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1、规模化猪场临床技术支撑与疫病检测、防控方案,农业微生物学国家重点实验室 华中农业大学动物传染病诊断中心 武汉科前动物生物制品有限责任公司,华中农业大学动物病原微生物室 前沿的科研平台,农业微生物学国家重点实验室农业部重大动物疫病与人畜共患病重点开放实验室教育部生物药物工程研究中心,研究成果,研究项目 近5年来，本实验室主持承担973项目7项、863项目6项、国家自然科学基金20项、国家科技支撑计划、科技攻关、科研成果转化等国家及省部及课题50余项,一名院士,二十三名教授,四十名博士研究生,一百五十名硕士研究生,华中农业大学动物传染病诊断中心 专业猪病临床服务团队,农业微生物学国家重点实验室农业
2、部重大动物疫病与人畜共患病重点开放实验室教育部国家生物药物工程研究中心,一、技术依托,二、人才优势,陈焕春院士、吴斌教授、何启盖教授和周诗其副教授和汤细彪博士长期坐诊；中心现有博士2名，硕士8名，本科23人，专业的临床猪病研究团队；能完成从分子水平到动物群体全方位的临床监测与诊断，配套个性化的防控方案。,产-学-研相结合，猪病的问题是兽医工作者的头等大事！,解决猪场实际问题，才是硬道理！,能完成从分子水平、到动物群体全方位临床诊断,支撑项目解决临床实际问题,建立、完善生猪健康生产与疾病管理档案 优化、配套合理的免疫程序与疫病监测评估体系 规范猪场药物的管理与科学保健程序的制定 流行疫病的临床诊
3、断、实验室诊断与重大疫情的控制 长期跟踪、监测猪场病原，建立并分析猪场流行病原库 综合防治、控制本场流行存在的顽固性病原，提高生产成绩 猪瘟、猪伪狂犬病的净化与根除 猪场技术人员的业务培训与专业技能指导,病原谱的建立,1、剖检流程与临床解剖诊断,2、细菌学检测流程,处理,接种,培养,检测,镜鉴,生化鉴定,PCR鉴定,3、常见病毒学的检测工作流程,检测PRV-PPV-PCV2三种DNA病毒的多重PCR,病毒学检测注意事项,病毒的定性检测 病毒的定量检测（实时荧光定量检测）病毒的分子测序,病毒学检测：3个工作日,分子测序：7-8个工作日,弓形虫病PCR检测结果,4、寄生虫学检测,附红细胞体PCR检
4、测结果,M 2000bp Marker 1、猪附红细胞体PCR扩增产物 2、阴性对照,寄生虫学检测：3个工作日,5、病理学诊断,酶联免疫吸附试验(ELISA)乳胶凝集 血凝抑制试验 胶体金检测拭纸条 血相、血常规检测，健康水平评估,6、血清抗体评估检测,血清学检测：3个工作日,7、检测结果会诊与控制方案提出,优秀科研成果的生产转化基地，为中国养猪业健康发展提供强大的技术支撑！,科技创造价值，科前回报社会！,规模化猪场常见临床问题与防治对策,汤细彪 博士 华中农业大学动物传染病诊断中心Email:手机：13971260736QQ:450794077,记忆中伤痛：20062010,病！病！病！养猪
5、业的灾难,2006.江西、湖南,2009河南、安徽,2007.湖北、四川、山东、福建、河北、河南,2008.湖北、四川、山东、福建,2010 广西、江西、湖北、安徽、河南、吉林、辽宁、河北、四川、云南疫情,2010年产房仔猪的问题 2010年保育仔猪的问题 2010年育肥猪问题 2010年母猪群繁殖障碍性问题,2010年临床主要流行疫病,2010年产房仔猪的流行现状,产房仔猪的顽固性腹泻和呼吸道问题,顽固性腹泻,肾脏有出血点,肾脏无明显病变,顽固性腹泻，肠系水样腹泻物,实验室病原学检测,猪瘟、伪狂犬是引起顽固性腹泻的重要原因；胃肠生态平衡破坏；副猪嗜血是引起产房仔猪呼吸系统疫病的重要病原。,腹
6、泻疫病防控方案,免疫：母猪全群普打伪狂犬HB-98 启动猪瘟超免 0-1d：伪狂犬HB-98滴鼻；保健：,微生态制剂乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热链球菌；,预防程序：,治疗程序：,1、猪瘟：最重要的疾病 急性败血型猪瘟-主要发生于保育猪和育肥猪。慢性型猪瘟-腹泻症状；纽扣状溃疡 猪瘟病毒的持续感染可以造成母猪繁殖障碍，出现流产、产死胎和弱仔，先天感染使带毒猪发生免疫耐受，给免疫预防带来困难。猪瘟与其它细菌疾病混合发生 猪瘟抗体易受免疫抑制病的干扰,（一）防控仔猪顽固性腹泻，做好“猪瘟”的防控,猪瘟疫苗的特点,细胞苗：用细胞培养；常规免疫脾淋苗：用家兔制备，适用于紧急接种浓缩苗：商品化的名字，按照
7、剂量使用即可,猪瘟的免疫程序,猪群发生猪瘟时超前免疫：免疫后2小时才吃母乳，否则无效35日龄-70日龄分别作2次免疫猪群稳定时 25-30日龄；60-65日龄 种猪群跟胎免疫，母子同打 25-30日龄；一年2-3次,上世纪80年代末90年代初，我国猪群中流行、爆 发以母猪产死胎、木乃伊、畸胎为主要临床症状 的重要传染病，给我国养殖业造成重大经济损失。新生仔猪大量死亡、日龄内仔猪死亡率达100%，断奶仔猪发病率20-40%，死亡率10-20%，主要表现为神经症状、拉稀、呕吐等。公猪不育、发生睾丸肿胀、萎缩，失去种用能力。,猪伪狂犬病是危害猪群健康养殖重大的传染病之一,（二）防控仔猪顽固性腹泻，须
8、做好“伪狂犬病”的防控,母猪产健仔率不高仔猪的顽固性腹泻与呼吸道问题育肥猪的呼吸道症状，是PRDC的原因之一,2-3 老态未去，新的表现形式又来！,顽固性腹泻,呼吸系统综合症,3.选择合适伪狂犬疫苗,1：灭活疫苗，TK（帮凶）基因没有缺失，但已灭活，体液免疫反应；2：弱毒疫苗Bartha株，分离自牛，TK基因未被缺失，对仔猪不安全；3：基因工程疫双基因TK-/gG-（中牧合作疫苗）;TK-/gE-弱毒疫苗（Begonia;NIA783),1）安全、有效，既能免疫母猪，又能免疫仔猪；2）既能进行体液免疫又能激发粘膜免疫，同时产生非特异性细胞免疫，3）即可产生特异性中和抗体，又能激发细胞因子，清除
9、体内 其他病毒，显著提高猪群健康水平。,推广应用要求：,传统疫苗满足不了临床要求：,科前公司伪狂犬疫苗HB-98研发历程,全球领先第三代：HB-98,现在：不仅是好疫苗，具有时代责任抗病毒特殊疗效,养猪人都知道HB-98,20年,我的名字叫HB-98:我是 三基因缺失 TK-/gG-/gE-基因工程疫苗,猪伪狂犬病活疫苗（HB-98株）的特点与优势,1、前沿分子技术，聚焦地方毒株,农业微生物学国家重点实验室,地方毒株分子亚型对应，针对性强；本动物分离株，适应性与免疫原性更强；人工定向缺失关键毒力基因，科学合理，取长补短，更 安全、有效。,2、安全、有效的伪狂犬活疫苗必须缺失TK基因,伪狂犬病毒
10、属于疱疹病毒科，目前，多种与毒力和免疫原性相关的基因均已被定位和测序，如TK、gG、gE、gB、gC、gD、gI等，其中TK为致命的凶手，是该病毒主要的毒力基因，控制病毒在神经组织内的复制。TK基因的存在加强了伪狂犬病毒的潜伏性，犹如一颗定时炸弹，增加了毒力返强和野毒重组的可能性！安全的基因工程疫苗必须缺失TK基因，未缺失TK基因的伪狂犬疫苗，不能完全清除野毒对猪群的威胁,伪狂犬病毒编码的gG蛋白是一种趋化因子结合蛋白，由于gG与机体本身的趋化因子结合，使趋化因子不能发挥功能，导致机体不易或难以识别侵入的病毒。与野毒和普通弱毒苗相比，将gG缺失后消除了与机体本身的趋化因子结合的可能，游离的趋化
11、因子能迅速识别病毒，提高了疫苗的免疫原性，而且很快产生抗体，从而达到治疗效果。,伪狂犬病HB-98株为什么可用于腹泻猪紧急接种（治疗）,4、既能激发特异性免疫，又能激发非特异性细胞免疫必须缺失gG基因,缺失TK-/gG-/gE-基因的HB-98可以产生干扰素,临床应用HB-98后，发现伪狂犬疫苗对病毒性疫病有治疗、防控效果；克隆了多株PRV基因缺失毒株；经过国家重点实验室的理论研究，发现HB-98可诱导机体快速分泌干扰素和干扰素等天然免疫因子;,4、伪狂犬HB-98疫苗可以为猪场带来什么？,因伪狂犬病的危害造成的公母猪繁殖障碍完全消失；因伪狂犬病的危害造成的仔猪死亡完全避免；长期使用，因伪狂犬
12、病造成的仔猪拉稀得到解决；长期使用，因伪狂犬病造成的保育猪呼吸道问题彻底解决；应急使用HB-98，治疗伪狂犬病造成的仔猪消瘦、拉稀、死亡；应急使用HB-98，对病毒病感染的前期起帮助性作用；gE基因缺失可以用于猪场伪狂犬病鉴别诊断与净化；长期使用，猪场免疫抑制病得到改善；,仔猪：1-3日龄内滴鼻1头份；35日龄左右肌肉注射1头份；70日龄加强免疫一次。后备母猪：6月龄左右肌肉注射免疫1次，间隔1个月后加强免疫1次，产前1个月左右再免疫1次；经产母猪：每4个月免疫1次，一年普免3次，每次1头份；种公猪：每4个月免疫1次，一年普免3次，每次1头份。,6.伪狂犬疫苗HB-98推荐免疫程序,HB-98
13、 荣誉,保育仔猪呼吸道和多系统衰竭综合症问题,2010年 断奶仔猪临床问题,断奶仔猪突出的临床问题,呕吐、不进食、有神经症状，发病急、死亡快；被毛松乱、关节肿大、部分猪呈现渐进性消瘦；全身淋巴结水肿；肺苍白，间质增宽，肺脏表面凹凸不平局部肉变；胃浆膜、胃粘膜有出血；腹腔内有黄色积液，肝脏表面有一层乳白色物质；肾脏有少量白斑，肾脏土黄，肝脏表面覆有乳白色物质；肠系膜淋巴结肿大，有鸡肠现象。,绒毛心、心包积液,肝脏肿大、表面呈白色、土黄色,肺脏有灰红色至暗红色的炎性病灶,仔猪易爆发副猪嗜血杆菌，特别是难养！,又名：多发性浆膜炎与关节炎近年来的新发疾病继发于猪蓝耳病、圆环病毒感染以及免疫力下降（饲喂
14、霉变玉米）的猪群是蓝耳病、圆环病毒病感染猪群死亡率较高的原因,防控仔猪呼吸道问题应做好“副猪嗜血杆菌病”的防控,临床症状（关节肿大）,脑膜炎,淋巴结肿大,多发性浆膜炎,4、5和13型仍然为优势血清型，而25.5%不能分型,Oliveira Cai X et al.,Vet Microbiol 2005,3-1 中国流行的血清型与毒力,4、防制副猪嗜血杆菌抗生素很无奈,摘自猪病学第九版,抗生素治疗或预防副猪嗜血杆菌的成本高，效果差，长期使用，威胁公共卫生！,摘自猪病学第九版,副猪嗜血杆菌病灭活疫苗,国内第一个且唯一一个获得生产文号的副猪嗜血杆菌病疫苗,“科前生物”副猪嗜血杆菌病灭活苗优势与特点,
15、5-1、疫苗菌种为地方优势血清型代表菌株,疫苗菌种分离自我国华中地区某发病猪场保育猪群。疫苗菌株为我国流行优势的4型和5型菌株。,统计表明，2003.102008.8，共分离鉴定细菌6238株，其中链球菌1850株（29.65%）、副猪嗜血杆菌1281株（20.54）、致病性大肠杆菌782（12.54）、巴氏杆菌396株（8.27%），这几种细菌已成为影响我国养猪生产的主要病原菌；另外胸膜肺炎、沙门氏菌等常见病原菌也严重威胁规模化养猪业的健康生产。,5-2 疫苗菌株精心筛选自免疫原性强菌株,对候选的4型和5型副猪嗜血杆菌进行免疫原性筛选试验,蔡旭旺.优秀博士论文，副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方
16、法与灭活疫苗的研究，2006,5-2 疫苗菌株精心筛选自免疫原性强菌株,蔡旭旺.优秀博士论文，副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究，2006,5-3.与同类产品比较，免疫保护力强,选用2835日龄断奶阴性仔猪作为实验动物，颈部肌注2ml进行首免，21日后二免。,蔡旭旺.优秀博士论文，副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究，2006,5-4-1.对仔猪免疫持续期长，保护效果好,蔡旭旺.优秀博士论文，副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究，2006,5-5、可有效交叉六种血清型的副猪嗜血杆菌灭活苗,科前生物副猪嗜血杆菌灭活苗可以交叉保护1型、4型、5型、12型、13
17、型和14型引起的副猪嗜血杆菌病。,蔡旭旺.优秀博士论文，副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究，2006,6.副猪嗜血杆菌免疫程序,初产母猪：首免:产前89周；二免:产前45周；以后每胎产前45周免疫1次 经产母猪：产前45周；仔 猪：首免:14日龄；二免:35日龄。,猪链球菌病是分布范围极广的猪传染病，世界各地均有发生，已成为严重影响各国养猪业发展的一种重要疫病；猪链球菌为革兰氏阳性菌，按照荚膜多糖可以将其分为33个血清型；我国主要流行猪链球菌2型，其次为猪链球菌7型,1型，9型；C群链球菌病也时有发生,防控仔猪呼吸道问题应做好“链球菌病”的防控,临床症状及病理变化,败血症型 脑膜
18、炎型 关节炎型 心内膜炎型 化脓性淋巴结型,败血型猪链球菌病,在新发病区尤其是集约化猪场，常发生最急性型口鼻流出红色泡沫液体,未见明显症状已死于猪栏中。急性病例发热、抑郁、随后表现共济失调、震颤、角弓反张、失明、听觉丧失、麻痹、呼吸困难,急性型：败血症变化，皮肤、皮下组织广泛出血，各器官充血、出血，全身淋巴结肿大出血，心包积液，心内膜有出血点，脾肿大，呈暗红色或紫色，柔软质脆，胃肠粘膜有出血点。,脑膜炎型猪链球菌病,是预测诊断的基础。多见于断奶后仔猪，病初体温升至405425度，拒食、便秘，有浆液或粘液性鼻液。继而出现神经症状，共济失调、转圈、磨牙，直至后躯麻痹侧卧于地，个别出现关节炎、关节肿
19、大，病程24天。,关节炎型,由前两型转型或病初即呈关节炎症状 病猪体温变化不定食欲时好时坏，一肢或多肢关节肿大，踱行或不能站立，病程23周，症状比较缓和。,受影响的关节，囊壁可能增厚，滑膜形成红斑，滑液量增加，并含有炎性细胞。,猪链球菌在我国的流行现状,链球菌耐药谱广，抗生素无效临床发病猪分离的126株猪链球菌对18 种抗生素的抗菌谱(2003-2008),临床发病猪分离的126株SS对18 种抗生素表现有11种耐药谱。其中表现为耐红霉素+克林霉素+四环素+阿奇霉素这四种药物的菌株最多为70株菌(55.6%)，有16株菌(12.7%)至少耐受5种药物，有1株菌(0.8%)最高可以耐受15种药物
20、。仅有2株菌(1.6%)对所有测试药品比较敏感。,猪链球菌病三价灭活苗（2型LT株、7型YZ株、C群XS株）的优势与特点,1、优势血清型地方毒株、针对性强,2005-2009年共分离出472株链球菌；260株为致病性猪链球菌；2型猪链球菌；7型猪链球菌；C群链球菌占。,2-1、精心筛选疫苗菌株，免疫原性强,基因水平检测，疫苗菌株须含有猪链球菌标记性毒力因子epf、sly、mrp,2-2、精心筛选疫苗菌株，免疫原性强,致病力强的菌株，免疫源性最强。,本动物试验致病力强的菌株，保护力高。,2-2、精心筛选疫苗菌株，免疫原性强,3、高端生物发酵技术，抗原含量高,科前生物：【主要成分及含量】含灭活的猪
21、链球菌血清2型、血清7型及马链球菌兽疫亚种C群菌株培养物，按活菌计数法计算疫苗中每种菌株至少含量3.0109CFU/头份。华东某场：【主要成分与含量】疫苗中含有灭活的马链球菌兽疫亚种ATCC35246株和猪链球菌2型HA9801株培养物，疫苗中各菌株至少含1109个CFU/头份.,4、全新生产工艺、副反应小,3批次疫苗接种28-35天断奶仔猪，免疫期达180天，持久不衰。,5、进口医用佐剂、免疫力持久,猪链球菌病三联灭活疫苗,国家十五、十一五科技攻关重大科研成果，防控猪链球菌病达到国际领先水平；高效三联疫苗，针对性强，疫苗菌种精心筛选自我国猪群的优势血清型代表菌 株（2、7型和C群）；抗原谱广
22、，效果显著，只需一针，就可激发机体产生180天的持久免疫。,猪链球菌三联灭活苗推荐免疫程序,建议防控措施,降低密度、规范管理、强化个性化 免疫程序 健全合理的免疫程序,中国的养猪业应该反思，肥猪为什么难养！,害怕“高热病”、“高致病性蓝耳病”，谈之色变，张冠李戴，保育后，育肥猪发病统统按高热病防控。部分基层兽医和经销商趋于“商业利益”驱动，只会海纳天空的想，缺乏脚踏实地的干、去验证，到底是什么使猪群致死率这么高。,拨开云雾见青天 应该正视、认知APP对肥猪、种猪的危害！,apxIV-PCR,种猪繁殖障碍问题，提高产健仔数和仔猪基础免疫保护力,2010年母猪群问题,我们的经验，供参考,利用猪伪狂犬病HB-98株接种，1-2次，即可使用阿莫西林等控制继发感染添加VB和Vc等，提高猪的免疫力谨慎使用安乃近等退烧药物 特别是爆发：先用替米考星+柴胡+甘草+鱼腥草连饮水10-15天；在考虑针对性疫苗,后备母猪推荐免疫程序,经产种母猪推荐免疫程序,仔猪推荐免疫程序,种公猪推荐免疫程序,
