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1、专题2 微生物的培养与应用,课题1 微生物的实验室培养,了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。,一、课题目标：,掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。,无菌技术、平板划线法等基本操作,二、课题重点和难点：,三、技能目标：,一.微生物的类群,微生物,原核类:,真核类,非细胞类：,细菌、支原体、放线菌、蓝藻,个体微小、结构简单,酵母菌、霉菌、食用菌,真菌：,原生生物：,显微藻类、原生动物（如：草履虫、变形虫等）,病毒,微生物的共同特点：,1.细菌的形态,2.细菌的菌落,.定义：,单个或者少数细菌在固体培养基上
2、大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。,.特征：,大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。,.功能：,每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。,几种菌落及其形态,1.概念：,人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,二.培养基,思考：微生物要生存繁殖，需要“吃”什么？,2.培养基的营养物质,1.水2.碳源（提供碳元素的物质）3.氮源（提供氮元素的物质）4.无机物（无机盐）,3.培养基的类型,（1）按物理状态分：固体培养基 半固体培养基 液体培养基,区别：加入琼脂的量决定培养基的物理状态。注意：一般细菌不能利用
3、琼脂。,单个或者少数微生物在固体培养基表面生长繁殖,可以形成肉眼可见子细胞的群体菌落,固体培养基用途：用于微生物纯化、计数、鉴定,液体培养基：工业生产,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,半固体培养基：观察运动,天然培养基,合成培养基,化学成分不恒定的天然有机物,如：牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基,化学成分完全了解的物质配制而成的培养基,（2）按化学成分划分：,鉴别培养基,将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来,用于鉴别不同类型微生物的培养基,选择培养基,（3）按用途划分：,选择培养基和鉴别培养基的比较,从众多微生物中分离所需的微生物,鉴别不同种类的微生物,不加含碳有机物的无碳培养基，,伊
4、红美篮培养基使大肠杆菌的菌落呈黑色，可以鉴别大肠杆菌,分离自养型微生物,2.无菌范围：,实验操作空间消毒,操作者的手、衣着消毒,实验用具灭菌,实验操作过程,3.无菌的方法：,酒精灯旁操作,三.无菌技术,防止外来杂菌的污染,1.无菌的意义：,消毒与灭菌,（1）消毒,（2）灭菌,概念,较为温和理化方法杀死部分有害微生物,强烈的理化因素杀死所有的微生物,2.无菌的方法,接种室内空气、接种箱、超净工作台,紫外线消毒,实验者的手臂、实验台等,化学药剂消毒,牛奶等不宜高温消毒灭菌的,巴氏消毒,日常食物、罐装食品,煮沸消毒法,适用范围,方法,（1）消毒,培养基、实验器材,高压蒸汽灭菌,耐高温需干燥的物品（玻
5、璃器皿等）,干热灭菌,接种的工具、试管口、瓶口,灼烧灭菌,适用对象,灭菌方法,灼烧灭菌,干热灭菌箱,高压蒸汽灭菌锅,（2）灭菌,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻璃棒、试管、烧瓶（3）实验操作者的双手,思考,答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。,我们已经对培养基和无菌技术有了一定的了解，你能不能用培养基进行大肠杆菌的纯化培养？,思考,大肠杆菌的纯化培养：,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,四.实验操作,（二）纯化大肠杆菌,1.计算：,依配方计算各成分的用量,2.称量：,3.溶化：,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加
6、盖,牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解,取纸,蛋白胨、NaCl,琼脂、搅拌,补水定容,4.灭菌：,5.倒平板：,（一）制备培养基,培养基高压蒸汽灭菌，培养皿干热灭菌,计算称量溶化灭菌倒平板,（一）制备培养基,1.将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。,1,2,3,4,2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。,3.用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约1020mL)倒入培养皿，左手立即盖上皿盖。,4.等待平板冷却凝固（约需5 10min）。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。,1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你
7、用什么办法来估计培养基的温度？,问题讨论,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染 避免培养基中水分过快蒸发。,答：最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。,单个细胞,单个菌落,（二）纯化大肠杆菌,如何纯化？,接种常见方法,平板划线法,如何分散成单个细胞？,
8、稀释涂布平板法,微生物群,分散,1.平板划线法：,分区划线法,连续划线法,（1）概念与原理：,聚集的菌群,连续划线,稀释分散,单个细胞,菌落,生长繁殖,(2)“平板划线”实验操作,（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,问题讨论,杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者,接种结束后,杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞,每次划线前,杀死接种环上原有微生物,取菌种前,目的,灼烧时期,（2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,
9、答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,（3）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,答：线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到单个细菌繁殖而来的菌落。,3个划线平板,1个不划线平板,（重复实验）,（空白对照）,（3）培养,放入37恒温箱中培养12h24h,2.稀释涂布平板法,菌液的梯度稀释：,涂布平板操作：,(1)概念与原理：,聚集的微生物,单个细胞,菌液梯度稀释,菌落,涂布平板,(2)操作：,生长繁殖,系列梯度稀释操作,9mL无菌水,9mL无菌水,9mL无菌水,9mL无菌水,9mL无菌
10、水,9mL无菌水,注意：移液管需要经过灭菌；试管口和移液管离火焰12cm处。,涂布平板操作：,各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照,放入37恒温箱中培养12h24h,（3）培养,1.临时保藏：,试管固体斜面培养基上,4,2.长期保存：,菌种易被污染、变异,甘油管藏,1ml甘油1ml菌液,20,三 菌种的保存,36个月，转移培养,2分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是_和_。(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？_。,有选择
11、作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长,葡萄糖,尿素,3.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是()化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法ABC D,A,四 成果评价,如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,（二）接种操作是否符合无菌要求,如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求。,（一）培养基的制作是否合格,（三）是否进行了及时细致的观察与记录,培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。,液体培养基：工业生产,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,固体培养基用途：用于微生物纯化、计数、鉴定,半固体培养基：观察运动,
