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1、Bl5内蒙古自治区地方标准DB15代替DB15/T147-1994牛环形泰勒虫病防制技术规程TechnicalSpecificationforPreventionandControIofBovineAnnuIarTaylorDisease（征求意见稿）20XX-XX-XX 发布20XX-XX-XX实施内蒙古自治区市场监督管理局本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替DB15/T147-1994,与DB15T1471994相比主要变化如下：一修改了范围（见第1条）一增加了规范性引用文件（见第2条）一增加了术语和定义（见3.1和3.
2、2）一增加了生活史、传染源、易感动物、传播途径（见4.1.1、4.1.2、4.1.3和4.1.4条）一增加了病原学诊断媒介婢的检查鉴定牛环形泰勒虫病PCR诊断（见4.4、4.5和4.6）一修改了防制措施，改为预防、细化了相关内容（见6条）-增加了附录（见附录A、B、C、D、E、F）本文件由内蒙古自治区动物疫病预防控制中心提出。本文件由归口。本文件起草单位：内蒙古自治区动物疫病预防控制中心本文件主要起草人：秀英、王建龙、特木尔巴根、刘占喜、贾皓、张雪玲、于富丽、王清、阿荣、樊凤娇、陈设、牧仁、杨海燕牛环形泰勒虫病防制技术规程1范围本文件规定了牛环形泰勒虫病的术语，定义，诊断，治疗，预防的技术要求
3、和规范。本文件适用于养牛场(户)，动物诊疗机构和动物预防控制机构对牛环形泰勒虫病的防控。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义3. 1牛环形泰勒虫病BOVineTheiIeriosis是由泰勒虫属的环形泰勒虫(Theileriaannulata)寄生于动物红细胞和网状内皮系统、器官而引起的一种婢传血液原虫病，也称焦虫体病或血抱子虫病，该病通常以急性的方式发作，好发生于奶牛和黄牛,本病属于国家二类动物疫病。本病的主要临床症状为稽留热、贫血和血虫症，其死亡率高，因此,必须重视牛环形泰勒虫的综合防治，以促进牛养殖业的健康发展。3.2环形泰勒虫TheiIeriaannuIata环形泰勒
4、虫(Theileriaannulata),隶属于原生动物门(Protozoa)x复顶亚门(APieOCOnIPleXa)梨形虫纲(Piroplasmea)、梨形虫目(Piroplasmida)、泰勒科(Theileriidae)、泰勒属(Theileria)的环形泰勒虫(Theileriaannulata)04诊断3.1 流行病学3.1.1 生活史在一些地区，地势低洼较多，容易积水形成牛环形泰勒虫病经婢传播而感染，属于宿主细胞转化类型，该病经硬婢传播而感染。3.1.2 传染源泰勒虫病不能经虫卵传递，也无法相互接触传递，只能通过中间宿主婢进行传播。本病的传染源包括潜伏期感染、隐性感染牛、带虫牛和
5、媒介蜂虫。3.1.3 易感动物易感动物包括奶牛、黄牛、耗牛等各种品种的牛类动物。3.1.4 传播途径婢在病牛身上吸食血液时，把带有虫体的红细胞吸入体内，在婢体内，虫体发育成子抱子，悔再次吸血时，子抱子随着婢的唾液进入牛体，并寄生于淋巴结，脾脏，肝脏等网状内皮细胞内进行发育繁殖。在这个过程中，只有小裂殖子才能进入红细胞变成配子体，即虫体。4. 1.5流行特点本病的流行具有明显的季节性，一般是在婢活动最强的季节流行，与婢的季节动态有密切关系，从5月份开始，7月份达到高潮，8月份渐平息。本病的死亡率为6%-60%,其急性病例死亡率较高。牛环形泰勒虫病的感染程度因不同地区的气温、湿度、植被和媒介婢种类
6、及其活动季节等因素而存在差异，耐过牛的免疫力可持续（2.5-6）年，长期“带虫”；其急性病例死亡率较高。在环形泰勒虫广泛流行的区域，1-3岁的牛染病较为多，当年新生的犊牛以及4岁以上的牛均可发病。3.2 临床症状4. 2.1发病初期症状病牛体温升高至39C41.8C,达42,呈稽留热，少数病牛呈弛张热或间歇热，染病初期病牛体温显著持续升高，精神不振，食欲减退，离群落后，不愿走动，多卧少立，时常咳嗽，流鼻涕，呼吸急促，脉搏加快，眼结膜充血，有大量浆液流出，出现贫血，四肢，胸前及腹下肿胀。淋巴结肿大有痛感，呼吸、心律数增加；在红细胞内发现少量的虫体；淋巴结穿刺可见柯赫氏蓝体（石榴体），此期可延续2
7、d5do5. 2.2发病中期症状病畜精神极度沉郁萎靡，采食量明显下降或废绝，反刍减缓甚至停止，瘤胃蠕动缓慢，聋耳垂头，呈俯卧状，头常偏向腹侧弯处，可视粘膜充血，便秘、腹泻交替，粪便常带粘液或血，尿液呈黄色，无血尿，当病牛体温上升到40时，鼻镜干燥，病情严重时，眼睑下方有出血点，颈部波动明显，同时心脏波动冲击感强烈，浊音区面积增大，肌肉颤抖，病牛走路摇摆，体重迅速消瘦；体表淋巴结肿胀，血液稀释，血沉加快，红细胞染虫率逐步增高。6. 2.3发病后期症状病牛症状急速恶化，甚至停止采食，反应比较迟钝，病畜食欲废绝，反刍完全停止，卧地不起，部分妊娠母牛乳头和乳房显著缩小，造成产奶量低，严重者停止泌乳，病
8、牛心音异常响亮，亢强，在其腹壁即可听到心音，在眼睑、尾根和稚嫩的皮肤上出现粟粒以至扁豆大小的深红色结节状的溢血斑点，趋于死亡征兆，死亡常发生在发病后的（12）周；耐过的牛，若能得到良好的护理，病情逐渐好转，自愈后成为带虫牛。7. 34.3病理变化通过剖解病死牛，在全身皮下、黏膜和肌间可见出血斑或出血点，全身淋巴结肿大，有大小不同的结节，呈深红色或灰白色，切面多汁，胸腔内积聚大量红色渗出液，心肌弥漫出血点，心房存在出血斑,心脂肪有出血斑或出血点，肺脏表现出水肿和气肿，肺门淋巴结明显肿胀。瓣胃变硬，无法剖开，皱胃黏膜明显肿胀，并有深红色或黄白色的结节，皱胃结节处上皮细胞坏死产生溃疡病灶。脾脏明显肿
9、胀，被膜上有出血点，脾髓质的质地变软，呈黑色糊状。肾脏肿胀明显，质地较软，有深红色的病灶，外膜易剥离。肝脏显著肿大，呈暗红色，质地变脆，被膜上有出血斑与出血点，肝门淋巴结明显肿胀，胆囊显著肿大，胸腔内及皱胃黏膜有溃疡斑；脾脏、肝脏、肾脏肿大，肺有水肿和气肿，被膜有出血点；严重病例粘膜病变面积可占1/2以上；尸僵明显，尸体消瘦，全身皮下、肌间、粘膜上均可见大量的出血点和出血斑；红细胞溶血、血项有不同程度变化。血液呈浅红色，较稀薄，不易凝固。8. 4病原学诊断病原学诊断包括血液型虫体的鉴定和组织型虫体（网状内皮系统内虫体）的鉴定。9. 4.1血液型虫体的鉴定经血液涂片染色，在显微镜下检查发现血液型
10、虫体是确诊的主要依据（镜检方法详见附录A）4. 4.2组织型虫体的鉴定该病的初期，虫体一般侵袭患病宿主的网状内皮系统（淋巴结、脾脏等），检查发现脏器型虫体也是确诊依据。制作涂抹片（制作方法见附录A）后在显微镜下观察到与附录E相同的“石榴体”可判定为感染牛环形泰勒虫病。4.5 媒介婢的检查鉴定4 .5.1牛体表媒介婢检查鉴定重点检查疑似牛的耳、颈部、腋下、腹部、股内侧、尾根等部位是否硬婢叮咬。采集时假头易拨断，需轻轻摇动，然后顺势拔下，除采集吸血饱满的雌婢外，也要采集雄婢、若婢和幼婢C将每头牛体表采集的婢虫放入相应编号的采集管内，以平均只数/牛个数计算密度（详见附录B）。送回实验室，进行鉴定媒介
11、婢种类及检测其携带的病原。如发现牛体表有与附录F相同的媒介婢虫即可判断为该牛疑似患有环形泰勒虫病。5 .5.2牛圈等环境中媒介婢检查鉴定采集牛圈等环境的硬悔时，重点检查天花板、墙缝内、土和砖块下，使用镜子采集。草场、运动场等野外采集婢虫时常用布旗法、兽皮法采集（详见附录B）；在牛体表、周围环境及植被中发现媒介婢虫（详见附录F）是确诊的主要依据。4.6 牛环形泰勒虫病PCR诊断根据PCR检测结果判定（详见附录C）。5治疗牛环形泰勒虫病高发病率和高死亡率给养牛业带来了严重的经济损失，严重阻碍了畜牧业的健康发展，近年来，由于耐药性寄生虫的进化和传播以及疫苗的缺乏为寄生虫的控制和消除带来极大挑战，早发
12、现早治疗是目前解决该病的方法4.7 治疗原则早期准确诊断、及时隔离治疗为主；切断媒介硬婢的持续叮咬；急性病例隔离或淘汰处理；亚急性、慢性病例药物治疗辅助对症治疗；养殖场（户）需要在日常中对牛舍（圈）以及牛活动的地方进行消毒杀菌，从而达到灭悔的目的，加强对牛的饲养、护理，提高牛的抗病能力。4.8 治疗方案5. 2.1菜油防治生菜油IOog,用干净的棉球蘸上菜油涂抹牛患处，连续用一个月。1. 2.2药物治疗5. 2.2.1西药治疗黄色素剂量为每千克体重3-4毫克，配成0.5-1%的溶液，静脉注射，症状未减轻时，24小时后再注射一次，如果患牛是严重贫血的，用维生素补血。血虫净（贝尼尔）注射剂，患牛按
13、每千克体重使用3-5毫克，与适量注射水或者生理盐水混合制得浓度为5%的药液，选在臀部或者是颈部进行分点深层肌肉注射，每天注射一次，连续用药3-4天。需要注意的是，该药安全范围小，毒性较大，即使是治疗量也可造成机体有不良反应，如不安、流泪、流涎、呼吸加速、采食停止、频繁起卧、肌肉震颤等，因此，必须慎重用药，尤其是对于患病的妊娠母牛最好不使用该药治疗，建议使用黄色素。采用贝尼尔按7mgkg的剂量，严格计算用药量，配成10%溶液，分左、右两侧臀部两点作深部肌肉注射。每头牛注射贝尼尔前先颈部肌肉注射5ml安钠加，给予强心;当牛高热严重、精神不振的，可给予强心、补液、抗菌治疗的同时，采用葡萄糖生理盐水5
14、00ml、安钠咖5nd、青霉素和链霉素进行输液。每隔48小时重复用药1次，连用3次恢复体能。取5001000mL25%葡萄糖、IoOOmL葡萄糖氯化钠,2-4克维生素C,40支0.1g肌昔,30支20mgATPf混合均匀后静脉注射，每天1次。危重病牛救治。如果牛体温降低，呼吸困难，心跳加快，卧地不起，要采取升温，输氧，强心，常需皮下注射2011）L101的樟脑磺酸钠;静脉注射由500mL25%葡萄糖，30mL双氧水组成的混合药液；静脉注射50OmLl0%的葡萄糖，2-4g维生素C,30支20mgATP、40支0.Ig肌昔组成的混合液；静脉注射由5%葡萄糖500mL,2支IOmL生脉注射液组成的
15、混合液。对于严重贫血的病牛要尽快进行输血从而实现有效救治。6. 2.2.2中药治疗中药可可取30g黄黄、40g大黄、60g熟地黄、60g苍术、50g白头翁、60g金银花、30g茵陈、30g百部、60g贯众、20g枳实、50g山药、60g夏枯草、30g槟榔、40g生甘草，加水煎煮，每天1齐!I,连续使用35天。补血健胃。病程后期可取100g党参、150g炙黄、40g熟地、30g当归、40g白术、30g云苓、60g山药、40g枸杞、焦三仙各60g、30g甘草、8枚大枣，加水煎煮，每天1齐上6预防6.1 药物预防在流行区的发病季节前，用黄色素和贝尼尔给牛进行药物注射（参考5.2）,可以预防此病的发生
16、。6.2 综合防制7. 2.1严格引种调运牛应选择无婢活动的季节，转运前要进行一次灭婢处置，到场隔离观察饲养30-60天后，确定健康后，混合饲养。8. 2.2及时除虫当放牧的环境中有大量婢虫存在时，可以进行轮牧，每隔1-2年轮牧一次，使牧场上的成虫自然死亡，达到预防的作用。1.3 灭婢6. 3.1人工灭婢发现牛体表有较大婢虫体叮咬于牛体上不活动时，如寄生虫数量不多，可用银子小心摘除并焚烧捕捉的婢虫。除此之外，还可用氯仿、乙醛、煤油、松节油活用凡士林、液体石蜡涂在婢虫的头部，使其窒息，达到一个人工灭婢虫的目的。7. 3.2药物灭婢当寄生于牛体表的婢虫数量较多时可将2%双甲眯配成80PPm浓度喷洒
17、牛体表；有些婢虫在非寄生时，藏身在牛舍的墙缝或是饲槽，这时可先向缝内喷入1%的敌百虫液，再用水泥或石灰堵塞裂缝，这样也可达到一个灭婢虫的作用。伊维菌素注射液按0.2mg/kg体重计量进行皮下注射给药；也可用伊维菌素泼背剂按0.5mg/kg体重经背部皮肤浇泼给药。8. 3.3环境改造灭婢婢虫喜欢趴附在三叶草等，在圈舍附近清楚苜蓿草可减少蜂虫的孳生；在蜂虫出没的季节进行离旧圈（防圈舍牌）和避开媒介婢孳生地放牧。1.4 定期监测6. 4.1驱虫每年5-8月为我区牛环形泰勒虫病高发季节，每月采集牛血和环境周围的媒介婢提取DNA后，采用PCR法进行检测，一经发现阳性病例及时治疗；同时每年在发病季节，采用
18、上文提到的多种方法进行计划性灭婢。7. 4.1.1体外驱虫伊维菌素注射一次，间隔3-5天再注射一次，采用皮下注射。8. 4.1.2体内驱虫体外驱虫完毕后3-5天，用左旋咪嘤、丙硫咪嘤、阿苯达嘎（任选两种），分别使用一次，两种药物间隔3-5天06.5提高牛抗病能力对患病牛，改善饲养环境，完善圈舍卫生、防婢措施和护理；对非疫区、疑似牛采取综合防御措施，加强驱虫保健。附录A（规范性）病原学诊断方法A.1血液型虫体鉴定方法A.1.1主要设备、材料和试剂冰箱、离心机、光学显微镜、体视显微镜、移液器、吸头、离心管、载玻片；无菌注射器或真空采血管、EDTA溶液、抗凝剂、染色液等。A.1.2血液样品采集从疑似
19、牛类动物耳尖或尾根部无菌采血约Iom1,分别加入到含有抗凝剂EDTA溶液的抗凝管（用于血液涂片和核酸提取）和不含抗凝剂的采血管内（用于分离血清），-20C保存待检。A.1.3溶液配制A.1.3.1姬姆萨染液：见附录DA.1.4操作方法A.1.4.1取采集的血液样品1滴，将血液置载玻片一端，另取一张边缘光滑的推片，让推片边缘和血液接触，使血液全部与推片边缘重合散开，推片和载玻片保持30角，向前平稳均匀推动推片，载玻片上便留下一层薄血膜。A.1.4.2血涂片制成后，待血膜自然干燥后，在血膜表面滴加甲醇进行固定。A.1.4.3待甲醇在空气中干燥后，对血膜进行染色。将姬姆萨染液滴加在血膜上，使血膜被染
20、液覆盖,染色30min0A.1.4.4染色30min后，用清水轻轻洗去载玻片表面的染液，待载玻片表面干燥后用铅笔或标签纸在血膜的另一侧进行编号。A.1.4.5显微镜下检查在干燥后的血膜表面滴加一滴松柏油，将血膜放在100倍的显微镜下进行观察，当镜下发现与附录E相同的典型血液型虫体即可判定为阳性。A2组织型虫体鉴定方法A.2.1主要设备、材料和试剂参见.1.1A.2.2活体和死亡牛淋巴、组织样品从疑似牛类动物的肩前淋巴结或腹股沟淋巴结进行无菌穿刺，用干燥注射器抽取淋巴内容物；也可无菌采集淋巴结、脾脏等用于制作抹片样品。病死动物采样时，死亡时间不超过24h,采集脑、淋巴结、心、肝、和脾等脏器组织样
21、品，样品在4左右条件下迅速送达实验室。A.2.3溶液配制参见.1.3.IoA.2.4操作方法A.2.4.1将载玻片轻轻触碰脏器切面或轻推淋巴液使淋巴液在玻片上形成一张薄的膜。A.2.4.2涂抹片制成后，待自然干燥后，在涂抹片表面滴加甲醇进行固定。A.2.4.3待甲醇在空气中干燥后，对涂抹片进行染色。将姬姆萨染液滴加在血膜上，使涂抹片被染液覆盖，染色30minA.2.4.4染色30min后，用清水轻轻洗去载玻片表面的染液，待载玻片表面干燥后用铅笔或标签纸在涂抹片的另一侧进行编号。A. 2.4.5显微镜下检查在干燥后的涂抹片表面滴加一滴松柏油，将血膜放在100倍的显微镜下进行观察，当镜下发现与附录
22、E相同的典型“石榴体”即可判定为阳性。附录B（规范性）牛体重估测法及媒介婢的采集法B. 1体重估测公式二胸围MX体长iX90=体重kg注：胸围是从肩胛后角围绕胸围一周的长度；90指成年牛系数B2布旗法（人工小时布旗法）：用大小的白绒布旗，在有媒介婢地带进行定时拖婢。操作时，手持旗杆伸向一侧，使旗子平铺于草丛上，以等速缓步向前行，每步行Iom停下观察一次，将附于旗上的蝉捡入采集瓶内。每面旗子整个过程共进行lh。B.3媒介婢种群组成（优势种群）（Dr）=（NiN）xlOO%注：N为家畜体表寄生婢总个体数，Ni为某种婢的个体数B4兽皮法：用屠宰动物的新鲜皮（牛、羊等动物皮，粘膜面朝上，被毛面朝下）代
23、替布旗，在有媒介婢地带进行定时拖婢。拖皮行走每隔50m100m检查一次兽皮，收集其上黏贴的婢虫。附录C（规范性）牛环形泰勒虫病PCR检测方法C.1主要设备、材料和试剂高速冷冻离心机、PCR仪、恒温水浴锅、混匀器、冰箱、移液器（10uL,100uL1100OpL）,吸头（IoUL,100ULIOoOUL）、PCR反应管、无菌注射器或真空采血管。C.2样品采集、保存从疑似牛类动物耳尖或尾根部无菌采血约Ionl1,分别加入到含有抗凝剂EDTA溶液的抗凝管（用于血液涂片和核酸提取）和不含抗凝剂的采血管内（用于分离血清），-20C保存待检。提取核酸（详见附录C）,-2OC保存待检。C.3PCR诊断步骤C
24、.3.1特异性引物序列设计上游引物：51-TTCGTTATCTCATCCGTT-3下游引物：5-ATACTTGGCATTGnTGGTC. 3.2PCR扩增反应体系的确定表C.1PCR扩增反应体系试剂名称储备液浓度25UL反应体系50L反应体系IOxPCRbuffer（不含Mg2+）2.5/UL5/ULVgCl225mmol/L1.5/L3/PLdNTPs2.5mmol/L2/LVpLaqDN聚合酶5ULO.2/L0.4/L上游引物Fl10pmol/L1/UL2/HL下游引物Rl10pmol/L1/UL2/ULDNA模板2.0/uL4.0/L加DEPC至25/L50/LIOxPCRbuffer（
25、不含Mg2+）2.5/L5/PLPCR反应参数：95C预变性5min；94C变性30s,退火时间为InIin,72延伸InIin,30个循环；72C延伸IOnlin,4C保存。PCR反应循环参数可根据基因扩增仪型号的不同进行适当调整；设计阳性对照（牛环形泰勒虫DNA）、阴性对照（健康牛组织DNA）和空白对照（无菌双蒸水）。C. 3.3PCR反应产物凝胶电泳及判定结果用IXTAE电泳缓冲液配制L2%的琼脂糖（含100u1/L荧光染料），在电泳槽中加入电泳缓冲液，使液面刚好没过胶面，将5uLPCR产物和IuL6xLoadingbuffer混匀后加入样品孔内，电泳时以DLMarker2000作为对照
26、，5Vcm电泳时间约30min；凝胶成像仪下观察电泳结果，拍照并记录结果，其PCR诊断用试剂详见附录D。检查到目的条带（电泳斑）作为诊断依据。附录D（规范性）病原学鉴定、核酸提取、PCR等主要试剂溶液配方D.1病原学鉴定试剂溶液的配方D. 1.1EDTA溶液（1mgmL）二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2-2H20）1.1g加800mL生理盐水于5560水浴中溶解，冷却后生理盐水定容至1L,121高压灭菌15min,室温保存。D.1.2复合染料I瑞氏粉2g姬姆萨尔色素l7g置研钵中，加50ml甘油研磨调成均匀糊状后缓慢加入少量甲醇，研磨片刻将上层液体移入棕色试剂瓶内，再加少量甲醇，继续研磨
27、，再吸出上层染液，如此连续几次，共用甲醇100OnI1。每天震荡棕色试剂瓶内液体（2-3）次，每次2min3min.一周后使用效果更佳。D.1.3复合染料11磷酸二氧钾（无水）0.3g磷酸氢二钠（无水）0.23g置于烧杯中，加入少量蒸僧水溶解，用磷酸盐缓冲液调PH至（6.56.8）后加水至100OnI1。D.2核酸提取、PCR等主要试剂溶液配方D.2.1核酸提取D.2.1.1血样中核酸提取1）离心管内加入吸200HL全血、20UL蛋白酶K和200ULBUfferAL,振荡混匀15s,56C孵育IOmino加入200L无水乙醇，振荡混匀。2）将QIAamPspinCoIUnln和collecti
28、ontube组合，上一步骤中制备的液体移入QlAamPspincolumn中，600Og离心Imin,小心弃去滤液。3）将QTAampspincolumn与新的collectiontube组合，力口500ULBufferAWl,6000g离心1min,小心弃去滤液。4）将QlAampspincolumn与新的collectiontube组合，力口500ULBufferW2,18000g离心3min,小心弃去滤液。12000g离心Imin去除残留溶液。5）将QlAainPspinColUmn与新的1.5mL离心管组合，小心加200ULBufferAE于膜中央，室温放置lmin,6000g离心Im
29、in洗脱DNAOD.2.1.2组织样中核酸的提取I）Ioomg样品放入1.5mL离心管中，加入700HLCTAB提取液，振荡混匀后于65温育30min,期间颠倒混匀。加入700HLTriS-酚-三氯甲烷-异戊醇（25：24：1）,涡旋振荡混匀后放置IOmin1期间颠倒混匀，12000r/min离心IonIin转移上清至新的L5mL离心管中，加入0.6倍4C预冷的三氯甲烷-异戊醇(24:1),混匀后于-20C下静置5min,12000r/min离心5mino4)转移上清至新的1.5mL离心管中，加入2倍CTAB沉淀液，室温放置30min,12000r/min离/D5mino5)弃上清液，加入35
30、0ULNaCl(1.2molL)溶解沉淀，65温育IOnIin,加入350IlL三氯甲烷-异戊醇(24：1),混匀，12000rmin离心5min6)取上清液，加入0.6倍4C预冷的异丙醇，颠倒混匀后，于4放置30min,4下12000r/min离心5min,小心弃去上清。7)加入InIL经4预冷的75%乙醇，倾斜离心管，轻轻转动数次，4C下12000rmin离心5min,小心弃去上清；然后用4C预冷的75%乙醇按相同的方法重复洗一次。8)室温下或核酸真空干燥系统中干燥液体，干燥后加入50UL去离子水溶解核酸，-2Oc保存。D2.2PCR诊断用试剂D.2.2.110xPCRBufferTris
31、-HCl(0.2molLpH8.4)KCI(0.2molL)混匀后121高压灭菌15min,-20保存即可。D. 2.2.2TE缓冲液Tris(lmolLpH8.0)IOmLEDTA(0.5mol/LpH8.0)2mL加水定容至IL121高压灭菌15min,4保存即可。E. 2.2.3TAE电泳液(50x)Tris242g冰乙酸57.ImLEDTA(0.5mol/LPH8.0)100mLddH20补充至IL使用时用去离子水稀释至IX的TEA电泳液。附录E（资料性）牛环形泰勒虫病原形态图E.1牛环形泰勒虫血液型涂片图E.2牛环形泰勒虫石榴体图E.3网状内皮细胞中的石榴体在网状内皮系统的细胞中形成石榴体附录F(资料性)牛环形泰勒虫病主要媒介蝉种类F.1璃眼婢类(HyalommaSpp.)F.1.1亚洲璃眼l(Hyalommaasiaticumasiaticum)F.1.2小亚璃眼蟀(HyaIommaanatolicumanatolicum)F.1.3残缘璃眼蝉(Hyalommadetriturn)F.2革婢类(DermacentorSpp.)F.2.1森林革婢(DermacentorsiIvarum)F.3血蝉类(HaemaphysaIisSpp.)F.3.1丹氏血蝉(Haemaphysalisdanieli)
