鉴定，在条件允许的情况下可使用分子生物学技术进行检测。（证据级别：1A）2.1 标本要求EDTA抗凝血标本21m1.标本采集应是检测前3d内，采集当日为第0天。宜采集后立即
6、使用。2.2 检测方法试管法、微柱凝集法和微孔板法等。可选择手工检测或（和）全自动血型分析仪检测。2.3 试剂要求6”(1)正定型试剂：单克隆抗-A、抗-B血型试剂应符合国家相关要求。效价：抗-A对AI细胞效价应不小于128,对九细胞应不小于32,对A.B细胞应不小于16：抗-B对B细胞效价应不小于128。亲和力：抗-A、抗-B血型试剂分别与10%.%和B试剂细胞试剂等量置于玻片(平板)上混匀，出现凝集的时间应分别W15s：且在3min内凝集块应达到1Inm2以上。(2)反定型试剂：儿和B试剂细胞应符合国家相关要求。A1和B试剂红细胞浓度为2%-5%02.3.2微柱凝集法(1) ABO血型鉴定
7、的微柱凝集卡应符合国家相关要求。(2) A1.和B试剂细胞应符合国家相关要求。A和B试剂红细胞浓度为0.5%n或按试剂说明书要求。2.3. 3微孔板法同试管法2.4 结果判定2.4.1 不同方法学凝集强度判读原则(I)试管法和微孔板法：见表1。表1试管法凝集强度判读原则凝集避馁讲分结果描述4+12一个玷实的凝集块3IO芥1：个大凝集块2+8中等大小武集块.行及清范1.5小凝集块背景浑浊1.+w4秋集块根小背景浑浊W或土2凝集块儿斗不可W.肯雄汴浊0无凝集块mf凝处和年越集红班DH混合物（混介视野）H完全溶血PH部分溶血,部分红珊胞残M注：摘自AABB血站和输血机构标准（第33版）。（2）微柱凝
8、集法：见表2。表2微柱凝集法凝集强度判读原则:度岸分u建TT-12鬃的11f1.*全部集中在外俄的够趣.QI1.tJ:fnI3IO凝史的H用电空大艇分舞中A介岐的陵礴.在I壮姓仙“M赘集红编也.“拉状石J.凝集的H绝大洋分筵中在介厥的中I勒在卜勒有少红裕it.Y-at集R在混皎介攻z-IWttfi5款便的tiM他人就分*中生介Jt制底那在中卜厢机少M1.naftt!红斓也vwwtt2及集的HfRik渔火筮分整中在介吸的吸邳.在介班的FIAf1.Hi像少M的献集”彻射Vmwntt0f1.细射全海沉作他件介脸的成MDPHxe里的tiMx虐介介碉的值邨力点打加他出现仲介喷箝般M发全热（3）微孔板法：
9、红细胞溶血或在微孔底部形成凝集细胞扣（块状或散在颗粒状）者判为阳性：重悬细胞扣后，无红细胞凝集（呈均匀悬浮状）者判为阴性；凝集强度判读参见试管法I见表1。2.4.2正定型试管法、微柱凝集法和微孔板法的抗A或（和抗B凝集强度N3+（强度评分210分）。（1）试管法和微柱凝集法凝集强度：见表3。试管法（4C）是指在试管中加样后置入4冰箱内放置至少15min后离心，观察检测结果。表3BO血型反定型试管法和微柱凝集法凝集强度M月的（JJ）试管法（iU）iffy.4t)ENitt集法献集俚度每度泮分凝集翎夜4S度懵分凝集领度强度评分4J1M1.M5分8月龄W1.o云Ir云4分M6分云2*去8分10J!i
10、3A之IO分4+12分（2）微孔板法同试管法（室温）。2.5注意事项2.5.1 全自动血型分析仪判定结果时，应进行人工确认。2.5.2 月龄W4个月婴儿仅进行正定型检测时，应从原始血标本管再次取样复查正定型，宜采用不同检测方法或不同厂家检测试剂进行检测，确保检测结果正确性。2.5.3 3月龄WI个月婴儿ABO正定型微柱凝集法、试管法（室温）的抗A或（和）抗B凝集强度23+（强度评分210分）的比例分别占100%、70%us1.1,2.5.4月龄W1.个月婴儿血清中的抗A或（和）抗B可能来源于母亲。婴儿自身产生抗力或（和）抗B,随着月龄增大，其效价会逐渐增高2.5.5月龄4个月婴儿，出现正反定型
11、结果不一致时，首先应详细询问病史，而后可选择下列操作步骤：（1）重新采集血标本进行ABO正反定型。（2）设立自身对照，重熨实验；同时进行直接抗人球试验。通常只有在自身对照或（和）直接抗人球试验阴性时，正反定型判定结果才有效。（3）反定型检测中应增加。试剂细胞（应符合国家相关要求）检测，初步确认是否存在意外抗体。（4）采用试管法，且4C孵育至少15min,检测弱抗原抗体反应等。（5）遇到1周岁内婴儿ABO血型正反定型不符时，由于红细胞上A或（B）血型抗原数量较少。因此，通常不使用血型血清学检测技术进行ABO血型亚型鉴定。建议1周岁后夏查血型。对存在有疑问的血标本，在条件允许的情况下可使用分子生物
12、学技术进行检测g1.3RhD抗原检测推荐4婴儿出生后RhD抗原检测凝集强度23+（强度评分210分。（证据级别：1A）推荐5RhD抗原检测阴性的血标本应进行RhD抗原确认试验，宜使用3个或以上来源于不同克隆株的IgG或IgG+gM抗-D试剂进行检测，确定是否存在弱D和部分I）。（证据级别：1A）推荐6对RhD抗原检测阴性的婴儿未进行RhD抗原确认试验检测,应在报告单上注明“初检”。（证据级别：1A）3.1 标本要求EDTA抗凝血液标本或非抗凝血清标本孑1m1.（与ABO血型鉴定同时检测时，标本量总量不少于1m1.）o标本采集应是检测前3d内，采集当日为第0天。宜采集后立即使用。3.2 检测方法
13、试管法、微柱凝集法和微孔板法等。可选择手工检测或（和）全自动血型仪检测。3.3 试剂要求3.3.1试管法（1）单克隆IgM抗-D应符合国家相关要求。（2）单克隆IgM抗-D试剂,效价应不小于128,与R1.R1.细胞亲和力N20S0（3）用于婴儿的RhD抗原检测试剂不应检测到DV1.发型。3.3.2微柱凝集法：RhD抗原检测的微柱凝集卡应符合国家相关要求。3.3 .3微孔板法同试管法。3.4 结果判定3.4.1 不同方法学凝集强度判读原则：见表1、2。3.4.2 阳性：凝集（强度评分分）或溶血：同时H身对照或（和）直接抗人球试验阴性。3.4.3 阴性：无凝集（强度评分0分）、无溶血。3.5 注
14、意事项3.5.1 全闩动血型分析仪判定结果时，应进行人工确认。3.5.2 婴儿出生后RhD抗原检测凝集强度N3+（强度评分N1.o分）的比例占100%,8-,913.5.3 3RhD抗原检测阴性的血标本应进行RhD抗原确认试验，宜使用3个或以上来源于不同克隆株的IgG或IgG+IgM抗-D试剂进行检测,确定是否存在弱D和部分D3.5.4 为了提高RhD抗原检测结果的正确性，对RhD抗原检测阴性的婴儿未进行RhD抗原确认试验检测，应在血型报告单上注明“初检，【到2113.5.5 5高效价RhD抗体导致严重新生儿溶血病，可形成抗原遮蔽现象，导致月龄1个月婴儿RhD抗原鉴定出现困难aM1.I宜进行直
15、接抗人球蛋白试验，可排除抗原遮蔽现象引起的RhD结果假阴性现象。4直接抗人球试验推荐7适用于母婴ABO血型不合（尤其是母亲。型，父亲非0型）、母婴Rh血型不合（尤其是母亲RhD阴性）、母婴其他血型不合、母亲产前意外抗体筛查阳性、ABO血型正反定型不符、伴有高效价RhD抗体的RhD假阴性、意外抗体筛查细胞全部阳性、交叉配血结果凝集或溶血等情况的婴儿。（证据级别：1A）推荐8试管法直接抗人球蛋白试验肉眼观察无凝集时，必须通过显微镜观察进一步确认结果。（证据级别：1A）4.1 标本要求EDTA抗凝血液标本或非抗凝血清标本N1.m1.（与ABo血型鉴定、RhD抗原检测同时检测时,标本量总量不少于Im1
16、.）II应使用当天采集标本。4.2 检测方法试管法、微柱凝集法和微孔板法等。可选择手工检测或（和）全自动血型仪检测。4.3 试剂要求4.4 3.1试管法多价抗-IgG试剂、单价抗TgG试剂、抗-C3试剂应符合国家相关要求。4.5 3.2微柱凝集法多价抗TgG微柱凝集卡、单价抗TgG微柱凝集卜、抗-C3微柱凝集卡应符合国家相关要求。4. 3.3微孔板法同试管法。4.4结果判定4.4.1 不同方法学凝集强度判读原则：见表1、2。4.4.2 阳性：凝集（强度评分21分）或溶血，说明受检红细胞已被抗体和（或）补体致敏。4.4.3 3阴性：无凝集（强度评分0分）、无溶血，说明受检红细胞未被抗体和（或）补
17、体致敏。4.5.1适用于：母婴ABO血型不合（尤其是母亲。型，父亲非O型）、母婴Rh血型不合（尤其是母亲RhD阴性）、母婴其他血型不合、母亲产前意外抗体筛查阳性、ABO血型正反定型不符、伴有高效价RhD抗体的RhD假阴性、意外抗体筛查细胞全部阳性、交叉配血结果凝集或溶血等情况的婴儿闻。4.5.2受检红细胞必须经过充分洗涤（23次），以去除红细胞表面粘附的蛋白和游离抗体。4.5.3试管法添加抗人球蛋白试剂后，IgG致敏的红细胞通常在直接离心后出现凝集或溶血，而补体致敏的红细胞通常需要经过室温瘠育一段时间后离心才能检测出来。4.5.4试管法直接抗人球蛋白试验肉眼观察无凝集时，必须通过显微镜观察进一
18、步确认结果。5意外抗体篇查推荐9意外抗体筛查全部阳性时，应加做F1.身对照或（和）宜接抗人球试验；宜进行抗体鉴定，明确抗体的特异性。（证据级别：1A）推荐10月龄W4个月婴儿意外抗体筛查阳性，应进行母亲意外抗体筛查，如结果阳性宜进行抗体鉴定。（证据级别：1A）5.1 标本要求EDTA抗凝血液标本或非抗凝血清标本21m1.o月龄4个月患儿可用母亲血浆（血清）应使用当天采集标本。试管法、微柱凝集法和微孔板法等。可选择手工检测或（和）全自动血型分析仪检测。检测介质包拈但不限于盐水、凝聚胺、抗人球蛋白、的。5.3 试剂要求5.3.1 意外抗体筛查试剂细胞和微柱凝集法的抗人球蛋白卡应符合国家相关要求。5
19、.3.2试剂细胞来源22个已知表型的O型供者（每个试剂细胞来源于单一供者，不能混合使用），其中红细胞抗原表达应当互补，至少包括R1.R1.与R2R2表型红细胞，表达Fya.Fyb、Jka.Jkb、M、N、S、s、P1.、1.ea、1.eb等抗原,细胞组合中应至少有一个细胞为抗原阳性即刈.5.3 .3通常不包括自身对照或（和）直接抗人球蛋白试验（DAT）O5.3.4试管法和微孔板法检测试剂红细胞浓度为2%5乐柱凝集法检测试剂红细胞浓度为0.5%相或按说明书要求。5.4 结果判定5.4.1 不同方法学凝集强度判读原则见表1、2。可按照试剂说明书推荐标准判定结果。5.4.2 阳性：凝集（强度评分N1
20、.分）或溶血，说明检出意外抗体。5.4.3 阴性：无凝集（强度评分0分）或无溶血，说明未检出意外抗体。1.1.1 全自动血型分析仪判定结果时，应进行人工确认。5.5.2检测结果中意外抗体筛查细胞全部阳性时，应加做自身对照或（和）直接抗人球试验。1.1.3 已知婴儿存在意外抗体，应进行抗体特异性鉴定。1.1.4 IgV、IgG性质意外抗体均可在凝聚胺介质法、微柱凝集卡中出现阳性结果，需加做盐水介质法试验，以区分阳性结果是由于单独IgG性质意外抗体所致，还是存在IgV性质意外抗体影响所致。5.5. 5凝聚胺介质法对Ke1.1.血型系统的抗体易发生漏检。5.6. 6月龄W4个月婴儿意外抗体筛查阳性，
21、应进行母亲意外抗体筛查，如结果阳性应进行抗体鉴定*o5.7. 7怀疑低频抗原导致的抗体时，可加用父亲红细胞进行意外抗体筛查3”。6交叉配血试验推荐H交叉配血试验应包括：盐水介质法和非盐水介质法（可检出IgG抗体。（证据级别：1A）推荐12月龄W4个月婴儿，且ABo血型与母亲同型时，可用母亲血浆/血清做交叉配血试验。（证据级别：1.V）推荐13输血前应对献血者血液进行ABO血型（正反定型）复核；对RhD阴性献血者血液还应进行Rhr）抗原货核。（证据级别：1A）6.1标本要求EDTA抗凝血液标本或依抗凝血清标本21mJ月龄W4个月婴儿,且ABO血型与母亲同型时，可用母亲血浆/血清。标本采集应是输血
22、前3d内，采集当日为第0天。宜采集后立即使用。多次输血已产生意外抗体时，应使用当天采集标本。6.2检测方法6.2.1 试管法、微柱凝集法等。可选择手工检测或（和）全自动血型分析仪检测。6.2.2 意外抗体筛查阳性且月龄W4个月婴儿，其体内的抗体来自母亲，能透过胎盘屏障的只有IgG性质抗体，应至少选择一种可检出IgG抗体方法进行交叉配血。意外抗体筛查阴性且月龄4个月和意外抗体筛杳阳性婴儿，应采用盐水介质法和至少选择一种可检出IgG抗体方法进行交叉配血。6.3试剂要求仁”6.3.1应符合国家相关要求。6.3.2检测介质包括但不限于盐水、凝聚胺、抗人球蛋白、酶、PEG、1.1.SS等。6.4结果判定
23、6.4.1 不同方法学凝集强度判读原则见表1、2。6.4.2 相合性输注：主、次侧无凝集（强度评分。分）和无溶血，包括但不限于ABO血型同型、RhD抗原同型。6.4.3 4.3相容性输注：主侧无凝集（强度评分0分）和无溶血，ABO血型不同型，见表4。表4ABO血型红细胞输注原则要儿01梨-献血并向G楸介性（同型）喻注相容性喻注AAOBBOOO0ABABO、A、B6.5注意事项6.5.1全IiI动血型分析仪判定结果时，应进行人工确认。6. 5.2输血前应对献血者血液进行ABO血型（正反定型复核；对RhD阴性献血者血液还应进行RhD抗原复核。7. 5.3遇到特殊情况（1）疾病与药物对交叉配血试验影
24、响1）婴儿尤其是月龄WI个月体内出现冷凝集素、自身抗体、意外抗体、血浆蛋白异常、溶血病、使用某些药物（如：扩容剂、止血药、静脉丙种免疫球蛋白）等因素可导致ABO同型红细胞成分交叉配血不合时叫2）由于婴儿期诸多疾病治疗会使用静脉丙种免疫球蛋白（IV1.G）,IVIG中如含有.效价较高的ABO血型系统抗体,可引起交叉配血不合，输血时可选择O型洗涤红细胞输注。（2）如果母亲O型，新生儿（患儿）非0型，选择输注ABO同型红细胞，需在输注前确认患儿游离抗体试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性（3）如果母亲或患儿的血标本中检测到ABO血型系统意外抗体，患儿宜输注意外抗体对应抗原阴性的红细胞成分，宜至患儿的血清
25、（血浆）中检测不到意外抗体为止（通”：。（4）患儿意外抗体筛查阴性时，紧急情况下宜使用能检出意外抗体且检测时间较短的方法。（5）月龄4个月婴儿意外抗体筛查阴性时，且同型输血交叉配血出现凝集或溶血，宜增加A1.或（和）B型试剂细胞进行检测，排除IVIG或母亲抗-A或（和）抗-B干扰。（6）急症必须接受输血治疗，应当遵循生命权第一的原则，权衡利弊后制定针对性的输血策略，明确告知患方并获取书面委托代理人、监护人或近亲属知情同意，做好输血过程中以及输血后的医学监测与必要的医疗干预。1）RhD阴性婴儿无法及时获取RhD阴性的血液成分时；2）婴儿血液中检出具有临床意义的红细胞意外抗体且无法获得相应抗原阴性
26、的红细胞成分时.；3）患者无法通过自身吸收等方法消除自身抗体对输血相容性检测的干扰时。7质量控制,招推荐14输血前血型血清学检测项目应有室内质控、室间质评和人员比对结果报告。（证据级别：1A）推荐15检测试剂每批次入库存放前应进行室内质控：至少在每天试验开始前、试验中途更换试剂批号后应再次进行质控或验。（证据级别：1A）推荐16每年应参加国家和省（市）室间质评开展的所有输血相容性检测项目。国家和省（市）的室间质评未开展的输血相容性检测项目，需与其他已获得国家和省（市）输血相容性检测室间质评认可实验室进行实验比对。（证据级别：1A）推荐17ABO血型鉴定、RhD抗原检测和交叉配血试验结果应100
27、%符合要求；直接抗人球蛋白试验和意外抗体筛查结果应N80%符合要求。（证据级别：1A）7.1 室内质控7.1.1 基本原则（1）ABO血型鉴定：对抗-A、抗-B试剂血清，每次室内质控应至少选择一个阳性对照质控品，一个阴性对照质控品。对于AKIk0试剂细胞，每次室内质控应至少选择一个阳性对照质控品，一个阴性对照质控品；阳性质控品宜选择凝集强度2+（强度评分8分）的反应强度。（2） RhD抗原检测：对抗-D试剂血清，每次室内质控应至少选择一个阳性对照质控品，一个阴性对照质控品。阳性质控品宜选择凝集强度3+（强度评分10分）的反应强度。（3）直接抗入球试验和意外抗体筛查：每次室内质控应至少选择一个阳
28、性对照质控品，一个阴性对照质控品。阳性质控品宜选择凝集强度2+（强度评分8分）的反应强度。（4）交叉配血：每次室内质控应至少选择一个受血者质控品（含有IgM抗体），一个抗原阳性供血者质控品和一个抗原阴性供血者质控品。阳性质控品宜选择凝集强度2+（强度评分8分）的反应强度。7.1.2 频次要求（1）每批次检测试剂入库存放前应进行室内质控。（2）至少在每天试验开始前、试验中途更换试剂批号后应再次进行质控试验。7.1.3 质控品选择可选择商品化质控品；也可使用实验室标本资源自制质控品。（1）应使用与血型血清学检验系统响应方式尽可能接近患者样品的质控品。（2）应定期检验质控品。检验频率应基于血型血清学
29、检验程序的稳定性和错误结果对受检者（婴儿）危害的风险而确定。（3）宜选择临床决定值水平或与其值接近的质控品浓度，以保证决定值的有效性；宜使用独立的第三方质控品，作为试剂或仪器制造商提供的质控品的替代或补充。7.1.4质控结果分析（】）质控结果与预期结果相符，提示结果在控，受检者（婴儿）血标本检测结果可匏。质控结果与预期结果不相符，提示结果失控,受检者（婴儿）血标本检测结果不可靠，需查找原因纠正影响因素后，重复检测。（2）应定期评审质控数据，以便发现可能提示血型血清学检验系统问题的检验性能变化趋势，采取预防措施并记录。7.2室间质评7.2.1 国家和省市室间质评（1）每年应参加国家和省（市）室间
30、质评开展的所有输血相容性检测项目。（2）应保留参加室间质评的结果和证书。科室负责人应监控室间质评活动的结果，并在结果报告上签字。7.2.2 与其他实验室比对（1）国家和省（市）的室间质评未开展的输血相容性检测项目，需与其他实验室进行实验比对。（2）比对实验室应是已获得国家和省市的输血相容性检测室间质评认可，且使用相同检测方法和使用配套系统。（3）比对方式应满足要求：1）样品数量至少5份，包括正常和异常水平。2）频率至少每年2次;3）判定标准ABO血型鉴定、RhD抗原检测和交叉配血试验结果应100与符合要求；宜接抗人球蛋白试验和意外抗体筛查结果应280%符合要求。7.3 人员比对7. 3.1应至少每年1次进行科室内部人员比对，包括人员和不同方法/检测系统间的比对。8. 3.2检测标本至少选择2份阴性、2份弱阳性、1份阳性样品进行比对，评价比对结果的可接受性。9. 3.3比对记录应由科室负责人审核并签字。7.4 记录与保存：输血前血型血清学检测项目质量控制过程均应有记录，且保存至少10年，备查。利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突
