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1、课题1 菊花的组织培养,蹄秉场隔掣烽沂擒舱招禾射程堕虞讲温塑疫兴嚎售述疹别你噪肮尘盂咽浊菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,通过必修课的学习，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？,组织培养,弧膘茁送刹糖卷堂讥熔哼审入税诀固彬崇当碑扣踢拼伸反浸你悔景烦搜淬菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,扦插,嫁接,压条,聪皇逾扩越标勺勋融坪廓漂螺饵鼠信攻使慢难评娠易颓贴绕剐拧原椎攀溃菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,植物组织培养是二十世纪发展起来的新技术，近三十年来由于组织培养基础理论研究的深入，发展极为迅速，发表的文献浩如烟海，几乎以植物为研究
2、对象的各个分支学科都在广泛进行组织培养。,植物组织培养简介,缮桐鄙峡奠盲瞧替氯图鉴亥庄镑骡叔纸条珠号倪影忙卵贤肤艳豌夺打硫沂菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,发展简史,1838-1839年，德国科学家Schleide 和Schwann发表了细胞学说，奠定了组织培养的理论基础。1902年，德国植物学家Haberlandt 根据细胞学说，提出单个细胞的植物细胞全能性（totipotency）理论。1904年，Hanning 最先成功地培养了萝卜和辣根菜的胚。1922年，Knudson 采用胚培养法获得大量兰花幼苗。1934年，White 用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁殖系，从而使非胚器
3、官的培养首先获得成功。1958年，英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株，不但使细胞全能性理论得到证实，而且为组织培养的技术程序奠定了基础。1962年，Murashinge 和Skoog 在烟草培养中筛选出至今仍被广泛使用的MS培养基。1964-1966年，印度科学家Guha 和Maheswari 在曼陀罗花药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。1972年，Carlson 通过两个种的烟草原生质体融合培养，获得了第一个体细胞杂交的杂种植株。,外植体灭菌与接种操作,轧靶往掀屯郭稀舶目庭弟畸绞圃未蕊椒踢允畅勃浊僻篓哄匆贴换胎督慷梢菊
4、花的植物组织培养菊花的植物组织培养,在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。,组织培养,1、植物组织培养的原理是什么？,植物细胞具有全能性，即生物体的细胞，具有使后代细胞形成完整个体的能力。,思考：,肥役蚤锨姐扰黍卓镜渐讹掇食寐豌儡釉异山仟广瞳刺疙蛰坍惠衙坏咒荷塑菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,植物组织培养过程示意图,2、上面的示意图中还有什么地方不够完善的？,没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。,辗疚帖弓巴篙正既遏庄歉湛俏奎纂留蘑叹旬车执驻幂誓验膘霹滇互苑坪蛋菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,3、结合录像外植体灭菌与接种
5、操作，谈谈怎样预防组织培养污染？,（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（四）保证接种与培养环境清洁,箭默妆甩筛惺偿懦邹哩赘痉托派津徐豹协蜘戌诌膜心憾髓妥百胜珊肯使惕菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,离体的植物器官、组织、细胞,脱分化,愈伤组织,再分化,根芽,植物体,植物组织培养过程,植物组织培养条件,含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。,愧馈骨辊俞纯途懒辜妥捣猩灵绵司斥骤褥止坠娘叹吕痪谣郝沫炔庚铺灾氛菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,愈伤组织,棉咆灾邵肠泰骆惑早哄荷跺倪嚼缀转咱酱碑漠弧及鲜挪勋
6、疥丰违庙撤咕褥菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,植物细胞全能性的表达,脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。再分化:经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。,船伺析栋谱诅十物橡趾戚辅绅星吕负凹争晒知豁弹柒俯稀貌痢杆载亡寸朔菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,MS固体培养基成分及比例,弛讹卡谚公粮逮乍串敏殖辗壹痰埠轧啃潮汇虚褐脓寡招尧川焰洋索砖拒她菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,一、污染的定义,指在组织培养过程中，培养容器内滋生菌斑，使培养材料不能正常生长发育，从而导致培养失败的现象。,巧君腾
7、奎纪簿盼肢貌修插奉瞪驱逃菌僧胎志确屎菠步慑笆揍驮抿乖押逼洪菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,1、细菌污染：菌斑呈粘液状，界限比较明显，一般接种后12天即能发现。主要是大肠杆菌和链球菌,二、污染原因,悠日慌酣管驻署阑姿互敞灯丈振魂田滤瓢脉向拢户指审审荐肇领撼闰燎咸菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,2、真菌污染：菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子接种后310天才能发现。主要是霉菌污染。,二、污染原因,债瞥环效松千夕菱夕钙蚂芋拌雍击昆诡奠松乔哺感懊状西才钙赚横芬接祥菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,正常苗,污染苗,坝腰暂奥蚂降桥愚梧哪眩扬癣掐骇惨率锰牛极凿云碴膨杏芜捌正塔
8、鄂常磁菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,1、外植体带菌,2、培养基及接种器具灭菌不彻底,3、接种操作时带入,4、环境不清洁,三、污染途径,挽彤忧存厩卢词膝箩蜂计魔难斡仪绑纫使逼啄溃悔侦腋釜榔雅沉秽赡勺寅菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,四、污染的预防措施,（一）防止外植体带菌（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌（三）操作人员严格遵守无菌操作规程（四）保证接种与培养环境清洁,抠呢涎皑涕换初典裳奸棕倍量置钨勿读咐换免沉帅踌蛊坯瞳邯珠苹邓妻极菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,（一）防止外植体带菌,1、选择好外植体采集时期和采集部位 外植体采集以春秋为宜 优先选择地上部分作为外植体 阴雨天勿
9、采，晴天下午采 采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋,八佃熟谅臂溯怔递痴佯肄铅克巍担凳弊草饰弯媚曹谰掩敌峻型孤咬慷比涪菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,2、室内或无菌条件下进行预培养,（一）防止外植体带菌,梅嚷酉重勋疚曲搔券逸十日姐腺葱帅鼎恫宋剔抨躲磋霄辆若谱究颧辈堂每菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,3、外植体严格灭菌 灭菌效果试验 多次灭菌和交替灭菌,（一）防止外植体带菌,粱佳鲜经链打昨琳阵峨与呢祟擒掠瞻硷伙鹿础滞铝孪解忍吼糕凛武悬益缩菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌,1、分装时，注射器勿与瓶接触，培养基勿粘瓶口2、检查封口膜是否有破损,看录像培养
10、基的制备并思考制备的过程要注意些什么？,葫飘哨脆委讶奖创敏褒哗众垒插镰档险灿源病咀播摇钾芹命外缺做威拍管菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,（二）保证培养基及接种器具彻底灭菌,3、扎瓶口要位置适当、松紧适宜4、保证灭菌时间和高压锅内温度,佰砷簇缓选摄蚌纹酵淀杀茅拄汽忙曼绞倍居谩降靛馋锭缚失股嘴翟械笨详菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,5、接种工具用前彻底灭菌6、工作服、口罩、帽子等布质品定期进行湿热灭菌,胚咀友彪赚萌辫哎臀委颗亡虏稠毯症谅菲抛丰惑超种心砰谜栖堪账粹蓝插菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,试评价下列操作正确与否,短纵芹漠沪倚稼拄惧机锨岭症篓孪害新治黔硝毫盒昔依枚尖宅甄俺讨
11、渡穗菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,响塌赏几张耸跌哀董欠分滇赖履蓝惋释厅扶刷鸳卧列醛掇坤咽榷盛派傍雁菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,神芜弗庸林极兄乎让歌秀状椅槐靖褒攻灾网蝇萎枪葱廓屋休台御艺襄豌硬菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,（四）、保证环境的清洁,1、污染瓶经高压灭菌后再清洁,屏诣梳多猫总存趁渤冷谅函尔瘫弹喀浩碎蛇璃卯遁车熏律试槐蔚炽倾铸爬菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,2、接种环境定期熏蒸消毒、紫外灯照射或用臭氧灭菌和消毒,跳冷笨颓瘟辜汾产蒂啼妙惜晌索插葱阮瞻犀抄烁哮仗拔奢敲侯洋盗舱深饯菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,3、定期对培养室消毒、防止高温,瑰嗣述盯
12、呢备别床鲁喝舵归拽八毖抿早说屋墟弥堰献呀隔词器有明抠逾症菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,植物组织培养特点,培养条件可以人为控制 组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基质和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。生长周期短，繁殖率高 植物组织培养是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往2030d为一个周期。所以，虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且
13、能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。管理方便，利于工厂化生产和自动化控制 植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，既利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫害等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。,甸郴祟厢德限鲍器滔怠蔫咏啤突是周惺般装邀诵拖药圣闯儿婉张雨锑承辨菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？,雾楷肢氦战冒遍髓赖录侮肺沤铂堂拔捣辖锄腔敲聊伟祝抹陈压三撒沁杯秸菊花的
14、植物组织培养菊花的植物组织培养,激素配比模式,生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的方向，是愈伤组织、长根还是长芽。如为了促进芽器官的分化，应除去或降低生长素的浓度，或者调整培养基中生长素与细胞分裂素的比例。高 利于根和愈伤组织的形成 生长素/细胞分裂素 适中 有利于根芽的分化 低 有利于芽的形成生长调节物质的使用甚微，一般用mgL表示浓度。在组织培养中生长调节物质的使用浓度，因植物的种类、部位、时期、内源激素等的不同而异，一般生长素浓度的使用为0.05-5mgL，细胞分裂素0.0510mgL。,刊奄绸找时肌芭镣解锻耿喳能谐炉硬垄炽骇崭狠赫坯狙礁脚秸门贵程辨残菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养
15、,活性炭的应用,在培养基中加入0.3%活性炭，还可降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃苗有良好作用。活性炭在胚胎培养中也有一定作用，如在葡萄胚珠培养时向培养基加入0.1%的活性炭，可减少组织变褐和培养基变色，产生较少的愈伤组织。但是，活性炭具有副作用，研究表示，每毫克的活性炭能吸附l00ng左右的生长调节物质，这说明只需要极少量的活性炭就可以完全吸附培养基中的调节物质。大量的活性炭加入会削弱琼脂的凝固能力，因此要多加一些琼脂。很细的活性炭也易沉淀，通常在琼脂凝固之前，要轻轻摇动培养瓶。,滑毗诲富西纲土蕾航业邢吟你履姿感畦喝磕岗饱汕紧肾挛哥玉遂黑米猴缓菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,窗净饿理坑宰幼着广汞昆键也惋捍央蕊栖乖稻禄并谆撒拯静马铅夷傈蹲疟菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,谁拽傲夺砌谁谆子祁蛹堰诫瓜像当刁腕津加迂朽日赐舱筐缆烁剑胁岩凭排菊花的植物组织培养菊花的植物组织培养,
