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1、最新新生儿先天性肾上腺皮质增生症筛查与诊断实验室检测技术专家共识先天性肾上腺皮质增生症(congenitaladrenalhyperplasia,CAH)是一种由肾上腺皮质激素合成过程中所需酶缺陷引起的常染色体隐性遗传病。按照酶缺陷类型的不同，可分为21-羟化酶缺乏症(21-hydroxylasedeficiency,21-0HD)、11除化酶缺乏症(11betahydroxylasedeficiency,11-OHD)、3降类固醇脱氢酶缺乏症(3betahydroxysteroiddehydrogenasedeficiency,3-HSD)、17-羟化酶缺乏症(17alpha-hydroxy
2、lasedeficiency,17-0HD)、20,22-碳链酶缺乏症、类固醇激素急性调节蛋白(steroidhormoneacuteregulatoryprotein,StAR)缺陷症及17%羟类固醇脱氢酶(17beta-hydroxysteroiddehydrogenase,17-HSD)缺陷症等。其中21-OHD最常见约占CAH的90%95%;1邛-OHD次之,占5%8%;3-HSD,约占1%;其他类型罕见【2，叫新生儿CAH筛查以21-OHD类型为主，本病由基因突变导致酶缺陷，继而引起皮质醇激素合成不足，经下丘脑-垂体-肾上腺轴反馈调节，促使垂体分泌的促肾上腺皮质激素(adrenoco
3、rticotropichormone,ACTH)增加，致使肾上腺皮质增生，可引起皮质醇前体物质分泌过多而出现一系列临床症状，临床以血清17-0H孕酮升高为典型特征。CAH在活产新生儿中发病率约为1/10000120000,通过新生儿筛查,及早发现患儿并及时治疗，尽可能预防肾上腺皮质危象的发生，可避免患儿脑损伤或死亡的发生，防止女性患儿由于雄激素分泌增加而引起外生殖器男性化造成的性别误判，进而预防性激素分泌异常可能带来的心理、生理发育障碍456,7O全国多个省份已经将CAH列入新生J股病筛查常规项目，但不同实验室在检测方法、筛查流程及诊断等检测技术及管理方面还存在差异，标准不-O为规范新生儿CA
4、H实验室检测技术与管理，国家卫健委临床检验中心新生儿遗传代谢病筛查室间质评委员会组织专家，经过多轮讨论，达成以下共识。一、新生儿CAH筛查目标、对象及流程(一)筛查目标通过新生儿CAH筛查，早期发现CAH患儿,对患儿进行及时干预治疗，实现对CAH出生缺陷的防控。(二)筛查对象出生72h后、充分哺乳8次以上的新生儿。(三)筛查流程按照2010版新生儿遗传代谢病筛查血片采集技术规范要求采集足跟血，测定干血滤纸片中17-羟基孕酮(17-hydoxyprogesteroneJ7-0HP)浓度，根据浓度切值，作出判断8,9。筛查阳性患儿通过进一步实验室检查进行确诊，确诊患儿及时接受治疗，推荐筛查流程见图
5、1。Mnta.rNaw祈ga.-I|1注：虚线表示备选方案；CAH表示先天性肾上腺皮质增生症;17-0HP示17a-羟孕酮；TRFIA示时间分辨荧光免疫分析法；LC-MS/MS示液相质谱-串联质谱法图1新生儿CAH筛查推荐流程二、新生儿CAH筛查及诊断实验室设置要求新生儿CAH筛查实验室应符合医疗机构管理条例、医疗机构临床实验室管理办法和医疗技术临床应用管理办法的相关要求，以规范实验室管理，保障检验质量和实验室生物安全，保证临床诊断和治疗科学性、合理性口0/1,12。此外,作为筛查及诊断实验室还应达到以下要求。(一)CAH筛查实验室设置要求新生儿CAH筛查实验室所在医疗机构资质、技术人员资质以
6、及实验室的设置应符合新生儿疾病筛查技术规范(2010)的要求网。(二)CAH诊断实验室设置要求新生儿CAH诊断实验室在实验室人员设置、工作区域及仪器配置、数据解读、质量控制等方面应遵从医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法的相关规定口3o三、新生儿CAH筛查(一)筛查方法选择CAH筛查主要的方法有ELISAs时间分辨荧光免疫分析法(time-resolvedfluoroimmunoassay,TRFIA)及液相质谱-串联质谱法(IiqUidphasemassspectrometry-tandemmassspectrometryzLC-MSMS藤。新生儿CAH一级筛查常用方法为TRFIA,此方法
7、具有较高的特异度与灵敏度的优点。新生儿CAH二级筛查常用方法为LC-MS/MS法筛查。（二）TRFIA法检测原理及流程1检测原理:采用固相二抗抗原竞争法，固相上带有第二抗体,血片中17-0HP与示踪物Eu+标记17-OHP共同竞争第一抗体结合，形成的抗原-抗体复合物，同时被固相第二抗体结合,在微孔表面形成二抗-一抗-抗原-EU复合物。经洗涤除去剩余Eu+标记17a-OHP,加入增强剂，分离结合在固相上的Eu,并与其形成强荧光螯合物,然后进行测定，标本中17a-OHP浓度与荧光强度呈反比。2.检测流程：按照各商品化试剂盒说明书完成。（三）LC-MS/MS法检测原理及流程1.检测原理：CAH二级筛
8、查采用LC-MS/MS技术，用含内标d8-17羟基孕酮（d8-17-hydoxyprogesterone,d8-17OHP）和d2-皮质醇的萃取液将血斑中的17a-OHP、Il-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇、皮质醇和雄烯二酮洗脱出来，经过高效液相色谱柱进行分离后,进入质谱采用多反应监测模式进行数据采集，完成各个检测物的定量9。2检测流程：尚无商品化试剂盒。实验室采用LC-MS/MS技术进行CAH筛查时，宜采用内标法，根据内标的浓度定量分析目标物的浓度。同时所采用设备应满足基本的性能要求，液相分离部分：宜采用dC183m,2.1mm20mmIS色谱柱与C184.0mm2.0mmODS预色谱柱进行
9、色谱分离后再进入质谱进行检测；质谱检查部分：毛细管电压3.5kV,离子源温度120z去溶剂气温度300C,真空压不低于-2.2X103mbaro(四脸测程序的确认及验证筛查实验室应当对采用的检测系统的性能进行验证或确认，评估结果与操作说明书一致，才可以用于临床服务。性能验证时需包含精密度、准确度、线性范围等评价指标；其中批内不精密度和批间不精密度应分别小于最大允许误差的1/4和1/3评价准确度时符合标准的检测值通过率应80%,达到卫建委室间质评的基本要求；线性范围评价时,对线性回归方程Y=aXb及相关系数R2的要求为，R20.95,a在0.97-1.03范围内。评价方法参见美国CLSI关于精密
10、度(EP15-A,EP5-A)、准确度(EP9-A2)、线性范围(EP6-P)、干扰实验(EP7-P)等的评价指南14。实验室自建方法，临床应用前应进行方法确认，通过确认的方法才能用于筛查。方法确认的考核指标，应包括基质效应、干扰试验、线性、精密度、正确度、特异度和携带污染；在进行正确度评估时，应完成回收率、方法比较、仪器间比较等分析；考核标准参考检测程序的验证部分。经过验证或确认的检验程序其标准操作规程发生变化、仪器被重新组装、发生严重检测失败事件采取重大纠正措施后检验程序需要重新完成方法学评估且结果达到要求、经实验室质量负责人确认后方能再次使用。(五尾果判读新生儿血17-OHP浓度的参考区
11、间值因出生体重、孕龄、检测方法以及检测平台而异。各筛查中心可根据本地筛查统计资料、检测方法及平台等制定合理的参考区间值具体方法可参考美国临床实验室标准化委员会(CLSI)关于临床实验室如何确定和建立生物参考区间的标准与指南(2000)15o1.TRFIA法筛查结果判读：基于自动免疫测定系统及配套新生儿17-OHP测定试剂盒（时间分辨荧光分析法）测定新生儿足跟血17a-0HP浓度参考值，见表1,供参考。实验室在进行筛查实验时，仍需要对参考值进行验证，必要时自建。基于其他改良方法或平台进行筛查时，各筛查中心应根据本地筛查数据优化参考值的设定16,17,18I*2Po-or*n9（niMM)aMMm
12、al3QgxM)M1H*2WMIM*IIOTIMIA*IX-JWK-13M.g*mQXwISOAlM*M4sAU4-U三*a三*t75SEi*4,J“EW皿ftS9i221r.,osW1fi夹IMAHr,u4-SE38%2S犬MoSIOAM9W八七”大”2-5VAM2SKITcKMDOPlWeWXETCZft三gr三Ixw*aM三三mft.2e-4dmQ11H*11MM12M）*msot3Mmmuum*9sv*f五、质量控制实验室应建立适当的质控规则以监控系统误差和随机误差选择合适的质控品，做好质控记录，定期进行质控分析，失控时提出、实施纠正措施,并进行持续跟踪和监控筛查实验室应参加卫健委临床检验中心组织的室间质量评价来评价本实验室检验能力,针对新生儿CAH筛查、诊断等不同环节加强质量控制（表4）22,23;实验室质量控制指标应参考新生儿遗传代谢病筛查质量指标共识（2017）进行设置24。4餐雯儿3GS9m,鬼.本共识旨在为CAH的新生儿筛查及诊断方法提供参考，通过在CAH高发地区开展产前健康教育、CAH筛查与确诊，以提高新生儿筛查的覆盖率，预防和降低CAH对患儿生理和心理造成的影响，提高人口素质。现行CAH新生儿疾病筛查技术仅能筛查出约70%患儿,因此建议有条件的单位开发更多筛查新技术，如串联质谱法筛查，以降低CAH筛查的假阳性，提高确诊率,提升CAH筛查效益。
