细胞培养实验用品准备方案.docx

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1、细胞培养实验用品准备方案1 .种类:1.1. 细胞培养实验用品均为无菌,除了玻璃容器与PaSteUrPiPet外,其它均为塑料无菌制品。1.2. TC级培养盘表面均有coating高分子物质以让细胞吸附,培养容器种类有Tflask,plates,dishes,rollerbottle依实验需要使用。1.3. plasticsterilepipet:1ml,2ml,5ml,10ml,25ml1.4. 塑料离心管:15ml,50ml,均有2种不同材质,*polypropylene(PP)为不透明材质,polystyrene(PS)为透明材质,可依实验需要而选择适合材质之离心管。1.5. glass

2、pastuerpipet:9inch,用以抽掉废弃培养液等。1.6. 玻璃血清瓶(PyreXorDuranglassware):100ml,250ml,500ml,1000ml2 .清洗:2.1. 新购玻璃血清瓶先以0.10.05NHCl浸泡数小时,洗净后才开始使用。2.2. 用过之玻璃血清瓶,以高压蒸汽灭菌,洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净,勿加清洁剂清洗。3 .灭菌:3.1. 实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖,高压蒸汽灭菌121C,151b,20分钟,置于oven中烘干O3.2. 实验用玻璃PaSteUrPiPet以干热灭菌170,4小时。3.3. 液体或是固体废弃物可用10%hyp

3、ochloride溶液(次氯酸,即漂白水)或是蒸汽高压灭菌121,151b,20分钟处理。无菌室的灭菌:1 .定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3%。来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。2 .CO2孵箱(培养箱)灭菌:先用3%。新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射3 .实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4 .实验后灭菌:用75%酒精(3%。新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。实验人员的无菌准备:1 .肥皂洗手。2 .穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3 .用75%酒

4、精棉球擦净双手。无菌操作的演示:1 .凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面2 .靠近酒精灯火焰操作。3 .器皿使用前必须过火灭菌4 .继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。5 .各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。6 .吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。器械的清洗和消毒玻璃器械洗消:一、新的玻璃器皿的洗消:1 .自来水刷洗,除去灰尘。2 .烘干、泡盐酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、碎等物。3 .刷洗、烘干:12小时后立即用自来水冲洗,再用洗

5、涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘干。4 .泡酸、清洗:用清洁液(重格酸钾120g:浓硫酸200ml:蒸偏水IOOOmD浸泡12小时,然后从酸缸内捞出器JnI用自来水冲洗15次,最后蒸馀水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。5 .烘干、包装:洗干净后先烘干,然后用牛皮纸(油光纸)包装。6 .高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子,打开开关和安全阀,当蒸气成直线上升时,关闭安全阀,当指针指向15磅时,维持20-30分钟。7 .高压消毒后烘干二、旧的玻璃器皿的洗消:1 .刷洗、烘干:使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中,泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净,然后烘干。2 .泡酸、

6、清洗:烘干后泡入清洁液(酸液),12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗),再用蒸馈水冲洗3次。3 .烘干、包装:洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装,以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。4 .高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内,盖好盖子,打开开关和安全阀,随着温度的上升安全阀冒出蒸气,当蒸气成直线冒出35分钟后,关闭安全阀,气压表指数随之上升,当指针指向15磅时,调节电开关维持20-30分钟即可。(玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上)5 .烘干备用:因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿,所以要放入烤箱内烘干备用。金属器械洗消:金属器InI不能泡酸,

7、洗消时可先用洗涤剂刷洗,后用自来水冲干净,然后用75%酒精擦拭,再用自来水,然后用蒸偏水冲洗,再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压(30分钟)消毒,再烘干备用。橡胶和塑料:橡胶和制品通常处理方法是:先用洗涤剂洗刷干净,再分别用自来水和蒸储水冲干净,再用烤箱烘干,然后根据不同品质进行如下的处理程序:1 .针式滤器帽不能泡酸液,用NaOH泡6-12小时,或者煮沸20分钟,在包装之前要装好滤膜两张,安装滤膜时注意光面朝上(凹向上),然后将螺旋稍微拧松一些,放入铝盒中在高压锅内15磅30分钟消毒,再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。2 .胶塞烘干后用2%氢氧化

8、钠溶液煮沸30分钟(用过的胶塞只要用沸水处理30分钟),自来水洗净,烘干。然后再泡入盐酸液30分钟,再用自来水,蒸馈水,三蒸水洗净,烘干。最后装入铝盒内高压消毒,烘干备用。3 .胶帽,离心管帽烘干后只能在2%氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时(切记时间不能过长),自来水洗净,烘干。然后再泡入盐酸液30分钟,再用自来水,蒸播水,三蒸水洗净,烘干。最后装入铝盒内高压消毒,烘干备用。4 .胶头可用75%酒精浸泡5分钟,然后紫外照射后使用即可。5 .塑料培养瓶,培养板,冻存管:6 .其他消毒方法:有的物品既不能干燥消毒,又不能蒸气消毒,可用70%酒精浸泡消毒。塑料培养皿打开盖子,放在超净台台面上,直接暴露

9、在紫外线下消毒。也可用氧化乙烯消毒塑料制品,消毒后需要用23周时间洗除残留的氧化乙烯。用20000-IOOOOOrad的r射线消毒塑料制品效果最好。为了防止清洗器材已消毒与末消毒发生混淆,可在纸包装后,用密写墨水作好标记。其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水,在包装纸上作一记号,平时这种墨水不带痕迹,一经高温,即出现字迹,从而可以判定它们是否消毒。密写墨水的配制:氯化钻(CoCI26H2o)2g,30%盐酸10ml,蒸储水88ml0注意事项:1 .严格执行高压锅的操作规程:高压消毒时,先检查锅内是否有蒸僧水,以防高压时烧干,水不能过多因为其将使空气流畅受阻,会降低高压消毒效果。检查安全阀是否通畅,以防高压时爆炸。2 .安装滤膜时注意光而朝上:注意滤膜光滑一面是正面,要朝上,否则起不到过滤的作用。3 .注意人体的防护和器皿的完全浸泡:A.泡酸时要戴耐酸手套,防止酸液溅起伤害人体。B.从酸缸内捞取器皿时防止酸液溅到地面,会腐蚀地面。C.器皿浸入酸液中要完全,不能留有气泡,以防止泡酸不彻底。

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