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1、1.2基因工程的基本操作程序、选择题I.（2022.沈阳高二检测）基因工程技术也称为DNA重组技术，其实施必须具备的4个必要条件是OA.目的基因、限制酶、载体、受体细胞B.工具酶、目的基因、载体、受体细胞C,模板DNAmRNA质粒、受体细胞D.重组DNARN咪合酶、PM制酶、DNAl接酶解析：选B。基因工程的基本工具是限制酶、DNA连接酶和载体，前两者统称为工具酶；在实际操作中，载体上插入目的基因形成重组载体，然后导入受体细胞。2. （2022-淮安高二期中）下图中甲、乙表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法，以下说法中错误的是O某细药的DN.A某斑:献的DN*I口”-MInUjH.1-J盆云
2、im11m11l1.1U.U1nM的基囚w,E,u乙A.甲方法可建立该细菌的基因组文库B.乙方法可建立该细菌的CDNA文库C.甲方法要以脱氧核廿酸为原料D.乙方法需要逆转录醉参预解析：选CO甲方法是以细菌中的DNA为基础，用限制酶进行切割，它包括了细菌所有的基因，可以建立基因组文库，并且可以从中选出所需的目的基因，不需要模板和原料。而乙方法是用逆转录的方法人工合成目的基因，它只能得到生物的部份基因，基因中惟独编码区，所以组成的是该细菌的CDNA文库。3. 在基因工程中，可依据受体细胞的类型及其生理特性来选择合适的载体，既能高效地携带目的基因进入受体细胞，又能方便地进行检测。已知有以下几类含有不
3、同标记基因的质粒，不可作为侵入大肠杆菌的载体的是（已知青霉素可杀死细菌，四环素不能杀死大肠杆答案：b抗四环家基因4. （2022郑州一中高二期中）我国上海研究所合成为了一种具有镇痛作用而又不会使病人上癌的药物一一脑啡吠多糖（类似人体中的糖蛋白）。如要米用基因工程和发酵技术让微生A.C.T4噬菌体答案：D物来生产有生物活性的脑啡吠多糖，应选哪种微生物为受体细胞大肠杆菌B.大肠杆菌质粒D.酵母菌5. （2022.天津四十七中期中）下图为基因表达载体的模式图，下列有关说法错误的是B.任何基因表达载体的构建都是一样的，没有差别构建基因表达载体需要用到限制酶和DNAl接酶C.图中启动子位于基因的首端，是
4、RNA聚合酶识别和结合的部位D,抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因解析：选Bo构建基因表达载体需要用到限制酶和DNA连接酶，A正确。用不同种类的载体构建基因表达载体时处理方法是有差别的，B错误。启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，C正确。抗生素抗性基因的作用就是作为标记基因，用于检测受体细胞中是否导入了目的基因，D正确。6. （2022.河北武邑中学高二期中）据图分析，下列有关基因工程的说法，不正确的是N动子aJ险I觎Il硼IIIfJ三I转量方向A. 标记基内用限制酶I、n同时切割质粒（假设切割彻底），会获一得3种长度的DNM段B.用限制
5、醐I、n切割质粒和目的基因比只用限制施I更符合要求C.与启动子结合的应该是RNA聚合酶D,能够检测到标记基因表达产物的受体细胞中，不一定会有目的基因的表达产物答案：A7 .利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需的产品。下列选项中能说明目的基因完成表达的是OA.棉花细胞中检测到载体上的标记基因8 .山羊乳腺细胞中检测到人生长激素基因C.大肠杆菌中检测到人胰岛素基因的mRNAD酵母菌细胞中提取到人的干扰素解析：选DA、B、C三项都不能说明目的基因完成表达。人的干扰素基因导入酵母菌中，酵母菌合成为了人的干扰素，说明目的基因完成表达。8 .（2022-河南郑州一中高二期中）下图为利用生物技术获得
6、生物新品种的过程，下列有关说法错误的是O（悔疏含白的耳物体细削WWD的如L她制储：I词*I.】A号地理找七E招引物造合A.A-B过程中用到的原料有4种，加入的引物有2种BA-B过程利用了DNAM制原理，需要使用耐高温的DNA聚合酶CB-C为转基因绵羊的哺育过程，常选用的受体细胞是卵母细胞DB-D为转基因植物的哺育过程，其中过程常用的方法是农杆菌转化法答案：C的是（）.克I隆II的某囚-导入毕赤酵母南I-筛选南种I甲醉诱导抗菌肽表达j-分函纯化卜I功能研商9 .抗菌肽对治疗癌症有二定的作用！下齿表示抗菌肽商合成过程。下列相关说法正确A.用PC叱术克隆目的基因不需要DNAS旋酶B.基因表达载体包含
7、起始密码子和终止密码子C.用显微注射法导入基因表达载体D.筛选菌种时用基因探针检测相关蛋白质解析：选AOPCR技术中采用高温变性使DNAS旋，因此用PCR八术克隆目的基因不需要DNAB旋的，A正确；基因表达载体包含启动子和终止子，而起始密码子和终止密码子在mRNAh,B错误；将基因表达载体导入酵母菌细胞时应用感受态细胞法，C错误；筛选菌种时用基因探针检测相关基因或者mRNA不能用基因探针检测蛋白质，D错误。10.（2022*吉林一中月考）下图为科学家通过基因工程哺育抗虫棉时，从苏云金芽抱杆菌中提取抗虫基因“放入”棉花细胞中与棉花的DNA份子结合起来而发挥作用的过程示意图。以下相关说法正确的是(
8、)H的基以-1Q桦粒花细曲一抗虫棉711IIrBRJfJfcMftSIMA.图中I是质粒，步骤常需用到限制做和DNA聚合酶B.图中n是含目白八基因的重组Ti质粒，步骤是将重组质粒导入棉花细胞C.图中出是农杆菌，通过步骤将目的基因导入植物细胞D.剔除哺育成功的抗虫棉体内的四环素抗性基因会影响抗虫基因的表达解析：选Col为质粒，步骤为基因表达载体的构建，常需用到限制酶和DNA连接酶，A错误；图中步骤是将重组质粒导入农杆菌细胞，B错误；图中步骤是将目的基因导入植物细胞，C正确；基因的表达具有独立性，剔除抗虫棉体内的四环素抗性基因不影响抗虫基因的表达，D错误。二、非选择题II.（高考全国卷D某一质粒载
9、体如图所示，外源DNA插入到Am渡TeIr中会导致相应的基因失活（AmP表示氨茉青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BarHl酶切后，与用BarHI两切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：*:*、-、-痴用HI复制Ik点QW质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有（答出两点即可），而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。（2）如果用含有氨
10、茉青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是:并且和的细胞也是不能区分的，其原因息在上述筛选的基础上若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有的固体母笑苴J口乔9。（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自解析：（1）作为运载体的质粒上应有一个至多个限制前切割位点，在细胞中能够自我复制，且含有特殊的标记基因。（2）未被转化的大肠杆菌和仅含环状目的基因的大肠杆菌中均未导入质粒载体，而质粒上含有氨茉青假素抗性基因，因此这样的大肠杆菌在含有如茉青霉素的培养基中不能生长。含有质粒载
11、体和含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌中都含有氨茉青霉素抗性基因，二者在含有氨茉青春素的培养基中都能生长，因此无法区分二者。根据题图，用Ba制I切割质粒后将四环素抗性基因破坏，因此可将经氨节青霉素培养基筛选出的菌落置于含有四环素的培养基上再次筛选，能在含四环素培养基上生存的是含有质粒载体的大肠杆菌，不能生存的是含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。（3）噬菌体为病毒，经改造后作为载体时，其DNAM制所需原料来自受体细胞。答案：（1）能自我复制、具有标记基因（2）二者均不含有氨茉青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长含有质粒载体含有插入了目的基因的重组质粒（或者答含有重组质粒）二者均含有氨茉青
12、霉素抗性基因，在该培养基上均能生长四环素（3）受体细胞12. （2022-湖北七市教科研协作体联考）人血清白蛋白（HSA）是血浆中含量最丰富的蛋白质，在维持血浆渗透压、抗凝血等方面起着重要作用，具有重要的医用价值。下图是用基.ttltis水梢受水耦肺乳细胞衣叶围体加剧中的ISA因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。（1）为获取HSA基因，首先要提取人血细胞中的mRNA利用法合成CDNA再利用技术进行快速扩增，在这一过程中，需要有一段已知目的基因的核廿酸序列，以便根据这一序列合成. 2）构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体时，需要选择水稻胚乳细胞启动子，而不能选择其他物种和组织细
13、胞的启动子，原因可能是.（3）在利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，为了吸引农杆菌移向水稻受体细胞，需添加物质。（4）选用大肠杆菌作为受体细胞的优点有（答出两点即可）。但相比于水稻胚乳细胞，利用大肠杆菌获得的rHSA也有一些缺点，请从生物膜系统的角度进行分析 5）利用上述方法获得的rHSA不能直接用于临床医疗，你猜测的原因是答案：（1）反转录PCR引物 2）启动子具有（物种及组织）特异性（3）酚类（4）繁殖快；单细胞：遗传物质少（答出两点即可）大肠杆菌没有生物膜系统（或者内质网和高尔基体），不能对rHSA进行深加工 5）rHSA可能没有生物活性或者功能性较差或者rHSA可能有安全隐患（答案合理
14、即可）13. （2022-新疆四中高二期末）下图是从酵母菌中获取某植物需要的控制某种酶合成的基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题:何也 史库志”的单因*1挽发U的基国1(1)图中CDNA文库(填“大于”过程提取的DNA需要为在短期内大量获得目的基因，可用Iii府由I mA捱取RN4“小于”或者“等于基因组文库。的切割，B过程是扩增的方法，其原理是TDNAC f H 的某工隼 因的前排 国Il技术进行否在此植物体内稳定遗传的关键是(4)目的基因获取之后，需要进行(5)将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是检测。答案：小于限制酶逆转剥3)PCR技术DNA复制基因表达载体的构农杆
15、菌转化法目的基因是否整合到植物细胞的染色体上DNA份子杂交KV牛成杀虫基因含杀虫基因含重组质1粒(ryl,的重打1质一的土壤农杆衲农杆菌Ti-置.1含杀虫基一”华恢1因的水稻当号”抗虫细胞水稻14. (2022-广东中山高二期末)下图甲表示我国自主研发的转基因抗虫水稻”华恢的主要哺育流程，请据图回答下列问题：殖利产物捽制合的唯次限制1,网环籍筑性藏一三1加研产粉偃滋活霰醒-蠲冠内维持稳定和表达的过程叫做（填标号）是转基因TDNA牌移初用原点“华恢I号”的哺育过程应用的主要生物技术有（3）构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有ToNA语指把目的基因整合到受体细胞（植株细胞）的
16、上。（4）图乙是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（部份基因及部份限制做作用位点），组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造，据图分析：人工改造质粒时，要使抗虫基因表达，还应插入，其作用是人工改造质粒时，先用限制酶I处理，可以去除质粒上的基因和基因（填上图质粒上的基因名称），保证重组质粒进入水稻细胞后不会促进细胞的分裂和生长：然后再用限制酶n分别切割经过改造的理想质粒和带有抗虫基因的DNA份子，并构成重组Ti质粒，那末成功导入抗虫基因的水稻胚细胞将不能在含（填抗生素名称）的培养基上生长。解析：（1）杀虫基因通过S，最终在宿主细胞内维持稳定和表达的过程叫做转化：其中过程表示基因表达载体的构建，这是转
17、基因抗虫水稻的核心步骤，需要的工具酶是限制性核酸内切酶（限制施）、DNA连接酶。（2）分析图解可知，“华恢I号”的哺育过程应用的主要生物技术有基因工程技术（转基因技术）、植物组织培养技术。（3）构建重组质粒时，常用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上具有TDN它能把目的基因整合到受体细胞（植株细胞）的染色体DNA上。（4）启动子是一段特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNAm合酶识别和结合的部位，有了它才干驱动基因转录出mRNA最终获得所需要的蛋白质。从图中看出，Ims基因能够编码口引味乙酸，Unr基因能够编码细胞分裂素，这两种激素能够促进植物的生长。因这人工改造时用限制酶I处理，其目的之一是除去或者破坏质粒上的tmr、Ug保证TDNA入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长：此外惟独一个插入位点，也有利于目的基因（或者外源DNA）确插入。答案：（1）转化限制性核酸内切酶（限制酶）DNA连接酶（2基因工程技术（转基因技术）植物组织培养技术（3）染色体DNA（4）启动子为RNA聚合的提供识别和结合的部位，驱动转录Imslmr四环素
