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1、Rh(D)血型定型标准操作程序【项目名称】Rh(D)血型实验用途】Rh(D)血型常规检测【实验原理】根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分Rh(D)阳性和Rh(D)阴性【样本种类】红细胞抗凝或不抗凝样本，被检者无需特殊准备【仪器和材料】仪器：无特殊专用仪器材料：Rh(D)(IgM)血型定型试剂试剂主要组成成份：抗D(IgM)单克隆细胞株培养上清液，NaCh磷酸盐缓冲液等试剂稳定性：原装试剂在28。C避光保存，有效期24个月。如果长时间储存在高温或反复冻融会使试剂失去活性试剂性能指标：抗D(IgM)效价21:64(ccDeeO型)注意事项：、本试剂含有O.1%WV叠氮钠，如果摄入会中毒；、
2、本品如出现浑浊则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知Rh(D)阴性、Rh(D)阳性红细胞检查结果是否符合，以防制品污染、变质失效，而造成鉴定错误。【试验方法】1平板法(玻片法)、加1滴抗D试剂于玻片上；、再加1滴35-45%的被检红细胞悬液。该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞；、在圆形地玻片区域中混匀，（直径均为20mm大小），前后缓慢摇晃玻片。2分钟左右肉眼判断结果。不要将试剂的干燥与凝集相混淆;、如果呈阴性，需用试管法重做一遍试验。2 试管法、加1滴抗D试剂于一支预先标记好的试管中（75X12m或75X10mm）；、再加一滴约3-5%的被检红细胞悬液于
3、试管中。混匀；、离心，速度和时间可选择以下二种之一：a）转速IOOOrpm,时间1分钟；b）转速340OrPnb时间15秒；、检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来；、观察凝集状况，并立即记录结果。必要时可借助显微镜；、若是阴性结果，需在37。C孵有15-30分钟，然后再离心观察结果。结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。3 微量板法（U型板）、加一滴抗D试剂U型底的微孔中；、再在微孔中加一滴约3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中；、用机械的方法将U型板混匀；、用板式离心机离心：2000rpm,时间为30秒。不同的离心机、不同的微量
4、板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液；、检测溶血情况（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）；、结果判断：用机械振荡U型板，再悬浮细胞，根据悬浮情况来判断凝集。阳性反应，出现红细胞凝集，而阴性反应则在微孔中会出现均匀细胞悬液；、可用肉眼和自动化仪器判读结果；、如果呈阴性，需用试管法重做一遍试验。【对试验结果的解释】阳性反应：出现红细胞凝集，为Rh(D)阳性。阴性反应：红细胞不出现凝集，为Rh(D)阴性。【该试验方法的局限性】本试剂不能凝集CategoryK细胞，对于阴性和弱阳性结果，请按有关安全输血规范进行确认试验，必要时送血型参比实验室进行确认。
