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1、保健食品用原料银杏叶The Ginkgo Folium for health foodproducts本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规 则的规定起草。本标准由中国营养保健食品协会归口。本标准起草单位：中国食品药品检定研究院中药民族药检定所、北京中医药大学、中国 中药协会中药质量与安全专业委员会、深圳市药品检验研究院、中国营养保健食品协会保健 食品研发专业委员会。本标准主要起草人：王亚丹、刘越、马双成、魏锋、王淑红、康帅、聂黎行、王莹、程 显隆、汪祺、刘静、杨洋、左甜甜、杨建波、陈佳、荆文光、康荣、石佳、杨洋、关潇澄、 谢耀轩、李君瑶、曾利娜、
2、卢友峰、苏龙、姬海南、王丹、邓少伟。本标准为首次发布。保健食品用原料银杏叶1范围本标准适用于保健食品用原料银杏叶。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。下列文件中所包含的部分条款通过相关标准 的引用儿成为本标准的部分内容。凡是注明日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版本）适用于本文件。GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则GB 2762食品安全国家标准食品中污染物限量GB 2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB 16740食品安全国家标准保健食品GB 2761食品安全
3、国家标准食品中真菌毒素限量中华人民共和国药典一部中华人民共和国药典四部GB 5009.12食品安全国家标准食品中铅的测定GB 5009.11食品安全国家标准食品中总碑及无机碑的测定GB 5009.17食品安全国家标准食品中总汞及有机汞的测定3技术要求3.1 来源银杏叶为银杏科植物银杏Gi成g。历/% L.的干燥叶。秋季叶尚绿时采收，及时干燥。3. 2感官要求应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽黄绿色或浅棕黄色在日光下观察颜色；如断面不易观察，可削平后观察滋味、气味气微，味微苦滋味可取少量直接口尝，或加热水浸泡后尝浸出液：气味可直接嗅闻，或在折断、破碎或搓揉时进行形态本品多皱折或破
4、碎，完整者呈扇形，长372 cm,宽 515cm,上缘呈不规则的波状弯曲，有的中间凹入， 深者可达叶长的4/5。具二叉状平行叶脉，细而密， 光滑无毛，易纵向撕裂。叶基楔形，叶柄长28cm 体轻在日光下观察；长度、宽度及厚度测量时应用亳米刻度尺：质地是指用手折断时的感官感觉3. 3理化指标应符合表2的规定。表2理化指标项目指标检验方法水分，%12.0中华人民共和国药典2020年版四部0832第二法灰分，%10.0中华人民共和国药典2020年版四部 2302方法酸不溶性灰分，%2.0中华人民共和国药典2020年版四部2302方法浸出物（乙醇），%25.0中华人民共和国药典2020年版四部2201热
5、浸法（稀乙醇溶剂）铅(Pb) , (mg/kg)5.0GB 5009.12总碑(As) , (mg/kg)1.0GB 5009.11总汞(Hg) , (mg/kg)0.3GB 5009.17总银杏酸，2.1附录A注：其他未列的污染物限量应符合GB 2762的规定；未列的农药最大残留限量应符合GB 2763及国家有关规定和公告。3. 4标志性成分指标应符合表3的规定。表3标志性成分指标项目指标检验方法总黄酮醇苻含量，% （以干燥品计）0.40附录B砧类内酯含量，% （以干燥品计）0.25附录C3.5真菌毒素限量真菌毒素限量应符合GB 2761中相应类属食品的规定和（或）有关规定。4其他保健食品所
6、用原料为本品的炮制加工品，其炮制加工前的原料应符合本标准。炮制如为 净制、切制的，除另有规定外，相关项目应符合本标准。炮制如为其他炮制工艺的，炮制加 工品应符合相应标准的规定。附录A（规范性附录）总银杏酸检验方法A. 1 一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB“ 6682规定的 三级水。实验中所用的溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A. 2方法提要本品经甲醉超声提取后，采用反相高效液相色谱法测定，通过总银杏酸对照品进行色谱 峰定位，计算供试品中与总银杏酸对照品相应色谱峰（5个色谱峰）的总峰面积，以白果新 酸对照品外标法计算总银杏酸的含量。总银杏酸为银杏叶
7、中6-烷基取代的水杨酸类衍生物的总和，主要包括白果新酸（C13: 0）、白果酸（CI5:1）、十七烷二烯银杏酸（CI7:2）、氢化白果酸（C15:0）和十七烷 一烯银杏酸（C17:l）等5种，其中括号内分别表示烷基侧链长度和双键数目。A.3仪器A. 3. 1分析天平：感量为0.0Img和0.0001 g。A. 3.2超声波清洗仪。A. 3.3高效液相色谱仪：配有紫外检测器。A. 4试剂和耗材A. 4.1甲醇。A. 4.2乙精：色谱纯。A. 4.3三氟乙酸。A. 4. 4 水。A. 4.5 0.45 m微孔滤膜（有机相）。A. 4. 6对照品总银杏酸对照品（用于色谱峰定位,购自中国食品药品检定研
8、究院）或其他等同对照品。白果新酸对照品（用于总银杏酸测定，购自中国食品药品检定研究院）或其他等同对照 品，其CAS号、分子式和相对分子量见表A.1。表A.1化学对照品（标准品）信息中文名称英文名称CAS号分子式相对分子量白果新酸Ginkgoneolic acid20261-38-5C20H32O3320.47A.5色谱条件及系统适用性A. 5.1色谱条件色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为150 mm,柱内径为4.6 mm,粒径为 5 m）；流动相：A相：含0.1%三氟乙酸乙月青溶液；B相：含0.1%三氟乙酸水溶液。梯度洗脱，梯度程序见表A.2；表A.2梯度条件时间minA相/%B相
9、/%075253090IO359010367525457525检测波长：310 nm；进样量：20 L;流速：LomLZmin。A. 5.2系统适用性理论板数按白果新酸峰计算应不低于4000oA.6操作方法A. 6.1对照品溶液的制备取白果新酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每ImL含0.17 mg的溶液，备用。另取总银杏酸对照品适量，加甲醇制成每ImL含0.42 mg的溶液，作为定位用对照品 溶液，备用。A. 6. 2供试品溶液的制备取供试品粉碎，取粉末约LO g,精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 20 mL,称定重量，超声处理45分钟，放冷，用甲静补足减失的重量，摇匀，先
10、用滤纸滤过，续滤液再经045 m滤膜（A.4.5）漉过，取续滤液，备用。A. 6. 3供试品溶液的测定照高效液相色谱法（中华人民共和国药典2020年版四部0512）试验，分别精密吸 取供试品溶液、白果新酸对照品溶液及总银杏酸对照品溶液各10 L,注入高效液相色谱仪， 计算供试品溶液中与总银杏酸对照品相应色谱峰（5个色谱峰）的总峰面积，以白果新酸对 照品外标法计算总银杏酸的含量。总银杏酸对照品的液相色谱图见图AJoI.白果新酸（CI3:0）； 2.白果酸（C15: 1）； 3.十七烷二烯银杏酸（C17: 2）； 4.氢化白果酸（C15 : 0）：5.十七烷一烯银杏酸（C17: 1）图A.1总银杏
11、酸对照品的液相色谱图A. 7测定结果的计算A. 7.1计算公式银杏叶中总银杏酸的含量以质量分数计，数值以表示，按公式（A.1）和（A.2）计算:_ axcrvARm103X 100%(A.1)(A.2)式中：:供试品中与总银杏酸对照品相应色谱峰（5个色谱峰）的总峰面积;4：供试品中与总银杏酸对照品相应各色谱峰的峰面积；W：供试品中总银杏酸的质量分数（）;:白果新酸对照品溶液的峰面积：CR：白果新酸对照品溶液的浓度（mgmL）；供试品的称样量（g）;V：供试品的稀释体积（mL）。A. 7.2重复性每个供试品取两个平行样进行测定，以算数平均值为测定结果，小数点后保留2位。在重复条件下两次独立测定的
12、结果绝对差值不得超过算数平均值的10%o附录B(规范性附录)标志性成分总黄酮醇昔检验方法B. 1 一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB 6682规定的 三级水。实验中所用的溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。C. 2方法提要本品经三氯甲烷加热回流提取除去脂溶性杂质后，采用甲醇回流提取黄酮醇昔，经酸水 解后形成昔元，采用反相高效液相色谱法测定，以外标法分别测定三种昔元糊皮素、山奈酚 和异鼠李素的含量，再换算成总黄酮醇昔的含量。总黄酮醇昔为银杏叶中以黄酮醇类成分榔皮素(quercetin)、山奈酚(kaempferol)和 异鼠李素(isorhamnetin
13、)为昔元，与多种糖形成的昔类化合物的总和。B.3仪器B. 3.1分析天平：感量为0.0Img和0.0001 g。B. 3.2索氏提取器。B. 3.3高效液相色谱仪：配有紫外检测器。B. 4试剂和耗材B. 4.1三氯甲烷。B. 4.2甲醇。B. 4.3 25%盐酸溶液：量取盐酸(质量分数为36%38%) 58.4 mL,加水稀释至100 mL, 摇匀，即得。B. 4.4甲醇：色谱纯。B. 4.5磷酸。B. 4.6 水。B. 4.7 0.45 m微孔滤膜(有机相)。8. 4. 8对照品榔皮素对照品、山奈酚对照品和异鼠李素对照品（均购自中国食品药品检定研究院）或 其他等同对照品，其CAS号、分子式和
14、相对分子量见表B.1。表B.1化学对照品（标准品）信息中文名称英文名称CAS号分子式相对分子量棚皮素Quercetin117-39-5CisHioO7302.24山奈酚Kaempferol520-18-3CisHioOe286.24异鼠李素Isorhamnetin480-19-3C6H2O?316.261 .5色谱条件及系统适用性8 . 5.1色谱条件色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50,v/v）,等度洗脱;检测波长：360 nm；进样量：10L;流速：1.0mLmin0B. 5.2系统适用性理论板数按描皮素峰计算应不低于25（X）oB. 6操作方
15、法B. 6.1对照品溶液的制备取椭皮素对照品、山奈酚对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL 含描皮素0.03 mg、山奈酚0.03 mg、异鼠李素0.02 mg的混合溶液，摇匀，备用。B. 6. 2供试品溶液的制备取供试品粉碎，取粉末约1g,精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小 时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干，加甲醇回流提取4小时，提取液蒸干，残渣加甲醇-25% 盐酸溶液（4 ： 1）混合溶液25 mL,加热回流30分钟，放冷，转移至50 mL量瓶中，加甲 醇至刻度，摇匀，经0.45 m滤膜（B.4.7）滤过，取续滤液，备用。B. 6. 3供试品溶液的测定照高效液
16、相色谱法（中华人民共和国药典2020年版四部0512）试验，分别精密吸 取对照品溶液与供试品溶液各10 L,注入高效液相色谱仪测定，按外标法分别计算试样中 榔皮素、山奈酚和异鼠李素的含量，再换算成总黄酮醇甘的含量。B. 7测定结果的计算C. 7.1计算公式银杏叶中总黄酮醉苗含量以质量分数计，数值以表示，按公式（B.1）和（B2）计算:Wi=AiCRiV Afiim103X 100%(B.1)W =Wi 2.51(B.2)式中:叱：供试品中各待测昔元（榔皮素、山奈酚和异鼠李素）的质量分数（）；i:供试品中各待测昔元的峰面积；i:对照品溶液中各待测昔元的峰面积；CRi：对照品溶液中各待测昔元的浓度
17、（mgmL）；机：供试品的称样量（g）;V：供试品的稀释体积（mL）；W：供试品中总黄酮醇昔的质量分数（）。A. 7. 2重复性每个供试品取两个平行样进行测定，以算数平均值为测定结果，小数点后保留2位。在重复条件下两次独立测定的结果绝对差值不得超过算数平均值的10%o附录C(规范性附录)标志性成分菇类内酯检验方法C. 1 一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB“ 6682规定的 三级水。实验中所用的溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。C. 2方法提要本品经石油酸脱脂后，采用甲醇提取荔类内酯，再经酸性氧化铝柱色谱去除杂质，用甲 醇水混合溶液再次超声提取得到目
18、标物，采用反相高效液相色谱法测定，以外标两点法对 数方程分别计算银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的含量，供试品中菇类 内酯的含量以上述4个成分的总含量计。菇类内酯为银杏叶中二菇内酯类成分和倍半葩内酯类成分的总和，其中二菇内酯类主 要包括银杏内酯A(ginkgOlideA)、银杏内酯B(ginkgolide B)和银杏内酯C(ginkgolide C), 倍半菇内酯类主要指白果内酯Cbilobalide) oC.3仪器C. 3. 1分析天平：感量为0.01 mg和0.0001 goC. 3.2索氏提取器。C. 3. 3恒温水浴锅。D. 3.4鼓风干燥箱。E. 3.5超声波清洗仪。C.
19、 3. 6高效液相色谱仪：配有蒸发光散射检测器。C. 4试剂和耗材C. 4. 1 石油酸(30-60C) oC. 4.2甲醇。C. 4.3甲醇：色谱纯。C. 4.4四氢吠喃：色谱纯。C. 4.6酸性氧化铝（200-300目）。C. 4.7 0.45 m微孔滤膜（有机相）。C. 4.8对照品银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品和白果内酯对照品（均购 自中国食品药品检定研究院）或其他等同对照品,其CAS号、分子式和相对分子量见表C.1。表C.1化学对照品（标准品）信息中文名称英文名称CAS号分子式相对分子量银杏内酯AGinkgolide A15291-75-5C20H24O9408
20、.40银杏内酯BGinkgolide B15291-77-7C20H24O10424.40银杏内酯CGinkgolide C15291-76-6C20H24O440.40白果内酯Bilobalide33570-04-6CisHisOs326.30C. 5色谱条件及系统适用性C.5. 1色谱条件色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：流动相：甲醇四氢相喃-水（25 ： 10 ： 65,vvv）,等度洗脱;检测器：蒸发光散射检测器；进样量：对照品溶液10 pL、20 L;供试品溶液10 20 L;流速：LOmLZmiruC. 5.2系统适用性理论板数按白果内酯峰计算应不低于3000oC. 6操作方
21、法C. 6.1对照品溶液的制备取银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品、白果内酯对照品适量， 精密称定，加50%甲醇制成每ImL含银杏内酯A0.18 mg、银杏内酯B 0.08 mg、银杏内酯 CO.10 mg、白果内酯0.2Omg的混合溶液，摇匀，备用。C. 6. 2供试品溶液的制备取供试品粉碎，取粉末约15 g,精密称定，置索氏提取器中，加石油酸（3060C）在 70C水浴上回流提取1小时，弃去石油酸（3060C）液，药渣和滤纸挥尽石油酸，置于60 鼓风干燥箱中烘干，再加甲醉回流提取6小时，提取液蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至 IOmL量瓶中，超声处理（功率300 W,频率5
22、0 kHz） 30分钟，取出，放冷，加甲静至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液5 mL,加入酸性氧化铝柱（200-300目，3 g,内径为1 cm, 用甲醇湿法装柱）上，用甲醇25mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣用甲醇5mL 分次转移至IOmL量瓶中，加水约4.5 mL,超声处理（功率300 W,频率50 kHz） 30分钟， 取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45 m滤膜（C.4.7）滤过，取续滤液，备用。C. 6. 3样品溶液的测定照高效液相色谱法（中华人民共和国药典2020年版四部0512）试验，分别精密吸 取对照品溶液10L 20 L,供试品溶液10 20 L,注入高效液相色
23、谱仪测定，分别以对 照品溶液中各待测成分的进样质量（即浓度与进样体积的乘积）的以10为底的对数值为横 坐标，以峰面积的以10为底的对数值为纵坐标，采用最小二乘回归分析法建立回归方程， 根据供试品溶液中各待测成分的峰面积以10为底的对数值由回归方程计算得到供试品中银 杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的含量，菇类内酯的含量以上述四个成分 的总量计。C. 7测定结果的计算C. 7.1计算公式银杏叶中菇类内酯的含量以质量分数计，数值以表示，按公式（Cl）和（C.2）计算：WiV2m2103 100%(BJ)W = Wi (B.2)式中：%：供试品中各待测成分（银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯）的质 量分数（）:mll:由回归方程算得的供试品中各待测成分的进样质量（g）；V1:供试品的稀释体积（mL）；K2:供试品溶液的进样体积（L）；m2：供试品的称样量（g）；供试品中葩类内酯的质量分数（）。C. 7.2重复性每个供试品取两个平行样进行测定，以算数平均值为测定结果，小数点后保留2位。在重复条件下两次独立测定的结果绝对差值不得超过算数平均值的10%o
