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1、金黄色葡萄球菌的相关表型试验方法生长曲线的测定（1）从37培育16-20小时的新奇平板中挑取一个单菌落，接种至含有1mlTSB的Ioml培育管中。于37振荡培育（转速220RPM）过夜。（2）1:100将菌转接入含有50mlTSB,MH或PN培育基的250ml烧瓶中,37震荡培育（转速220RPM）0（3）每小时测量各瓶OD600数值，至细菌进入稳定期数值基本不再转变（约12小时）。2.2.5.2自溶试验（1）从37培育1620小时的新奇平板中挑取单菌落，接种至TSB培育基中，于37C振荡培育至指数中期。（2）离心IOmin,回收细胞。（3）用PBS洗细胞，重复三次。（4）将细胞重悬于等量含有
2、0.05%（WV）TritonX-IOO的Tris-HCI（PH7.5）缓冲液中。（5）将细胞重悬液于30振荡培育（转速220RPM）（6）从测量零时开头，每隔30min测量OD600的值，直到OD值降到初始值的一半以下。1.1.1.1 物膜试验（1）从37C培育16-20小时的新奇平板中挑取单菌落，接种至含有1mlTSB的IOml培育管中。于37七振荡培育（转速220RPM）过夜。（2）将过夜培育的金葡菌依据1:100的接种量接种至新奇TSB培育基，混匀。（3）将混合接种物分装至96孔板（CoStar3599）,每孔200国或者24孔板（Costar3524）,每孔1000H在37恒温箱静置
3、培育。（4）培育肯定时间后，取出孔板，弃掉上清，并用水轻柔地洗孔板三次。（5）每孔加入IOOral（96孔板）或500Hl（24孔板）结晶紫染色液，常温下静置15min染色。（6）弃掉结晶紫染色液，用水轻柔地洗孔板三次，吹干。（7）拍照，用酶标仪检测OD560度数。2.2.5.4 alpha溶血素检测（1）从37C培育16-20小时的新奇平板中挑取单菌落，接种至含有1mlTSB的IOml培育管中。于37七振荡培育（转速220RPM）过夜。（2）测量OD600并将不同的菌株调整至OD600全都。（3）在羊血平板上分别滴上1E金葡菌培育物，在37恒温箱静置培育24小时。（4）观看菌落四周血细胞被溶
4、解后形成的透亮环，拍照。2.2.5.5 胞外蛋白酶试验（1）从37培育16-20小时的新奇平板中挑取单菌落，接种至含有1mlTSB的IOml培育管中。于37振荡培育（转速220RPM）过夜。（2）测量OD600并将不同的菌株调整至OD600全都。（3）在牛奶平板上分别滴上1E金葡菌培育物，在37C恒温箱静置培育24小时。（4）观看菌落四周牛奶蛋白被溶解后形成的透亮环，拍照。2.2.5.6 万占霉素敏感性试验平板试验：（1）从37培育16-20小时的新奇平板中挑取单菌落，接种至含有1mlTSB的IOml培育管中。于37振荡培育（转速220RPM）过夜。（2）测量OD600并调整至CFU约107个
5、/ml（约OD600=0.05）。（3） 1:10梯度稀释，并分别涂布置含有不同浓度万古霉素的MH平板。（4） 37恒温箱静置培育24小时。（5）观看并计数。液体试验：（1）从37C培育16-20小时的新奇平板中挑取单菌落，接种至含有1mlTSB的IOml培育管中。于37七振荡培育（转速220RPM）过夜。（2）测量OD600并调整接种至10mlMH培育基，CFU约107个/ml。（3）每小时测量各瓶OD600数值，至细菌进入稳定期数值基本不再转变（约12小时）。2.2.5.7葡萄糖6磷酸诱导试验（1）从37C培育16-20小时的新奇平板中挑取单菌落，接种至含有1mlTSB的IOml培育管中。
6、于37七振荡培育（转速220RPM）过夜。（2）离心收集，用无菌PBS清洗三次，调整至OD600=1.0（3）1:100接种至PN培育基，37振荡培育（转速220RPM）6小时。（4）向培育物中添加葡萄糖6磷酸至终浓度5gL,连续培育。（5）在不同时间点分别收集1ml菌液（添加前0min,添加后Imin,5min,30min）,抽提RNA,2.2.5.8金黄色葡萄球菌上清AI-2浓度检测（1）收集菌液上清。将1:100接种的金葡菌每隔固定时间测量OD600的值并取200E菌液，4离心取上清，保存至-80待用。（2）将上清化冻后，分别加样至专用发光检测96孔板，每孔20l（3）将过夜培育的弧菌BB170依据发光强度1:5000到1:10000稀释，分装至发光检测板，每孔18OraL（4）在30C振荡培育，定时使用Veritas发光检测仪检测发光强度。（5）对比组发光强度时间曲线会消失“V”型曲线，取曲线最低点四周，测量组与对比组发光强度的比值，即可表征AI-2浓度
