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1、其次章基因工程复习题一、选择题1 .限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（D）B促进自身的基因重组D提高自身的防卫实力B基因工程与发酵工程D基因工程与蛋白质工程A修复自身的遗传缺陷C强化自身的核酸代谢2 .生物工程的上游技术是（D）A基因工程与分别工程C基因工程与细胞工程3 .基因工程操作的三大基本元件是：（1供体受体载体抗体V配体）（八）A.I+B.I+C.+D.+V4.多聚接头（）指的是（八）A.含有多种限制性内切酶识别与切割依次的人工片段B.含有多种复制起始区的人工片段C,含有多种依次的人工片段D.含有多种启动基因的人工片段5.下列五个片段中含有回文结构的是（D）A.B.C.D.
2、6.若将含有5,末端4碱基突出的外源片段插入到含有3,末端4碱基突出的载体质粒上，又必需保证连接区域的碱基对数目既不增加也不削减，则需用的工具酶是（D）IT4聚合酶T4连接酶碱性磷酸单酯酶A.B.I+C.+D.I+7.下列有关连接反应的叙述，错误的是（八）A.连接反应的最佳温度为37B.连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C.连接反应缓冲体系的浓度不能高于1D.连接酶通常应过量2-5倍8.T4连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段片段连接在一起，其底物的关键基团是（D）A.2,和5-PB.2f和3,C. 3,和 5 -PD. 5,和 3,9.载体的功能是（I运输外源基因高效进入受体细胞为外源基因供
3、应复制实力为外源基因供应整合实力）（D）A.IB,I+C.+D.I+10.克隆菌扩增的目的是（I增殖外源基因拷贝表达标记基因表达外源基因）（D）A.I+B.I+C.+D.I+11 .下列各组用于外源基因表达的受体细胞与其特点的对应关系中，错误的是（C）A.大肠杆菌一繁殖快速B.枯草杆菌一分泌机制健全C,链霉菌一遗传稳定D.酵母菌一表达产物具有真核性12 .考斯质粒（）是一种（B）A.自然质粒载体B.由人的区与一质粒重组而成的载体C.具有溶原性质的载体D.能在受体细胞内复制并包装的载体13.某一重组（6.2）的载体部分有两个酶切位点。用酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据
4、吻合，该重组分子插入片段上的酶切位点共有（D）A. 4个B.3个C.2个D.至少2个14.外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是（I融合基因能稳定扩增融合蛋白能抗蛋白酶的降解表达产物易于亲和层析分别）（D）B. I+C.I+D.+15.提高重组率的方法包括（I加大外源与载体的分子之比载体分子除磷连接酶过量延长连接反应时间）（八）A.I+B,I+C.I+D.+16.识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（B）A.同工酶B.同尾酶C.同裂酶D.同位酶17322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（）和复制子标记D.多克隆位点18.噬菌体外包装目的基因片段的大小应为A.
5、小于噬菌体的50%B.小于噬菌体的75%C.大于噬菌体的105%D.为人噬菌体的75%105%19连接酶的功能是（）A.复原3与5之间的磷酸二酯键B.复原缺口C.复原裂口D.可使平末端与粘性末端连接20质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（ABCD）复制子标记D.多克隆位点21 .下列属于获得目的基因的方法的是（D）利用反转录形成从基因组文库中提取从受体细胞中提取利用技术利用转录人工合成A.B.C.D.22 .的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是BA.提高受体细胞在自然环境中的耐药性B.有利于对目的基因是否导入进行检测C.增加质粒分子的分子量D.便于与外源基
6、因连接23 .有关基因工程的叙述正确的是DA.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞内完成的C.质粒都可作为运载体D.蛋白质的结构可为合成目的基因供应资料24 .哪项不是基因表达载体的组成部分（B）A.启动子B,终止密码C.标记基因D.目的基因25 .下列哪项不是将0的基因导入植物细胞的方法（B）A.基因枪法B.显微注射法C.农杆菌转化法D.花粉管通道法26 .以下说法正确的是（C）A、全部的限制酶只能识别一种特定的核甘酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运载体必需具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D、基因限制的性状都能在后代表现出来27 .不属于质
7、粒被选为基因运载体的理由是（D）A、能复制B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状28 .有关基因工程的叙述中，错误的是（A）A、连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶29 .有关基因工程的叙述正确的是（D）A、限制酶只在获得目的基因时才用B、重组质粒的形成在细胞内完成C、质粒都可作为运载体D、蛋白质的结构可为合成目的基因供应资料30 .基因工程是在分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的步骤是A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体
8、细胞D、目的基因的检测和表达31 .下列获得目的基因的方法中须要模板链是（B）A.从基因文库中获得目的基因B.利用技术扩增目的基因C.反转录法D.通过合成仪利用化学方法人工合成32.下列有关基因工程的叙述中，错误的是A、连接酶将粘性末端的碱基对连接起来B、基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的分子C、基因治疗主要是对有缺陷的进行修复D、蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因供应资料二、是非推断题1连接酶是一种能催化二条链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基因序列中的缺口，也可修复裂口。2.质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不高。（X）3、入噬菌体
9、的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切点。（J）4、原核细胞和真核细胞转录的均具有与结合的序列，以利于进行有效的转录。（X）5、文库是包含有细胞中全部，因此该文库能包含细胞全部的遗传信息。（X）三、填空题1、在标记基因插入外源基因，经诱导，在培育基中显白色，为阳性克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为阴性克隆。2、志向的质粒克隆载体应具备以下基本条件，如能自主复制、一种或多种限制酶的酶切位点、筛选标记、分子量小易拷贝。3、点突变的基因系列在碱基替换中，若为一个喋吟换成另一个喋吟或一个喀咤换成另一个嘴咤者称转换，若一个噂吟换成一个喀咤或一个喀咤换成一个喋吟者称颠换。4、基
10、因表达的四大表达系统分别为大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞。5、基因与载体的平末端连接方法有哪些T4连接酶连接法。末端核甘酸转移酶加同聚物尾巴后，再用连接酶进行连接；化学合成连接物后连接分子。6、如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？抗性标记筛选；抗性基因插入失活筛选；基因失活筛选。7、核酸操作的基本技术有哪些核酸提取与纯化核酸的检测与保存核酸的凝胶电泳核酸分子杂交8、基因工程所需的基本条件1、用于核酸操作的工具酶；2、用于基因克隆的载体；3、用于基因转移的受体菌或细胞。9、酶在有状况下，呈现聚合酶活性，在没有状况下呈现外切酶活性。10、利用技术扩增目的基因概念：全称为聚合酶链式反应，是一
11、项在生物体外复制特定片段的核酸合成技术原理：复制条件：已知基因的核甘酸序列四种脱氧核甘酸一对引物、聚合酶.前提条件：方式：以指数方式扩增，即2（n为扩增循环的次数）结果使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增11.技术扩增过程a、变性（90-95）：双链模板在热作用下，氢键断裂，形成单链b、复性（55-60）：系统温度降低，引物与模板结合，形成局部双链。c、延长（70C-75C）：在酶的作用下，从引物的5端-3端延长，合成与模板互补的链。四、名词说明1.同尾酶某些限制性内切酶识别的碱基依次不同，但酶切后产生同样粘性末端的两种酶2.柯斯(COS)质粒带有噬菌体的位点和整个322的依次的大肠杆菌质
12、粒。3序列为能在细菌核糖体上产生有效结合和转译的特别序列。4 .质粒不亲和性：在没有选择压力的状况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。5文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的片段与某种载体连接而成的克隆的集合。6 .穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。7 .基因()具有特定功能的片段，这些片段有的编码蛋白质，有的编码、，有的则是与复制、转录调控有关的序列。8 .基因重组：由于不同链的断裂和连接而产生片段的交换和重新组合，形成新分子的过程。9 .基因工程又叫做基因拼接技术或重组技术。是在生物体外，
13、通过对分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所须要的新的生物类型和生物产品10 .目的基因（）：又叫靶基因（），是指依据基因工程的目的,设计的所须要的某些分子片段，它含有一种或几种遗传信息的全套密码（）五问答题1 .真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？能，为什么？不能，为什么？不能，因为原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。原核生物必需有相应的原核聚合酶可识别原核细胞的启动子，以催化的合成。基因表达是以操纵子为单位，操纵子由数个相关的结构基因和调控功能的部
14、位组成的。因此在构建原核表达载体时必需有1个强的原核启动子与其两侧的调控序列。2 .质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？目的基因片断与载体由相同的单一限制性核酸内切酶（如）消化酶切后，两者的两端均具有相同的粘性末端，称为单酶切点的粘性末端，又称全同源性粘性末端（1）高背景载体经单一限制性核酸内切酶切割后，载体分子易于自我环化，既不利于目的基因的重组连接，大大降低阳性克隆效率，又可使非重组性载体造成高背景。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体粘性末端的5以抑制的自我环化。在连接反应中，具有5,的目的基因片断可有效地与去磷酸化质粒载体通过粘性末端发生互补连接
15、，尽管产生的重组分子于连接点含有两个缺口的开环分子,尽管在转化时其转化效率高于线性低于闭和环，但转化大肠杆菌后，在菌体内其缺口可获得修复。（2）双向插入经单一限制核酸内切酶（如）切割的目的基因和载体，因二者的粘性末端是相同的，因此在连接反应中，目的基因可发生双向插入，载体对目的基因表达是有方向的，而目的基因可双向与之相连，这种连接若以克隆目的基因片段为目的没有影响，若以表达为目的，我们就要对插入的片段进行方向鉴定，因目的基因由起始密码子向终止密码子方向表达是定向转录的，一旦启动子与目的基因编码依次方向相反就不能正确转录目的基因的。若构建表达重组体选用双酶切切割目的基因和载体，可使目的基因与载体
16、的连接发生定向连接重组，以便定向克隆。3 .将外源性克隆到区段的插入型噬菌体上后，如何筛选重组噬菌体？-半乳糖甘酶失活的插入型载体，在其基因组中含有一个大肠杆菌的区段，此区段编码有B-半乳糖甘酶基因，在诱导物（异丙基硫代半乳糖昔）存在下，B-半乳糖甘酶能作用（5T臭-4-氯3-口引口朵-B半乳糖甘）形成蓝色化合物（5-澳-4-氯靛蓝）。这样由这种载体感染的大肠杆菌指示菌（基因缺陷菌），涂布在补加有和的培育基平板上，会形成蓝色的噬斑，但若在区段上插入外源片段，就会阻断B-半乳糖甘酶基因的编码序列，这种重组体感染的指示菌由于不能合成B-半乳糖甘酶，只能形成无色的噬菌斑，相反未发生外源基因插入则出现
17、蓝色噬菌斑，以利筛选。4 .基因与载体的平末端连接方法有哪些？简要或图示说明均可。（1） T4连接酶法连接平末端分子的方法有2种，一种是干脆用T4连接酶连接，另一种是先用末端核甘酸转移酶给平末端分子加上同聚物尾巴之后再用连接酶进行连接。T4连接酶同一般的大肠杆菌连接酶不同。T4连接酶除了能够封闭具有3和5末端的双链的缺口之外,在存在和加入高浓度酶的条件下，它还能够连接具有完全配对碱基的平末端分子,但其连接效率比粘性端要低的多。（2）同聚物加尾法运用末端核甘酰转移酶，能够将核甘酸（通过脱氧核昔三磷酸前体）加到分子单链延长末端的3基因上,它并不须要模板链的存在,它一个一个加上核甘酸,构成由核甘酸组
18、成的尾巴,长度可达100个核甘酸。5 .如何从所克隆到基因重组体中鉴定目的基因的存在和正确性？依据插入基因的遗传性状进行筛选只有当已知需克隆基因所编码蛋白质的功能，且该蛋白质又为细菌的生命活动所必需时，即可用该方法筛选。如：已知蛋白质中的亮氨酸（）为养分缺陷菌所必需，当外源目的基因可表达亮氨酸，将该基因的重组子转入缺陷菌中，在不含亮氨酸的基本培育基平板中，只有重组子表达的亮氨酸才能被缺陷菌所利用而能生长繁殖,形成菌落。因而能生长的细菌集落，均为阳性的重组子克隆，而无该重组子的缺陷菌在不含亮氨酸的平板上则不能生长，不能形成菌落。依据重组子的结构特征筛选（1） .重组子大小鉴别筛选重组子中因装有一
19、段较大分子量的外源基因，因此其分子量明显比原载体大得多，因此可从平板上挑取菌落分别提取重组载体（如质粒重组子）和原载体（质粒），无需用限制性内切酶消化，干脆进行凝胶电泳，携带外源性目的基因的重组子质粒因分子量大，电泳迁移率较小，其电泳条带在后，而原载体质粒因分子量较小，电泳迁移率较大，其电泳条带在前。通过比较可初步推断重组子中是否插入外源基因片段。本方法适用于插入片段较大的重组子的初步筛选。（2） .酶切鉴定对于筛选出的具有重组子的菌株，应经小量培育后，再分别提取原载体或重组体载体（重组质粒或重组噬菌体），依据已知重组时外源基因两端的酶切位点，分别用相应的两种内切酶进行酶解，经琼脂糖电泳后，原
20、载体因无外源性目的基因，切开后变成线性，电泳呈一条带,若载体上有外源性目的基因插入，切开后电泳出现两条带：一条为载体质粒线性条带，一条为释放出的插入基因片断的小分子条带，这样就可以看出载体中是否有插入的目的基因片断，以与由条带对比分析可得知插入基因片段的大小（3） .目的基因序列测定6 .基因工程诞生的理论基础是什么？是现代分子生物学领域理论上的三大发觉和技术上的三大独创。理论上的三大发觉：证明了是遗传物质揭示了分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大独创：限制核酸内切酶的发觉与切割连接酶的发觉与片段的连接基因工程载体的探讨与应用7 .如何有效地提
21、高外源基因的表达效率？提高启动子强度缩短启动子同克隆基因间距离高效的翻译起始序列高效的转录终止区提高质粒拷贝数与稳定性用以下方法提高翻译水平：调整序列与间的距离用点突变的方法变更某些碱基增加的稳定性的减轻细胞的代谢负荷：诱导表达表达载体的诱导复制提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表达融合蛋白采纳某种突变菌株表达分泌蛋白质8 .大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？优点：大肠杆菌培育便利、操作简洁、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景学问清晰，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种平安的基因工程试验体系，有多种适用
22、的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。缺点：在通常状况下，细菌的聚合酶不能识别真核的启动子；很多真核基因的蛋白质产物须要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异己分子”降解掉。9 .什么是a-互补筛选？质粒载体具有B-半乳糖甘酶基因（），当外源插入到它的，可造成表达后的B-半乳糖甘酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有培育基中的颜色变更鉴别出重组子和非重组子。有些大肠杆菌上带有基因的部分编码序列，质粒载体中含有别一部分编码序列，当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫a互补。10 .真核细胞基因结构和原核细胞的有何相同点和不同点？1）相同点：都是由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成。2）不同点：原核细胞基因的编码区是连续的，真核细胞基因的编码区是间隔的，不连续的。11 .基因克隆常用的载体必需具备的基本条件？1 .具有独立复制实力2 .具备多个限制酶的识别位点（多克隆位点）3 .具有遗传表型或筛选标记4 .有足够的容量以容纳外源片段5 .可导入受体细胞。
