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1、东北酸菜是我国东北地区人们以贮藏秋菜而在漫长冬季仍能摄取蔬菜为目 的的产物之一，并已成为东北地区重要的一种特色传统发酵食品，可生熟两吃。 传统东北酸菜主要以白菜为原料进行自然发酵，以口感酸爽、脆嫩，风味独特， 富含多种氨基酸等特点于一身而闻名，这与酸菜在自然发酵制备过程中微生物的 组成及作用息息相关。酸菜的菌相组成主要源于附着在蔬菜表面的天然本土微生 物，其与地域环境有关，因此东北地区的气候及环境条件赋予了东北酸菜特有的 风味及营养价值。传统发酵酸菜的微生物菌群涵盖了细菌和真菌两大类，且以细菌占绝对优 势，而细菌中又以乳酸菌为优势菌，主要包括乳杆菌属、明串珠菌属等。乳酸菌 作为益生菌的重要来源
2、而备受关注，并成为研究热点。大量动物及人体临床研究 表明，乳酸菌具有诸多明确的益生功能，如可降胆固醇、抗糖尿病、抗肥胖、抗 抑郁、抗氧化、可降解草酸盐防治肾脏疾病等，这些益生特性具有菌种和菌株特 异性。因此，从传统自然发酵酸菜中分离筛选性状优良的具有潜在应用价值的乳酸 菌具有重要意义。从东北酸菜中分离筛选到1株乳酸菌，通过形态学及基因序 列比对分析对其种属进行鉴定，并探究其益生特性，旨在为益生菌产品的开发及 工业潜在发酵剂菌种筛选提供理论支持。1菌株的分离与鉴定1.1 I菌株的分离采集的传统自然发酵酸菜样品经mMRS选择性培养基分离筛选，共分离到 可在含0.75% CaCO3的mMRS固体培养
3、基上形成透明圈菌落、革兰氏阳性且过 氧化氢酶阴性的疑似乳酸菌9株，分离结果如图1所示。生长速度是筛选工业 发酵剂菌种的重要指标之一，故选取了其中1株在液体培养基中生长速度最快 的菌株HUCMl 15进行深入研究。1.2 I形态学特征菌株HUCMl 15在mMRS固体培养基和液体培养基分别于37 C培养24 h, 其生长情况及革兰氏染色观察菌体细胞的形态特征如图2所示。菌株HUCMIl5 在mMRS琼脂培养基上形成为圆形，表面光滑有光泽，边缘完整，低凸，质地 黏稠，乳白色，菌落不透明；菌体细胞为短杆，两端钝圆，单在、成对排列，偶 见成链；液体培养24 h呈混浊生长，但上层较澄清，底部有厚层沉淀，
4、上下层 界限明显。1.3 U6 SrDNA序列比对分析菌株HUCMlI5的16SrDNA基因经PCR扩增、纯化并测序，M 16SrDNA 基因序列经BLAST后发现与乳杆菌属内菌种的同源性最高。利用MEGA5.1软 件,与GenBank数据库中己知的乳杆菌属内模式菌株的16S rDNA基因序列进行 序列比较，并以非同属的ESCherChiaCoIi模式菌株为外标，绘制出系统发育树， 结果如图3所示。由图 3 可知，菌株 HUCMl 15 与 Lactobacillus plantarum 和 L.pentosus 模式株 的亲缘关系最近，序列相似性均大于98%,故通过16SrDNA基因序列比对
5、分析 尚无法确定菌株HUCMlI5的具体种。因此，选择PheS基因序列进一步比对分 析。1.4 I PheS基因序列比对分析为了进一步确定菌株HUCMl 15种的归属，其pheS基因被进一步扩增及测 序，经BLAST后发现其pheS基因序列同样与乳杆菌属内菌种的同源性最高。 同样利用MEGA5.1软件，以非同属的HenCobaCterPylOri模式菌株为外标，与已 知的乳杆菌属内模式菌株的PheS基因序列进行比较分析，绘制系统发育树，结 果如图4所示。基于PheS基因序列构建的系统发育树显示，菌株HUCMIl5与 Lpkmtarum模式株的亲缘关系最近，且序列相似性为100%。因此，鉴于形态
6、学 特征及16S rDNA和pheS基因序列比对分析结果，可确定HUCMl 15菌株为植 物乳杆菌。2菌株HUCMu5的酸耐受性菌株HUCMIU5分别在pH 2.0、2.5和pH 3.0环境下37 培养3 h,不同 培养时间活菌数变化情况如图5所示。在PH 3.0和PH 2.5酸性环境下保持3 h 前后活菌数无显著变化(P0.05),仍维持在109CFUmL水平；pH 2.0酸性环 境对菌株HUCMl 15的存活影响较大，培养1 h后活菌数从1.9109 CFUZmL降 为8.4x107 CFUmL,而培养2 h后则无活菌检出。3菌株HUCMIl5的胆汁耐受性如图6所示，不论在0.3 g/10
7、0 mL还是0.5 g/100 mL胆汁环境下，菌株 HUCMu5培养1、2、3h后活菌数与Oh相比均无显著差异(P0.05),这说明 菌株HUCMl 15处于胆汁质量浓度低于0.5 g/100 mL环境时，其菌种活力不会受 到任何影响。4菌株HUCMil5的自动聚集能力结果显示，植物乳杆菌HUCMU5培养物经振荡后发生了迅速沉降，室温静 置30 min自动聚集百分比为15.4%,而静置60 min则达到近70%,此时细菌悬 浮液上层溶液呈澄清状态，之后自动聚集百分比则趋于平稳无显著变化，到第 150分钟时自动聚集百分比为72.4%o5菌株HUCMu5体外去除胆固醇作用未接种与接种植物乳杆菌H
8、UCM115的含胆固醇培养基于37 培养24 h 后，分别测定培养上清液的胆固醇含量，结果显示，植物乳杆菌HUCMll5培养 在含胆固醇培养基中24 h后，培养基中20.6%胆固醇被去除，说明该菌株具有潜 在的降胆固醇特性。6菌株HUCMl 15产GABA的能力在富含谷氨酸的培养基中，接种菌株HUCMll5培养48 h后，用高效液相 色谱法检测发酵液中GABA含量，色谱如图8所示。利用外标法以峰面积进行 定量可知,植物乳杆菌HUCMII5于37 C培养在含1%谷氨酸的TYG培养基中， 孵育48 h后发酵液中GABA质量浓度可达(101.30.8) gmL,结论从东北酸菜中分离到1株植物乳杆菌H
9、UCM115,具有良好的酸和胆汁耐受 性及自动聚集能力，37 C发酵24 h后培养基中胆固醇去除率可达20.6%,发酵 48h后GABA质量浓度可积累至101.3gmL,展现出了优良的益生特性，具有 潜在的应用价值。植物乳杆菌JLA-9产细菌素的分离纯化摘要：将来源于东北传统发酵酸菜中的植物乳杆菌JLA-9产的细菌素进行 分离纯化，首先利用饱和度为80%的硫酸镀溶液对发酵上清液进行沉淀粗分离。 复溶后利用Sephadex LH-20进行凝胶层析纯化，之后采用Hitrap QFF进一步进 行离子交换层析纯化，利用反相高效液相色谱(ReVerSed-PhaSe High Performance L
10、iquid Chromatography, RP-HPLC)C18柱进行最终纯化,得到单一活性抑菌组分， 说明细菌素得到基本纯化，经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass SPeCgmetry,MALDI-TOF/MS)确定该细菌素的分子质量约为0.9 kDa左右。采用 琼脂扩散法测定了细菌素对常见的食源性致病菌和腐败菌的抑菌效果，结果显示 该细菌素具有较好的抑制作用。关键词：植物乳杆菌；细菌素；分离；纯化；分子质量植物乳杆菌作为一种重要的乳酸菌，目前已经被广泛的应用到
11、食品加工相关 领域中1。许多植物乳杆菌能够产生细菌素，且细菌素具有热稳定性高，耐酸， 抑菌谱广以及能够被蛋白酶降解等优点，已经成为食品行业生物防腐剂开发的一 个热门方向2-3。目前从发酵食品中已经获得多种植物乳杆菌产的细菌素，例如 plantaricin 163(4, plantaricin A-I 5, plantaricin 35d6, bacteriocin AMA-K7, plantaricin MG8以及plantaricin ZJ59等。有的植物乳杆菌产的细菌素抑菌谱较 广，对革兰氏阳性菌和阴性菌都具有抑制效果，如分离自泡菜中的植物乳杆菌 163产的细菌素PlantariCin 1
12、63对食品中常见的大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，蜡 样芽抱杆菌等均具有较好的抑菌作用41。但有的细菌素抑菌谱却很窄，仅能抑 制少数种类的细菌，例如从山羊奶中分离获得的植物乳杆菌LC74产的细菌素 plantaricin LC74,仅能够抑制植物乳杆菌，短乳杆菌和布氏乳杆菌10。细菌素的分离纯化主要是根据细菌素的带电性、分子质量大小及疏水性等特 点来进行。一般的纯化主要包括3个基本的步骤：即粗提取、初步纯化和精细纯 化。粗提取大部分都是采用盐析的方法，主要是在发酵上清液中加入无机盐，最 常用的是硫酸镀，使蛋白类细菌素的溶解度降低从而从液体中析出。S0UMAYA 等利用盐析的方法从唾液乳杆菌SMXD5
13、1的发酵液中对细菌素进行粗分离，取 得了很好的效果，回收率为1.36%lllo RAMAKRlSHNAN等利用硫酸铉沉淀粗 分离鼠李糖乳杆菌L34产的细菌素，得到了较好的分离效果12。也有少部分人 选用有机溶剂进行萃取，主要是利用细菌素在互不相溶或者微溶的发酵上清液和 有机溶剂中溶解度的不同，从而使细菌素从发酵上清液中转移到有机溶剂中，然 后将有机溶剂通过真空旋转浓缩除去，最后得到粗提的细菌素，如TAYLOR等 利用甲醇和乙醇提取nisin取得了较好的分离效果13。初步纯化一般主要目的 是除去大部分的杂质，使细菌素的纯度达到50%90%,用于进一步的纯化鉴定， 通常采用离子交换层析和凝胶层析等
14、方式进行纯化。由于乳酸菌产的细菌素一般 所带的电荷大小不同，因此选用离子交换层析能够达到对细菌素分离纯化的目 的，该方法具有操作简单及交换容量大等特点，已经成为细菌素纯化过程中的最 常用的方法之一。ZHU等利用离子交换层析结合凝胶层析的方法，以0.15molL NaCl进行洗脱分离得到植物乳杆菌ZJ008产的细菌素plantaricin ZJ008,纯化 倍数达到24.814. HATA等采用离子交换和凝胶层析对植物乳杆菌A-I产的细 菌素PIantariCinASMl进行分离，纯化倍数达到20倍15。一般精细纯化作为整 个纯化的最后一步，目的是除去样品中残留的痕量杂质，是样品中的纯度高于 9
15、9%,以便于采用质谱和氨基酸测序等手段对其结构进行鉴定。目前大部分纯化 实验的最后一步都是采用反相高效液相色谱法，它可以显著地提高样品的纯度， 因此反相高效液相色谱技术已经在细菌素纯化中得到了广泛的应用14-16。本课题组前期从东北传统发酵酸菜中分离得到1株植物乳杆菌JLA-9,对革 兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有较强的抑制作用。本研究拟选用硫酸钱沉淀， 凝胶柱层析，离子交换层析和反相高效液相色谱等分离纯化手段对植物乳杆菌 JLA-9产的细菌素进行分离纯化，为深入研究其结构及性质提供理论依据。植物乳杆菌JLA-9,本实验室分离自农家自制发酵酸菜，现己保存于中国普 通微生物菌种保藏管理中心(CG
16、MCC No. 10686)o指示菌菌株及来源：大肠杆菌(ArCC25922)、蜡样芽狗杆菌(ASLI846)、荧 光假单胞菌(AS1.1802)、藤黄微球菌(CMCC(B)2800)、枯草芽抱杆菌(ATCC9943) 和肠炎沙门氏菌(CICC21527)。MRS培养基：牛肉膏IOg,蛋白陈IOg,乙酸钠5g, K2HPO42 g,柠檬酸 氢钱 2 g, MgSO47H2O 0.58 g, MnSO44H2O0.25 g,葡萄糖 20 g,吐温-80 1 mL, 蒸储水IL, pH6.26.4, 115、20 Inin灭菌备用,固体培养基另加1.5%2% 的琼脂。LB培养基：酵母粉5 g,蛋白
17、陈10g, NaC15 g,蒸储水1 L, pH 7.0, 121 20min灭菌备用，固体培养基另加1.5%2%的琼脂。Sephadex LH-20,美国PhamarCia公司；乙腊、三氟乙酸(TFA)、甲醇：色谱 纯，美国Tedia公司；硫酸钱：分析纯，国药集团化学试剂公司。全自动高压灭菌锅Tc)MY-SX-70,日本TOmy公司；高速离心机5418,芬兰 Eppendorf 公司；PH 计 OriOn 3 STAR,美国 ThermO 公司；超净工作台 SW-CJ-IBU, 苏州苏净集团；冷冻干燥机，德国ChriSt公司；AKTA蛋白纯化系统、Hitrap QFF 离子交换层析柱，GE
18、Healthcare公司；分光光度计UV-2450,日本Shimadzu公 司；旋转蒸发仪，德国HeidoIPh公司；高效液相色谱仪AgiIent IIOOSeiies,美 国Agilent公司；基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪，德国BrUker公司；电 脑自动部分收集器DBS-IO0,上海沪西分析仪器公司。13方法1.3.1 细菌素粗提液的制备将植物乳杆菌JLA-9在试管斜面MRS琼脂培养基上活化后接种于MRS液 体培养基，培养至对数生长期，制成浓度为107108CFUmL的种子液。将植 物乳杆菌JLA-9种子液以1%浓度接种于MRS发酵培养基中，37 静止培养 36 h,得到细菌素发酵液
19、后离心除去菌体得到无细胞上清液。将该上清液分为4 组，分别经60%、70% 80%、90%饱和硫酸铉搅拌过夜后，9 00Og离心IOmin 收集沉淀。用1/30体积的去离子水复溶后，用Imol/LNaOH调至pH6.5,经5.0 g/L的过氧化氢酶37 处理2 h后即为获得的细菌素粗提物。1.3.2 细菌素抑菌圈直径的测定细菌素抑菌圈直径的测定采用琼脂孔扩散法17,以蜡样芽抱杆菌ASl.1846 作为指示菌。1.3.3 凝胶层析纯化细菌素采用SePhadeX LH-20凝胶层析对细菌素的粗提物进行层析纯化。纯化条件 为：将2 mL细菌素粗提液上样于SePhadeXLH-20柱表面，采用色谱甲醇
20、和纯水 (体积比为80： 20)进行洗脱,洗脱流速3 mLmin,利用电脑自动收集器收集组分 4o以蜡样芽狗杆菌作为指示菌，通过检测其抑菌活性，得到抑菌活性组分。1.3.4 离子交换层析纯化细菌素采用HitnlP QFF离子交换层析柱，利用AKTA蛋白纯化系统对Sephadex LH-20纯化得到的活性组分进行层析纯化。纯化条件为：流速2 mL min,最高 柱压0.3 MPa,收集体积为1 mL,洗脱体积为5个柱体积，平衡体积为5个体积, 进样 2 mLo 分别用 0.1 molL, 0.25 molL, 0.4 molL, i mol/L 的 NaCI (pH8.5 的TriS-HCI作为
21、缓冲液)进行梯度洗脱。255 nm紫外光下检测，收集各个洗脱组 分，经蒸储水透析脱盐后通过测定抑菌圈直径检测其抑菌活性。1.3.5 反相高效液相色谱纯化细菌素将经过Hitrap QFF离子交换层析纯化得到的活性组分经浓缩后采用反高效 液相色谱Acchrom XCharge C18柱(4.6 mm250 mm)进行分离纯化，纯化条件： 洗脱液为含0.1%体积的三氟乙酸的水和乙睛溶液(水和乙懵体积比为95 : 5)等浓 度洗脱，时间：50 min；进样量:20 L;流速：0.3 mL/min；检测波长：255 nm。 收集液相色谱洗脱组分，通过测定抑菌圈直径检测其抑菌活性。1.3.6 细菌素分子质
22、量测定采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-ToF-MS)对RP-HPLC 最终纯化得到的单一-抑菌活性组分进行细菌素分子质量测定:仪器为Re Flex TM MALDl-TOF质谱仪；质谱基质为-氟基-4-羟基肉桂酸网；质谱条件：激光源 为波长355 nm的NdYAG激光器，加速电压20kV,激光强度4 100,正离子模 式检测，线性高分子模式，质量扫描范围mz7003 500。1.3.7 细菌素抑菌活性测定采用经SePhadeX LH-20部分纯化获得的细菌素活性组分，利用琼脂孔扩散 法测定细菌素的抑菌活性，指示菌株包括：大肠杆菌(ATCC25922)、蜡样芽抱杆 菌(ASLI
23、846)、荧光假单胞菌(ASLI802)、藤黄微球菌(CMCC(B)2800)、枯草芽 狗杆菌(ArCC9943)和肠炎沙门氏菌(CICC21527)。2结果与分析2.1 细菌素硫酸核沉淀粗提取本试验中分别选用60%、70% 80%、90%饱和度的硫酸镂进行沉淀，由表 1可以看出80%和90%饱和硫酸镂沉淀的效果较好，由于90%饱和硫酸镂沉淀下 来的杂蛋白会更多，因此选用80%饱和硫酸镇沉淀作为细菌素的粗提取方法。表1植物乳杆菌JLA-9发酵上清液硫酸镂沉淀后抑菌活性Table 1 Antibacterial activity of cell-free culture supernatant
24、ofL.plantarumJLA-9 treated by ammonium sulfate2.2 细菌素凝胶层析纯化经硫酸钱沉淀得到的细菌素粗提样品首先采用Sephadex LH-20凝胶层析进 行纯化，以蜡样芽抱杆菌ASL1846作为抑菌指示菌，通过琼脂孔扩散法对收集 的样品进行检测，结果见图1。由图1可以看出，在收集管中的第36管至49管 之间得到一个抑菌活性洗脱组分，因此将其收集后用于下一步分离纯化。图1植物乳杆菌JLA-9所产细菌素的SePhadeXLH-20洗脱曲线Fig.l Elution curve of bacteriocin from L plantarum JLA-9 o
25、n Sephadex LH-20 gel2.3 细菌素离子交换层析纯化将经Sephadex LH-20纯化得到的样品进行Hitrap QFF离子交换层析纯化， 以蜡样芽泡杆菌作为抑菌指示菌，通过琼脂孔扩散法对收集的样品进行检测，结 果见图2。经抑菌实验检测，在NaCl的洗脱浓度为0.1molL时得到的洗脱组分 1具有抑菌活性，在第16管至24管之间得到该抑菌活性组分，将其收集后用于 下一步的分离纯化。mAl 600540()3002l图2植物乳杆菌JLA-9所产细菌素的Hitrap QFF Fast Flow洗脱曲线Fig.2 Elution curve of bacteriocin from
26、 L. plantarum JLA-9 on Hitrap QFF Fast Flow gel2.4 细菌素反相高效液相色谱纯化由Hitrap QFF离子交换层析纯化得到的抑菌活性洗脱组分经浓缩后利用反 相高效液相色谱(RP-HPLC)进一步纯化结果见图3o图3植物乳杆菌JLA-9产细菌素的RP-HPLC图Fig.3 RP-HPLC of bacteriocin produced by L. plantarum JLA-9由图3可知，在保留时间为14.879 min时得到一个对蜡样芽抱杆菌具有抑菌 活性的洗脱组分，将该抑菌活性组分收集后用于下一步的分子量测定分析。2.5 细菌素分子量测定将经R
27、P-HPLC保留时间为14.879 min的抑菌活性组分收集后浓缩，利用基 质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析，测定细菌素 的分子量，结果见图4。由图4可知，出现多个质谱峰，说明样品中仍存在多种 物质，这可能由于前面的分离纯化效果不佳，但是主要质谱峰都是集中在0.9 kD 左右，初步可以判断植物乳杆菌JLA-9产细菌素的分子量约为0.9 kD左右，可 以根据分子量测定结果，进一步选用合适的纯化方法对细菌素进行分离纯化。l.636 ，：一 5Z6H Me. ()s-61-4i. 1rndrsu3cl7O:CI7 MS Raw2)二二:( 一 6国一匚T 6W8
28、S0Z. t-9mc? 98Z.ZS8TI (XN) I 5(N)2 (NM) 2 5(M)3 (MM)图4植物乳杆菌JLA-9所产细菌素的MALDI-ToF质谱图Fig.4 MALDI-TOF MS Ofbacteriocin produced by L. plantarum JLA-92.6细菌素的抑菌活性经RP-HPLC纯化得到的细菌素对常见的一些食源性致病菌及腐败菌均具有 较好的抑制作用。如图5所示。蜡样芽泡杆菌；e：枯草芽抱杆菌；f：肠炎沙门氏菌图5植物乳杆菌JLA-9产细菌素的抑菌活性Fig 5. The antibacterial activity of active bacte
29、riocin from L. plantarum JLA-9植物乳杆菌JLA-9产的细菌素对荧光假单胞菌、大肠杆菌、藤黄微球菌、蜡 样芽抱杆菌菌、枯草芽抱杆菌和肠炎沙门氏菌具有明显的抑制效果。3讨论本研究从东北传统发酵酸菜中分离得到一种细菌素，分子量大约在0.9 kDa 左右，对食品中常见的一些食源性致病菌及腐败菌具有较好的抑制作用。这与一 些已经报道的植物乳杆菌产的细菌素具有相似的抑菌活性，如PkmtariCin 163对 食品中常见的大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，蜡样芽狗杆菌等均具有较好的抑菌作 用，PkmtariCinMG主要对革兰氏阴性食源性致病菌具有较好的抑制作用，但 也能抑制一些革兰氏
30、阳性致病菌如枯草芽抱杆菌等8。到目前为止已经有许多 植物乳杆菌产的细菌素被报道，其分子量一般都在lk5kDa之间，如植物乳杆 菌 ZJOo8 产的 PIantariCin ZJOO8 分子量为 1.3 kDa14,植物乳杆菌 NRIC 149 产的 PIantariCin 149 分子量为 2.2 kDa19,植物乳杆菌 423 产的 PkmtariCin 423 分子量为3.5 kDa20,植物乳杆菌C19产的plantaricin Cl9分子量为3.8 kDa21, 植物乳杆菌510产的plantaricin Y分子量为4.2 kDa22等。本研究获得的细菌素 在分子量在0.9 kDa左右
31、，有可能为一种新的细菌素，以后的研究将对分离纯化 工作进行优化，进一步对该细菌的结构及性质进行深入的研究。本研究在离子交换层析纯化细菌素中，选用pH8.5的TriS-HCI作为缓冲液， 分别以0.1、0.25、0.4、ImOl/L的NaCI进行梯度洗脱，实现较好的分离效果， 获得细菌素的活性峰。一般在离子交换层析中，缓冲液的作用是维持待分离物质 性质的稳定，同时保证待分离物质带上稳定的电荷从而更加容易结合离子交换介 质上，由于不同物质带电荷不同，与交换介质结合能力也不同，通过盐溶液的梯 度洗脱，可以将它们进行有效地分离。目前文献报道中一般多采用磷酸盐或者醋 酸盐作为缓冲液,如ZHU等用Na3P
32、O4和NaCl为洗脱缓冲液对plantaricin ZJ008 进行分离纯化14, BAUER等用Na3PO4和NaCl为洗脱缓冲液分离纯化得到了 Pediocin PD-I 23, Deraz 用 NaAc 和 NaCl 为洗脱缓冲液对 Acidocin D20079 进 行了分离纯化24。还有报道称王辉等采用超纯水和NaCl为洗脱缓冲液分离纯 化得到了植物乳杆菌KLDSI.0391产的细菌素25。一般较少采用水作为离子交 换层析的缓冲液，可能由于这种细菌素具有特殊的性质。本试验采用常用的磷酸盐和醋酸盐作为缓冲液所收集到的洗脱峰几乎没有 洗脱峰，而采用TriS-HCI作为缓冲液收集到的洗脱峰
33、却抑菌活性较强，说明本试 验纯化得到的细菌素与之前报道的细菌素可能具有一些不同的性质，具体原因尚 不清楚，有待对其进行进一步的深入研究。ABSTRACT： The bacteriocin produced byLactobacillusplantarumJLA-9 from fermented Chinese sauerkraut was purified. The cell-free supernatant ofLactobacillusplantarumJLA-9 was precipitated by ammonium sulfate and higher precipitation e
34、fficiency was obtained using 80% ammonium sulfate. Then, the samples were further purified by Sephadex LH-20 gel chromatography and Hitrap QFF ion exchange chromatography. The reverse-phase high-perfbrmance liquid chromatography with C18column was utilized for final purification. The bacteriocin pro
35、duced byLactobacillusplantarumJLA-9 was essential purified to be a single peak by RP-HPLC chromatography. The molecular mass of purified bacteriocin was estimated by MALD1-TOFMS to be approximately 0.9 kDa. The purified bacteriocin showed a high antibacterial activity against common food-borne pathogens and spoilage bacteria.Key words ： Lactobacillusplantarum; bacteriocin; isolation; purification; molecular mass
