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1、人丙二醛（MDA）E1.ISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和、唾液生物体液内）原理本实验采用双抗体夹心ABC-E1.lSA法。用抗人MDA单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的MDA与单抗结合，加入生物素化的抗人MDA,形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的StrePtaVidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，MDA浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中MDA浓度。试剂盒组成（28C保存）酶标板(CoatedWells)96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12mlIoX标本稀释液(SampleBuffe
2、r)12ml20X浓缩洗涤液（WaShBuffer）50ml标准品(StandardS)：400Onmol/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml第一抗体工作液(BiotinylatedAntibody)12ml终止液(StOPSolUtion)12ml准备试剂与收集血样1 .收集标本：血清、血浆（肝素抗凝）、细胞培养上清液、尿液、唾液等尽早检测，2-8C保存48小时；更长时间须冷冻（-20或-70）保存，避免反梵冻融。血清、血浆、细胞培养上清至少作1:50稀释（取20ul,加标本稀释液9803,稀释50倍）。2 .标准品液配制：使用前加入2ml蒸馀水混匀，配成200OnmoI/m
3、l的溶液。设标准管8管，第一管加标本稀释液900U1.第二至第八管加入标本稀释液500u1.在第一管中加入20OOnmOI/ml的标准品溶液100Ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出50OUl弃去。第八管为空白对照。3 .IoX标本稀释液用蒸储水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸储水）4 .洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1 .加样：每孔各加入标准品或待测样品100iJI,将反应板充分混匀后置37C120分钟。2 .洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3,每孔中加入第一
4、抗体工作液100lJI。将反应板充分混匀后置37C60分钟。4 .洗板：同前。5 .每孔加酶标抗体工作液100UI。将反应板置37C30分钟。6 .洗板：同前。7 .每孔加入底物工作液100ul,置37C暗处反应15分钟。8 .每孔加入100IJl终止液混匀。9 .30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1 .所有OD值都应减除空白值后再行计算。2 .以标准品200、100、50、25、12.5、6.25.3.12.OnmOl/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3 .根据样品OD值在该曲线图上查出相应MDA含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：最小的MDA检测浓度小于1.5nmolm1.2 .特异性：可同时检测重组或天然的人MDAo不与人其它细胞因子有交叉反应。3 .重复性：板内、板见变异系数均小于10%。注意事项1 .以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2 .洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。3 .板条开封后剩余板条要再封好，保持板条壬燥4 .本试剂盒宜置4。C冰箱保存。5 .本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
