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1、脂多糖结合蛋白定址试剂盒说明书试验原理：ES试剂盒是固相夹心法溶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ES浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ES和生物索标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP.再经过温育和洗涤，去除未结合的酸结合物，然后加入底物A、B,和曲结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ES的浓度呈比例关系.特点：1、而效、灵敏、特异的抗体；2、稳定的重复性和可靠性；3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体：4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型。样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心2
2、0分钟左右（2000-3000转/分。仔细收集上消，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2 .血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠椽酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）,仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心.3 .尿液：用无菌管收集，尚心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次熟心。胸腹水、脑脊液参照实行。4 .细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）,仔细收集上消。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度
3、达到100万左右“通过反匆冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份.离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心.5 .组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4,用液氮迅速冷冻保存备用。标本触化后仍然保持2-8C的温度。加入一定量的PBS（PH7.4）,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心2。分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-2（C保存，但应避免反夏冻眼.试剂盒性能：1 .灵敝度：Z
4、Ui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2 .特异性：不与其它细胞因子反应。3 .全豆性：板内、板间变异系数均小于10%。操作步姿：1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用豆孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50Ul于反应孔内。3. 加入稀解好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板
5、，轻轻振荡混匀，37C温育1小时。4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。或复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次5. 每孔加入80Ul的亲和链梅素-HRP,轻轻振荡混匀，37C温白30分钟。6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重更此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀，37C温育10分钟.避免光照。8. 取出醉标板，迅速加入50Ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9. 在45Onm波长处测定各孔的OD值。结果判断与分析：1、仪器值：丁波长45Onin的
6、商标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y）,相应的ES标准品浓度为横坐标（X）,做得相应的曲线，样品的ES含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-240pgml操作注意事项：1. 试剂应按标签说明书储存，使用前恢匏到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质.3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用.保质前使用.4. 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器.5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6. 洗涤酣标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酬标反应孔中吸水。7. 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取0D8. 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样“9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
