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1、FISH技术的临床应用,荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization，FISH）,基本原理：应用荧光染料标记探针DNA，变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA杂交，在荧光显微镜下观察并记录结果。,生命科学中的“钓鱼”技术,操作流程简图,制片,预处理,FISH,结果分析,破坏细胞膜利于探针 杂交。蛋白酶消化、HCl处理,变性 杂交 洗涤 复染,制备的质量 新鲜程度,操作流程简图,标本为新鲜细胞制片：阈值建立采集20例正常人细胞。阈值测定：每例分析至少100个细胞，统计出现2个以上阳性信号细胞数目的百分比。阈值=平均数（M）+3X标准差（SD）结果判断每
2、例样本随机计数细胞（至少100个）如果检测值阈值，判定为阳性结果；如果检测值阈值，判定为阴性结果；如果检测值=阈值，加大观测样本细胞数目。,结 果 判 断,FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用FISH技术在产前诊断中的应用FISH在泌尿系肿瘤中的应用FISH技术在宫颈癌检测中的应用其它,FISH技术的临床应用,FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用,赵荣 骨髓象(CML),赵荣 血象（CML）,覃长江血象(MD/MPD),覃长江骨髓象(MD/MPD),BCR/ABL阴性(图片来自覃长江)MD/MPD,BCR/ABL阳性(图片来自赵荣)CML,陆晓逸骨髓象（CLL）,D13S25/P53基因阴性（来自陆晓
3、逸）,CSP12基因阴性（来自陆晓逸）,PML/RARa阳性(图片来自卜丽敏),PML/RARa阴性(图片来自彭志新),卜丽敏骨髓象,FISH技术在产前诊断中的应用,染色体异常的发生机率,出生婴儿 0.6%先天性智力障碍（MR）患者 23%先天性心脏病 13%SAB 夫妇 5%死胎和 围产期死亡胎儿 6.0%自然流产(前三个月)60%,唐氏综合症,21号染色体三体,95-97%多余的染色体来自母亲,唐氏综合症与母亲的年龄有关系,确切的病因不是很了解.活产新生儿发病率为1/800 to 1/1,100,唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。智能较正常儿童低，认知困难，发育
4、迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。,Turner 综合症,1个x染色体的全部或者部分丢失，只发生在女性。是最常见的染色体异常导致的疾病(活产女性新生儿发病率大约为 1/2500)身材矮小、卵巢不发育、性幼稚、蹼颈、肾脏和甲状腺有问题,骨骼畸形等生长激素治疗,雌激素替代治疗等,21+,13+,GLP13/GLP21阴性,FISH在泌尿系肿瘤中的应用,常用诊断及监测膀胱癌膀胱镜检查：病人痛苦，难以接受细胞形态学检测：敏感性低尿液中抗原检测：虽灵敏性高于细胞形态学检测，但特异性较低，不能成为可靠的诊断指标。,概 述,FISH检测：9
5、号染色体部分（如p16位点）或全部丢失。3号、7号及17号染色体的非整倍性。膀胱癌的灵敏度大约 80%,特异性大约 96%非创伤性及非痛苦性,概 述,膀胱癌FISH 探针组(一),膀胱癌FISH 探针组(二),CSP 7/CSP3阴性 CSP7/CSP3阳性,FISH技术在宫颈癌检测中的应用,传统巴氏细胞学涂片&液基薄层细胞检测(TCT）HPV病毒检测荧光原位杂交（FISH）检测,临床检测方法,三种检测方法比较,TERC（人类染色体末端酶）基因定位在3q26.3，该基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生 宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基因可能是TERC基因。该基因扩增能准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常，鉴别诊断的敏感性及特异性均在90%以上；同时，这一扩增也能预测52%96%的癌前病变有恶变的可能hTERC基因扩增的检测极有助于宫颈癌的筛查及早期诊断 检测这一基因扩增的标准方法即为FISH技术,宫颈癌&TERC基因,GLPTERC/CSP3阴性 GLPTERC/CSP3阳性,
