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1、糖发酵试验一、目的1 .了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。2 .把握通过糖发醉鉴别不同微生物的方法。二、原理多糖？单糖？丙酮酸？酸性产物（或产酸产气）?ph下降？指示剂呈酸性变色（若产气者有气泡消失）。不同的细菌可依据分解采用糖力量的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培育基中加入指示剂（通常为浸甲酚紫，即b.c.p,其Ph在5.2以下呈黄色，Ph在6.8以上呈紫色），经培蔚后依据指示剂的颜色变化来推断。是否产气可在发酵培育基中放入倒置小倒管观看。不同的微生物具有发酵不同糖（醇）的酶类，所以发酵途径及发酵产物各不相同。例如：大肠杆菌能使乳糖发酵，产酸产气，
2、而伤寒杆菌则不能；大肠杆菌能使葡萄糖发酵，产酸产气，而伤寒杆菌则只产酸、不产气。糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能采用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的力量上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；一般变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发酵培育基含有蛋白陈，指示剂（浸甲酚紫），倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，浸甲酚紫指示剂可由紫色（ph6.8）变
3、为黄色（ph5.2）o气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。三、器材1 .菌种大肠杆菌，一般变形杆菌斜面各一支。2培育基葡萄糖发酵培育基试管和乳糖发酵培育基试管各3支（内装有倒置的德汉氏小管）。3仪器或其他用具试管架，接种环等。四、操作步骤1 .用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培育基名称和所接种的细菌菌名。2取葡萄糖发醉培育基试管3支，分别接入大肠杆菌，一般变形杆菌，第三支不接种，作为对比。另取乳糖发酵培育基试管3支，同样分别接人大肠杆菌，一般变形杆菌，第三支不接种，作为对比。在接种后，轻缓摇动试管，使其匀称，防止倒置的小管进入气泡。3将接种过和作为对比的6支试管均置37。信育24
4、48ho4.观看各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡。篇二：发酵实习试验报告第一部分、试验部分试验一、酸乳的制作一、试验目的1、把握酸乳的制作方法、基本原理；2、了解发酵剂制备过程中的操作要点；3、对最终产品进行感官评定及理化检测，并进行品质比较。二、基本原理酸乳也成为酸牛奶，是人们喜爰的饮用发酵乳。所渭发酵乳、鲜乳或乳制品等主要原料添加乳酸菌，发酵以后形成的具有特别风味的乳制品。乳经过发酵制成发酵乳以后养分价值提高，发酵乳中的蛋白质、钙盐简单消化汲取，具有消化、抑制肠道内特别的发酵和杀死肠道中的有害菌的作用。酸奶是以牛奶为原料经过均质、消毒、发酵等过程加工而成的。酸乳的品种很多，依据发酵工艺
5、的不同，可以分为凝固型酸乳和搅拌型酸乳两大类。凝固型酸乳在接种发酵菌株后，马上进行包装，并在包装容器内发酵、成熟。搅拌型酸乳先在发酵罐中接种、发酵，发酵结束后在进行无菌灌装并后熟。其基本原理就是通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中酪蛋白（约占全乳的2.9S，占乳蛋白的85%）变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。同时，通过发酵还可以形成酸奶特有的香味和风味，本试验主要学习凝固型酸奶的制作方法。三、试验材料1、材料：纯牛奶、白糖、酸牛奶2、仪器：电炉、水浴锅、电子天平、恒温培育箱、相关玻璃器皿四、试验步骤Is取2000ml纯牛奶放入锅中加热；2、当达到肯定温度后，依据83的比例加入160g
6、白糖，搅拌溶解3、将牛奶加热到9OoG4、小组分装，每个三角瓶中加入50ml的牛奶，5、将分装好的牛奶放到95。京水浴锅中，灭菌5mim6、冷却到45在酒精灯下，接种适量的酸牛奶（一勺），并搅拌匀称，封好口；7、在37儆温箱中保温培育2-4h,8、转入0-4Gk箱中冷藏保存；9、品质鉴定五、试验结果品质鉴定：1.色泽：色泽匀称全都，呈乳白色。2 .气味：具有与种子酸奶同样的香味，无酒精发酵味，无霉味或其他不良味道。3 .状态：凝块匀称，无气泡，没有乳清析出。4 .口臧：口感就好，与种子酸奶味道全都，芳香，顺滑，没有颗粒状物质。总结：本次试验所制作的酸乳，质量品质和外观色泽均特别好。六、思索题1
7、、牛乳的杀菌工艺有哪几种？牛乳的杀菌工艺中最经典的就是巴氏杀菌法和超高温灭菌法，还有煮沸杀菌法。2、乳酸菌在乳中发酵的原理是什么？牛乳为什么是凝固的？基本原理就是通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中酪蛋白（约占全乳的2.奖，占乳蛋白的85Q变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。试验二、甜酒酿的制作一、试验目的1、学习甜酒酿的发酵工艺：2、明确发酵的原理。二、试验原理甜酒酿是以糯米为主要原料，通过微生物的发酵酿制而成的。由于酵母不能直接采用淀粉，因此必需先用糖化菌如根霉、毛霉等把淀粉分解成单糖或双糖。因此，甜酒酿是在糖化菌和酵母菌共同作用下酿制而成的，甜酒酿的制作过程包括糖化和酒化两个过程
8、。糖化过程是在糖化菌如根霉分泌糖化酶的作用下，将淀粉水解成葡萄糖；酒化的过程是酵母菌采用葡萄糖经过emp途径生成丙酮酸，然后进入无氧呼吸将丙酮酸转化为乙醇。三、试验材料1、材料：糯米、酒药2、器材：烧杯、锡箔纸、吸管、电子天平、电磁炉、不锈钢匙、玻璃棒等四、试验步骤1、选择原料；选择粒大饱满、无蛀虫、无杂物、色泽鲜亮、质量好的新糯米共IlOOg,每小组大约有275g左右；2、淘洗浸泡；将米在水中浸泡12-24小时，后用自来水冲洗，浸米的目的是使米中的淀粉粒子吸水膨胀，便于蒸煮糊化；将浸泡好的米用自来水冲洗洁净，并沥干。3、蒸煮米饭；将洗净沥干的米在高压锅中隔水蒸煮10-20分钟，常压30-40
9、分钟。要求达到熟而不糊，外硬内软，内无白心，疏松易散，透而不烂，匀称全都。4、淋饭降温：用冷开水淋洗糯米饭，以达到降温增水的目的，并使熟饭表面光滑，易于拌入酒药，利于糖化发酵菌的繁殖：淋饭时要边拌边淋，使米饭快速降温至35。方右，避开因缓慢冷却导致微生物污染。5、接入酒曲；将冷却至30QE右的米饭，按糯米量1焦（约Ilg）接入酒药，将大米平均分成4份，拌匀装入烧杯，并在中心用玻璃棒打一孔道，搭成喇叭型凹窝（中间低，周边高），表面再撒上少许酒药，用封口膜封口。6、保温发酵：30。（培育48小时，待喇叭型凹窝内有很多液体渗出，即可食用，但此时酒味淡泊，略有酸味，若要品尝酒香浓郁的酒酿，可适当延长发
10、酵的时间。7、后熟发酵；在8-10CF培育2-3天。8、质量评估：酒香浓郁，液体清亮透亮，酒液充分。五、结果思索题结果分析：在保温发酵48小时后，将烧杯移除后，看到在烧杯的底部消失少量的清亮的液体，在喇叭口的大米的表层消失了白色的霉菌。在后发酵过程中，烧杯底部的清亮的液体的量不断增加。此时消失淡淡的酒精味，略有酸味。品鉴时，烧杯的底部消失了2cm厚的清亮的液体，酒精味浓郁，有一股淡淡的芳香。1、甜酒酿制作过程中应留意问题有哪些？在甜酒酿的制作过程中应留意在选择糯米的时候选取粒大饱满的新糯米，在蒸煮的时候，留意不要将米饭蒸糊，在淋饭降温的时候用冷开水快速降温，避开由于缓慢降温冷却导致其他微生物的
11、污染。在接种酒曲之后要搅拌匀称，接入适量的酒药，表面撒上少许酒药，留意用a4纸封口。保温发酵的温度为30C培育的时间为48小时。在进行质量报告时，当发觉米饭上层的霉菌消失黑色或者黄色时，不要食用。在进行品尝鉴评的时候，将上层的霉菌除去。2、说明甜酒酿制作的发醉原理？甜酒酿是在糖化菌和酵母菌共同作用下酿制而成的，甜酒酿的制作过程包括糖化和酒化两个过程。糖化过程是在糖化菌如根霉分泌糖化酶的作用下，将淀粉水解成葡萄糖；酒化的过程是酵母菌采用葡萄糖经过emp途径生成丙酮酸，然后进入无氧呼吸将丙酮酸转化为乙醇。试验三、槐耳粗多糖的提取一、试验目的1、把握发酵产物的精制过程；2、明确提取、浓缩、醇沉和干燥
12、的原理。二、试验原理温度提升能使细胞壁通透性增加并促进膨胀，增加了可溶性成分的溶解和集中速度，所以浸取温度越高，浸出速度越快。但温度提升后，某些目的产物不稳定发生分解变质，同时使挥发性目的产物挥发散失。因此，要把浸取温度掌握在适当的范围。在目的产物浸出过程中，溶剂的Ph值对浸出速度有影响。某些目的产物可溶解于酸性溶剂，则要使用酸性溶剂浸提；有些目的产物易溶解于碱性溶液，因而要选择碱性溶剂提取。依据目的产物的酸碱性质可确定提取过程中溶剂Ph值的范围。分级沉淀法是指在混合组分的溶液中加入与该溶液能互溶的溶剂，通过转变溶剂的极性而转变混合组分溶液中某些成分的溶解度，使其从溶液中析出。如在含有糖类或蛋
13、白质的水溶液中，分次加入乙醇（乙醇：中强极性，能与水以任何比例相混，乙醇浓度越高溶液极性越低。各种目的产物在乙醇中的溶解度随乙醇浓度的变化而变化），使醇含量逐步增高，逐级沉淀出分子量由大到小的蛋白质、多糖、多肽。浓缩的方法有蒸发浓缩、冷冻浓缩和汲取浓缩等，其中的蒸发浓缩是将溶液加热沸腾，使溶剂汽化除去，从而提高溶液中溶质的浓度，可以分为常压蒸发浓缩和真空蒸发浓缩两类。干燥时，发酵产品提取过程中的最终一个环节，是将潮湿的固体中的水除去的过程，与蒸发相比，水分是不在沸腾的状态下汽化，而是在其本身温度低于沸点的条件下进行，很多因素如物料的性质和外形、物料本身的温度、干燥介质的温度、湿度和流淌状况等影
14、响着干燥的速度。方法有空气加热干燥法、杰出加热法和冷冻升华干燥法。三、试验器材1、材料：槐耳2、器材：分液漏斗、电炉四、试验步骤1、浸泡2、：250g槐耳，粉碎后加入8倍蒸憎水浸泡24h;3、热浸提：ph自然，IOOoC不时搅拌，2h：4、过滤，残渣加入适量的水，重复抽提一次，合并两次提取所得滤液；5、浓缩，采纳蒸发浓缩法，加热至小于15OmI左右体积；6、去蛋白，连续2-3次加入氯仿：正丁醇=4:1溶液去除蛋白（SeVag法），至不显示蛋白反应为止，离心收集上清液。（注：SeVag法：加入0.2倍多糖体积的氯仿和乙醇的混合液，震荡分别15min左右，直到氯仿和水的界面没有沉淀为止，且重复处理
15、2-3次才能有效去除多糖中的蛋白质。）7、本次试验经浓缩和抽提之后获得80g的粗多糖提取液。将所得的多糖的粗提取液平均分成4份，依据每份的质量体积依据70限75%80%,853的乙醇浓度加入乙醇，室温下静止24h;8、离心（滤纸过滤，切记不要震荡）；360OrPm,离心Iomin9、收集沉淀，采纳对流加热干燥方法，60。Q口热干燥至恒重：10、称重，依据下表纪录数据。六、思索题1、沉淀多糖最适乙醇用量是什么？沉淀多糖最适的乙醇用量是75*浓度，大约是粗多糖浓缩液的4倍体积乙醇。2、粗多糖的提取率是多少？以最适乙醇的浓度75,为标准，粗多糖的提取率=1.02g(250g4)xlOO%=l.632
16、%篇:发酵试验报告发酵工程原理综合试验小型发酵罐的使用与发酵过程监测与分析学院名称：食品学院班级专业：09级生物工程试验日期摘发酵罐是用于培奇微生物或细胞的封闭容器或生物反应装置。可用于争论、分析或生产。有多种在材料、大小和外形上各异的产品。最常用的为全搅拌罐式反应器。发酵罐广泛应用于乳制品、饮料、生物工程、制药、精细化工等行业，罐体设有夹层、保温层、可加热、冷却、保温。罐体与上下填充头(或雏形)均采纳旋压r角加工，罐内壁经镜面抛光处理，无卫生死角，而全封闭设计确保物料始终处一无污染的状态下混合、发醉，设施配备空气呼吸孔，CiP清洗喷头，人孔等装置。本试验通过掌握合适的培育条件，使大肠杆菌快速
17、持续生长，在发酵过程中定时取样测定不同时期发酵液的细菌浊度及残留还原糖的变化了解发酵过程中菌体生长及对培育基的采用状况。关键词：大肠杆菌液体发酵最大比生长速率平均细胞得率系数目录前31 .材料与设施41.1. 材料41.1.1. 菌种41.1.2. 培育基41.1.3. 其他材料41.2. 设施42 .试验方法42.1. 流程42.2. 菌种预备52.2.1. 配制培育基52.2.2. 接种与培育52.3. 上罐前的预备52.4. 实罐灭菌62.5. 发酵操作62.5.1. 取样62.5.2. 接种72.5.3. 电脑监控72.5.4. 发酵管理72.6. 发酵过程中各项生理指标的测定72.6
18、.1. Od值测定72.6.2. 葡萄糖测定72.7. 放罐清洗83 .结果与分析93.1. 菌体浓度与吸光值关系标准曲线93.2. 发酵过程各参数变化规律93.3. 1干菌体浓度93.3.1. 葡萄糖浓度103.3.2. Ph值、do值和其他一些参数103.4. 各参数整理与分析113.5. 最大比生长速率133.6. 平均细胞得率系数154 .6试验操作对试验结果的影响153.6.1 菌种活化与一级菌种、二级菌种的制.153.6.2 摇153.6.3 上罐前管理153.6.4 实罐灭菌163.6.5 接种时管6.6 发酵时管7Od值测6.8 还原糖测6.9 试验中遇到的问题及猜参考文献18
19、发酵罐是进行液体发酵的专用设施。试验室使用的小型发酵罐，其体积可从11至数百升。一般51以下是用耐压玻璃制作罐体，101以上用不锈钢板或钢板制作罐体。发酵罐配备掌握系统，它主要是对发酵过程中的各种参数如温度、ph、溶解氧、搅拌速度、空气流量、补料、泡沫水公平进行设定、显示、纪录以及对这些参数进行反馈调整掌握。大肠杆菌(e.coli)是遗传工程争论过程中常用的受体菌，对大肠杆菌的遗传背景和生理特性争论已相当彻底，已有很多不同抗药性、不同养分依靠型和不同校正突变型的菌种供选择应用，可以依据不同的载体而选择不同的菌种。大肠杆菌在养分条件充分时，20-30min即可繁殖一代，而且大规模发酵成本低，具有
20、巨大的生产潜力为了解发酵过程中菌体的生长及对培育基的采用状况，需在发酵过程中定时地取样测定。包括对菌体进行镜检、测定不同时期发酵液的细菌浊度及残留还原糖(rg)的变化等。1 .材料与设施1.1. 材料1.1.1. 菌种大肠杆菌(e.coli)1.1.2. 培育基种子培育基：葡萄糖IOg,蛋白陈IOg,牛肉膏IOg,酵母膏5g,氯化钠5g,水IOOOmloph7.Oo发酵培育基：葡萄糖20g,蛋白陈10g,牛肉膏10g,酵母膏10g,氯化钠5g,氯化钱5g,水IOoom1。ph7.0o全部用自来水配制培育基。1.1.3. 其他材料泡敌、斐林试剂、0.1带标准葡萄糖溶液、40%氢氧化钠等。1.2.
21、 设施biotech-7bgz发酵罐1套（配套蠕动泵、Ph电极、溶氧（do）电极、空压机及全部连接管）、分光光度计、旋转式摇床、离心机、恒温培育箱等。2 .试验方法2.1. 流程菌种斜面一级种子37oC（250ml摇瓶）37培育IOh二级种子（500ml摇罐取分析测定发酵罐管路预备罐灭菌酵图1发酵过程流程2.2. 菌种预备2.2.1. 配制培育基配制种子固体培黄基IoOm1,分装试管，0.1mpa（12IoO灭菌20min,摆成斜面。配制种子培育液600ml,分别分装50ml于两个250InI三角瓶中（作一级种子瓶），余下550InI平均分装于三个50Oml三角瓶中（作二级种子用），同上灭菌备
22、用。2.2.2. 接种与培育2.2.2.1. 菌种活化上罐前两天，从冰箱中取出菌种转接斜面，37。（培育24h。2.2.2.2. 接一级种上罐前一天，由斜面菌种转接一级种子瓶，37丽荡（125rmin）培育12h。分别测接种前和培育结束时的。d值，计算出净增。d,并作纪录。2.2.2.3. 接二级种将一级种转接二级种子，接种量5Q之后，37（荡（125rmin）培育10h。2.3. 上罐前的预备洗净发酵罐及各联接胶管。配制发酵培育基5000ml,置发酵罐内，加入几滴泡敌。校正ph电极和溶氧（do）电极。安装好发酵罐，把电极插口、取样管、补料口、消泡剂料瓶等固定、密封好后，开夹套出、进水阀V2、
23、wl,使夹套布满水。篇四：微生物试验报告脓汁和粪便标本中病原菌的检测专业：学号：姓名：一、试验目的探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观看与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。在实践中学习培育基的制备、消毒和灭菌，细菌的分别与培育，细菌群体和个体形态特征的观看，细菌生化反应鉴定等技巧。从而把握微生物试验的各种操作方法，培育对微生物试验的爰好。二、试验材料器材打火机、油性笔、酒精灯、接种环、接种针、污物盘、一般冰柜、隔水式电热恒温培育箱、奥林巴斯cx21型生物显微镜、电炉、试管（带棉塞）、称蚩纸、药勺、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、尺子、锥形瓶、高压蒸汽灭菌器、镒子、玻片、吸水纸、拭镜纸试剂药品一般养分
24、琼脂培育基、蒸储水、脓汁标本、粪便标本、石蜡油、生理盐水、结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、稀释复红、葡萄精微量发酵管（2支）、乳糖微量发酵管（2支）、青霉素抗菌素纸片、链霉素抗菌素纸片、庆大霉素抗菌素纸片、血浆、福氏志贺菌诊断血清三、方法与步骤干粉培育基-蒸储水-加热溶化-分装-集中放在试管筐里-罩上硫酸纸、牛皮纸-用橡皮筋扎好-放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内-送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）-灭菌-（1）平板培育基：倾注平板IOnIL琼脂完全凝固后，平板倒放-4GK箱保存备用。（2）斜面培育基：培育基趁热斜放-琼脂凝固以后，4Gk箱保存备用。-贴上标签后灭菌使用。镰气的细菌学检查每组1个养分琼脂平板
25、，选择采样地点（试验室、卫生间或任选地点）T将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边-平板暴露于空气中15min-平板倒扣盖上-作标记-37。福箱培育24h-观看结果。体体表的细菌学检查甲乙常规洗手，丙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁共用1个平板按规定在一般平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对比。接种环烧灼灭菌-分别取脓汁标本与粪便标本点在一般平板和依红美蓝平板上，各做两份，-烧掉接种环上多余的标本-冷却后，应用分区划线分别法，将脓汁标本接种于养分琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）T接种环烧灼灭菌一,将平板倒置37。俱育1824h-观看结果
26、。接种环烧灼灭菌-选择平板上典型的四种单菌落（白色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜面接种纯培育T做好标记T接种环烧灼灭菌-，斜面培育基置于37。曲育过夜T保存备用西兰氏染色：取洁净载玻片-,用灭菌操作后的接种环取生理盐水1-2环于玻片上r挑取细菌培育物少许与盐水轻轻抹匀-待涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合-结晶紫初染Imin-水洗-卢戈碘液媒染Imin-水洗-95%乙醇脱色约2Os-水洗-稀释品红-复染Imin-水洗-吸干，镜检。Q肉汤接种法：接种环烧灼灭菌-分别在斜面培育物中挑取菌苔少许-马上移入肉汤培育基管中-在接近液面的管壁上轻轻研磨-沾取少量肉汤调和-混匀-试管口通过火焰2-
27、3次灭菌-塞好棉塞35C育46h接种环烧灼灭菌-分别取之前试验中得到的四种菌液在一般平板密集涂布T接种环烧灼灭菌标记：青、链、庆T银子火焰消毒-贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片T按压-,镜子消毒-,倒置37保育1824h-观看结果取洁净玻片一张-在左右两边分别滴加兔血浆1-2滴，生理盐水1滴-接种环烧灼灭菌-冷却-分别用接种环取之前试验所得到的白色和黄色菌苔（23个菌落的菌量）与血浆研磨混合一边混匀边观看结果-接种环烧灼灭菌-稍等片刻，观看结果接种针烧灼灭菌-用灭菌接种针分别刮取试验所得到的紫黑色和粉红色菌苔-分别接种在葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内-接种环烧灼灭菌-将微量管平放在平板内-
28、376吾育过夜后T观看结果。接种针烧灼灭菌-分别用接种针在紫黑色和粉红色的斜面取菌-从半固体培育基中心垂直刺入，可刺达近底管处，但不要到达管底-循原来的路线退出接种针T试管口快速通过火焰2-3次灭菌-塞好棉塞-烧灼灭菌接种针-37。型育24h-观看结果取洁净的载玻片一张T将磨面近端设为对比区T滴加生理盐水15Ul-远端设为试验区一滴加福氏志贺菌诊断血清15-接种环烧灼灭菌T用接种环分别取粉红色菌苔-研磨于盐水或血清内，混合匀称-接种环烧灼灭菌一载玻片来回倾侧-观看结果四、结果与争论对脓汁中细菌的分析争论1、用一般平板，从脓汁标本中分别出金黄色和白色两种菌落。2、在显微镜下观看时，这两种细菌均为
29、g+球菌，排列不规章，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌。3、结合菌落的颜色，可以初步断定，这是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。4、通过血浆凝固酶试验，观看到黄色菌落的细菌能使血浆产生颗粒性物质，说明为凝固酶阳性；白色菌落则没有凝集反应，说明其为凝固酶阻性。5、最终进行的是药敏试验，从培育基上可以观看到，不同的抗生素所形成的抑菌圈不同。其中青霉素对金黄色葡萄球菌最敏感。对粪便中细菌的分析争论1、用伊红美蓝平板分别菌落时，可以从粪便标本中分别出紫黑色具有金属光泽的菌落和粉红色半透亮菌落。2、在显微镜下观看时，这两种菌均为g-杆菌，排列不规章，从形态上不能鉴别是什么细菌。3、经糖发酵试验，可以观看到，紫黑
30、色的细菌能使葡萄糖和乳糖的试管变色和产生气体；粉红色的细菌只能使葡萄糖的试管变色。4、经半固体动力试验，观看到紫黑色的细菌使半固体培育基成浑浊状态，粉红色的细菌只在接种针插入的方向聚集。5、综上所述，紫黑色的细菌为大肠埃希菌，粉红色的细菌为志贺菌。6、最终进行药敏试验时，发觉大肠埃希菌对青霉素不敏感，对庆大霉素和链霉素都敏感。综上所述，脓汁标本中分别得黄色菌落为金黄色葡萄球菌，白色菌落为白色葡萄球菌，致病菌为金黄色葡萄球菌；粪便标本中分别得紫黑色菌落为大肠埃希菌，粉红菌落为福氏志贺菌，致病菌为福氏志贺菌。篇五：发酵试验报告发酵工艺及设施试验报告学院：化学化工学院专业：生物工程班级：1201学号
31、：202206030133同学姓名：程迅日期2022年11月试验一摇瓶发酵法制备糖化酶一、试验目的(1)把握摇床发酵法制备糖化酶的工艺流程及操作方法(2)了解采用黑曲霉菌菌种发酵时的生长条件及留意事项(3)娴熟把握试验过程中的无菌操作和培育条件的选择二、试验仪器及试剂菌种：黑曲霉仪器：锥形瓶(500ml),移液管、恒温水浴锅、秒表、50ml比色管、牛皮纸、纱布(8层)、Ph计。药品：三水乙酸钠、冰醋酸、硫代硫酸钠、碘、氢氧化钠、硫酸、可溶性淀粉、玉米粉、豆饼粉、熬皮三、试验原理摇瓶发酵是试验室常用的通风发酵方法，通过将装有液体发酵培育基的摇瓶放在摇床上振荡培育，以满意微生物生长、繁殖及产生很多
32、代谢产物对氧的需求。它是试验室筛选好气性菌种，以及摸索种子培育工艺与发酵工艺的常用方法。葡萄糖淀粉酶(ec3.2.1.3)系统名为淀粉-l,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，俗称糖化酶，是国内产量最大的酶品种。糖化酶对淀粉分子的作用是从非还原末端切开4键，也能切开G-1,3键和-l,6键，产生葡萄糖。糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原末端开头，分解-l,4-葡萄糖首键生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化，过度的次碘酸钠酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算酶活力。四、试验步骤1 .培育步骤1. 1种子培育基制备及灭菌将新奇土豆去皮切块，称取200300g土豆块放入500
33、InI烧杯中，加入肯定量水，在电炉上煮沸至土豆块熟透，用120目纱布过滤，滤渣反复用肯定量水清洗、过滤2次，合并各次滤液且定容至IoOOInI即得土豆汁。取肯定体积的土豆汁，在其中加入53的蔗糖，溶解摇句并调Ph至5.5,即得种子培育基。将适量种子培育基倒入锥形瓶(250ml),用纱布塞塞住管口，并用牛皮纸包扎，置灭菌锅中，于121CF灭菌30min0待灭菌完毕，冷却取出。2. 2发酵培育基制备及灭菌取6只50Omi摇瓶，分别按装液量IO0、200、30Oml配制培育基(玉米粉6%、豆饼粉2女麦夫皮1%),加水后略微摇动，使原料潮湿，浸入水中。用8层纱布包扎瓶口，再加牛皮纸包扎。置灭菌锅中，于
34、121CF灭菌30min01. 3发酵培育基接种：将已生长好的菌种，在无菌条件下，依据10%的接(8%-12%)接种到发酵培育基上。2. 4发酵培育基发酵：将摇瓶固定在摇床上，培育温度为31转速为120rmin,培育时间96h。显微镜观看菌丝形态，用试纸测发酵液ph,测定酶活力。摇瓶培育时观看各种摇瓶机的结构。3. 糖化酶活力测定4. 1待测酶液的制备：精确吸取液体酶1.00ml,先用少量的乙酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上清液当心倾入容量瓶中。沉渣部分再加入少量缓冲液，最终全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度(估量酶活力在100250uml范围内)，摇匀。通过4层纱布过滤，滤液供测定用。5
35、. 2酶活力测定：于甲、乙两支50ml比色管中，分别加入可溶性淀粉溶液25ml及缓冲液5mL摇匀后，于40超温水浴中预热5min。在甲管(样品)中加入待测酶液2ml,马上摇匀，在此温度下精确反应30min,马上各加入氢氧化钠溶液0.2ml,摇匀，将两管取出快速冷却，并于乙管(空白)中补加待测酶液2ml。吸取上述反应液与空白液各5mL分别置于碘量瓶中，精确加入碘溶液IOmL再加氢氧化钠溶液15ml,摇匀塞紧，于暗处反应15mino取出，加硫酸溶液2mL马上用硫代硫酸钠标准液滴定，直至蓝色刚好消逝为其终点O6. 3酶活力计算：样品酶活力(ug或uml)=579.9(a-b)cn式中：a与b分别为空
36、白、样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，ml；C为硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/1;n为稀释倍数。五、数据分析比较不同装液量下的菌体形态特征、酶活力，将结果填入下表：装液量/ml指标酶活力Ph菌体特征IOO420uml4.2200510uml4.1300570uml3.8消失球状的白色的菌丝团，瓶壁上消失黑丝的抱子和菌丝六、结论1 .不同的装液量对酶活力的影响是随着装液量的增加呈现提升的趋势，但是酶活力变化不大，并且酶活力不高，与其他组数据相比接种量跟酶活力关2,菌体特征在锥形瓶的瓶壁上消失白色的菌丝，在培育基中也消失了丝球3 .菌种新陈代谢的旺盛二氧化碳的释放增加，使Ph值渐渐下降，最终使
37、培育基的Ph下降至3.8左右。试验二酿酒酵母发酵过程参数的测定及计算一、试验目的4 .测定并绘制生长曲线、底物消耗曲线和产物形成曲线5 .了解发酵过程中葡萄糖的采用、菌体生长和产物生成的相互关系6 .初步学会菌体生长、底物消耗和产物生成有关发酵参数的求解二、试验仪器及试剂菌种：酿酒酵母仪器：锥形瓶(250ml),移液管、Ph计、生物传感仪、分析天平药品：酵母膏、胰蛋白月东、葡萄糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯甲酸钠、edta钠、氯化钠三、试验原理酵母菌是兼性厌氧型真菌，喜爰含糖的环境，有氧时将葡萄糖分解成c。？和水，无氧时将葡萄糖分解成酒精和二氧化碳，同时都释放出能量生物传减器由生物识别元件和信
38、号转换器组成，能够选择性地对样品中的待测物发出相应，通过生物识别系统和电化学或其他传感器把待测物质的浓度转为电信号，依据电信号的大小定量测出待测物质的浓度。生物传感器是应用生物活性材料(如酶、蛋白质、dna,抗体、抗原、生物膜等)与物理或化学换能器有机结合的一门交叉学科，是进展生物技术必不行少的一种先进的检测方法与监控方法，也是物质在分子水平的快速、微量分析方法四、试验步骤1 .种子培育基(yed,gl)：称取酵母膏Iog、胰蛋白陈20g、葡萄糖20g,加蒸储水溶解，调整Ph5.0左右，并定容至IOOom1。2 .发酵培育基(gl)：称取酵母膏10g,胰蛋白陈20g,葡萄糖IOOg加蒸锵水溶解
39、，调整Ph至5.0左右，定容至IOOom1,分装Io个锥形瓶(25OmI)封口12130min灭菌。3 .种子培育：将活化好的种子培育液，用移液管移去IOml接种于灭菌yepd液体培育基中，于30C120r/min全温摇瓶柜中培育24h左右，观看种子液的色泽、气味与形态等基本状况。4 .发酵方法：将培育好的种子液按8-123的接种比例，接种于发酵培育基中，置于30120r/min全温摇瓶柜中培育96ho5 .过程取样：发酵培育基接种发酵后，每隔8小时取样，移取45ml菌液至离心试管中3800rmin离心，上清液取出分析，菌泥放置烘箱烘干，分析菌体生物量、残余葡萄糖浓度与酒精生成量，并以此为基础数据计算参数6 .生物量的测定：取等量的两份发酵液，一份由烘干法测得菌体干重(dew),另一份稀释成肯定的浓度于630nm下测定吸光值(Od值)，得到标准曲线为dcw=3.87od(r=0.996)o再以相同方法测得样品的Od值，按标准曲线计算出菌体干重。
