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1、实验二：,药物中特殊杂质的检查,一般杂质：自然界中分布较广，在多种药物的生成和贮存过程中容易引人的杂质，如氯化物，硫酸盐，铁盐，重金属，砷盐等。特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。,药品中的杂质,本次实验内容,阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查,1,氢化可的松中有关物质的检查,2,盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查,3,一、阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查,生产工艺：,(CH3CO)2O,OCOCH3,贮藏水解：,OCOCH3,OH,H2O,O,O,1、杂
2、质来源,阿司匹林无游离酚羟基，不与Fe3+作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，可检出1g的游离水杨酸。,水杨酸对照液,阿司匹林,硫酸铁铵,对照液颜色 供试液颜色,实验原理,比色法：,合格,+Fe3+H2O,Fe,OH,紫堇色,2010版用HPLC法,实验步骤,1、样品前处理 取本品30片（0.025g/片），研细，用乙醇15ml分次研磨，并移入50ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤过，取续滤液。,2.00mL续滤液水稀释至50mL3mL硫酸铁铵,4.50mL0.01%水杨酸标液3mL 乙醇1.00mL酒石酸溶液水稀释至50mL3mL硫酸铁铵,50ml纳氏比色管,比较颜色，不得
3、更深（1.5%）,样品管,对照管,1.在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液所用的比色管须经干燥后使用，且供试品须用乙醇溶解后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。2.游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用现配，避免阿司匹林水解造成的误差。3.进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（pH46）中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会分解褪色。,注意事项：,二、氢化可的松中有关物质的检查,氢化可的松,天然皮质激素,甾体激素中的有关物质：1、杂质来源 原料、中间体、异构体、降解产物2、特点（1）可能存在多个甾体杂质（2）结构类似 本实验中，氢化可的松中“其他甾体”的检查采用TLC法（自
4、身稀释对照法）。,2010版用HPLC法,实验原理,供试品溶液所显杂质斑点颜色不得深于对照溶液的主斑点,方法：,供试品溶液,对照溶液,杂质,主药,不合格,杂质,四氮唑比色法：,肾上腺皮质激素药物,四氮唑盐OH,紫色斑点,实验步骤,供试品溶液和对照品溶液的制备 取本品，加氯仿-甲醇（9:1）制成每1ml中含3.0mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取适量，加氯仿-甲醇（9:1）制成每1ml中含60mg的溶液，作为对照品溶液。2.检查 吸取上述两种溶液各5l（毛细管高度约1.5cm），分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（385：60：30：2）为展开剂，展开后，晾干，在105干燥
5、10min，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。,三、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查,1、杂质来源：水解产生对氨基苯甲酸，进一步脱羧、氧化成有色杂质，使注射剂颜色变黄、疗效下降、毒性增加。,检查方法：TLC法（杂质对照法）,1、杂质对照法：,对照品：对氨基苯甲酸供试品：盐酸普鲁卡因 薄层板：硅胶H板 展开剂：苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）显色剂：对二甲氨基苯甲醛 杂质斑点与对照品主斑点比较，不得更深。,供试品,杂质对照品,杂质,主药,合格,实验原理,2010版用HPLC法,杂质已知且有杂质对照品,实验
6、步骤,吸取盐酸普鲁卡因供试液和对氨基苯甲酸对照液各10l（毛细管高度约2.0cm），分别点于同一含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上。以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。,薄层色谱操作要点,薄层板的制备,点样,展开,斑点确定,G板和H板的制备,玻璃板洗净，吹干，待用。G板：玻璃背面先贴上标签（G板），取硅胶G粉5g，加18毫升水，向同一个方向研磨混合，去除表面气泡，从中心倒入洁净玻璃板
7、，研钵棒助涂布均匀(快速)，拍板，转向，再拍板，平推，勿动！，晾干，用前烘干活化。H板：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶H粉5g，加18毫升CMC-Na，同上法制板，平推，勿动！制板完让老师看板，认可后方能离开。每人一个G板一个H板,薄层板的制备,点样,展开,斑点确定,1、点样工具为点样毛细管2、点样时，宜分次点加，每次点加后，待其自然干燥。3、点样基线距底边2.0cm，样点一般为圆点，直径2mm4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般约为1.5cm2.0cm。,薄层色谱操作要点,2cm,不要划线，以免破坏硅胶表面，毛细管轻触表面，不要捅破硅胶。,薄层板的制备,点样,展开,斑点确定,预饱和,展开中,1、先放入板，再加展开剂15mL，浸没0.5-1cm，样品点不得浸入展开剂。2、薄层板先置于盛有展开剂的色谱缸中饱和3-5min，使得展开剂蒸汽，缸内大气，薄层达到平衡，避免边缘效应3、待展开至10cm15cm，取出，晾干，按规定方法检测。4、层析缸必须密闭，否则影响分离效果。相邻两组互换层析缸，实验完毕，展开剂应回收。,
