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1、乙肝e抗原HBeAg(雅培)该SOP医学检验文件已阅声明表(Procedurecircu1.ationform文件名称：乙肝E抗原检测作业指导书表号：KMMPo30202已阅声明：本人承诺已/解此文件中的相关内容，今后的工作中将严格依据此文件执行，不随意对外传阅此文件，如有因与文件不相符的操作，责任由本人担当。(Ihaveunderstoodthere1.evantcontentofthedocument.1wi1.1.keepthedocumentsecretandberesponsib1.etoproper1.yperformprocedure)阅读人签名表姓名(NAME)职务(POS1.
2、TI0)签名(SIGNATURE)签名日期(DATE)文件修改记录页(Procedureamendmentform)表号：KM-MP030203序号NO.页码(Page)内容更改说明(DescriptionofModifiedcontents)审批人(APProVedby)批准生效日期(Approveddate)1换版文件信息表(Procedureinformationform)表号：KM-MPo30204文件名称TitIeofDOC.(Doc.Code)乙肝E抗原检测作业指导书(KV-SoPo300343)版本号(EditionNo.)Edition3.0生效日期(Operativedate
3、)2008-03-13文控部11(Doc.Contro1.Dept.)试验室文控室回顾日期(ReVieiVdate)回顾人员签名(Signature)回顾日期/签名(Reviewdate/signature)替代文件(RePIaeCS)乙肝E抗原检测作业指导书(EditiOn2.0)存放地点(1.OCation)/持有人(Ho1.der)No.1.ocation(Ho1.der)No.1.ocation(HoMer)1.试验室文控室(陈彬)2化学发光室(段学成)作者签名/日期(AuthorSignatUre/date)廖巍俊审批人签名/口期(AUthoriZedby:Signature/Dat
4、e)陈建波接收入签名/日期(ReCeiPtOr/Da1.e)副本数(CoPyNo.)乙肝e抗原检测作业指导书(雅培)(Standardoperationprocedureforana1.ysisofHBcAg)1.原理(TeStprincip1.e):微粒子酶免分析法(MEI):标本与微粒子于肯定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行肯定时间的反应，反应液的一部分被移到玻璃纤上，洗去未反应的被检物质与其他不要成分，反应的其次阶段终了后，再次冲洗，将未反应的其次抗体除去，加入基质液，基质液被碱性磷酸的分解成MU,当该生成物受荧光照耀后就产生荧光，测定荧光强度的变更率，从而确定被测物质的
5、浓度。并用测初速度法代替终点法，提高了结果的精确性。2. 样本收集和储存(SPeCimenCo1.IeCtionandStOrage):标本收集(SPCCimenco1.1.ection):类型(Type):血清、血浆(柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂、ACD-A.CD-B.CPD.CP2D、CPDAT、EDTA钾、草酸钾抗凝。用量(VO1.Ume)0.6m1.不抗凝血,仪器加样量(SamPIingV抗Ume)2151.拒收标本(Specimenrejection)：其它抗凝标本、其它体液标本拒收：加热灭活标本拒收；有明显微生物污染的样本应拒收。为避开纤维蛋白对结果的影响，必需确定离心处理前样本已经完
6、全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，须要延长凝集时间。标本储存条件(SPeCimCnstorageconditions)：室温及2-8C均可保存7天，十天后处理标本。3、试剂(Reagent)：3. 1美国AXSYM原装试剂。试剂盒组分(ComPonenIs)：试剂盒(ReagentPaCk)100人份，冷藏保存，运用累计时间不行超过112小时。试剂1：6.9m1.鼠单克隆乙肝e抗体包被的微粒子TRIS溶液，添加有蛋白稳定剂，其最小浓度为0005%,防腐剂为叠氮钠。试剂2：10.3m1.鼠单克隆乙肝e抗体碱性磷酸IWTRIS缓冲液结合物，添加有蛋白稳定剂，其最小浓度为0.1.ugm1
7、.,防腐剂为便氮钠和抗生素。试剂3：19.2m1.TRIS缓冲液，防腐剂为叠氮钠。试剂4：50.2M1NaC1.TRIS标本稀释液，防腐剂为叠氮钠和抗生素。校准物：1瓶4m1.雅培HBeAg校准液，含HBeAg重组DN,其缓冲液为TRIS缓冲液，添加有蛋白稳定剂，防腐剂为登氮钠。未随试剂盒供应的组分：HBeAg质控物:两瓶9m1.的雅培HBsg质控。阴性质控（Contro1.-）：HBeAg阴性质控，其缓冲液为TRIS缓冲液，添加有蛋白稔定剂，防腐剂为便氮钠。阳性质控（Contro1.+）：HBeAg阳性质控，其缓冲液为TRIS缓冲液，添加有蛋白稳定剂，防腐剂为叠氮钠。质控范围(S/CO)0.
8、00-0.80阳性1.20-2.79其它试剂:质控颜色阴性质控黄色质控红色探针清洗液:TEAH：氢氧化四（羟乙基）铉，四瓶装（UOm1.每瓶）或两瓶装（22Om1.每瓶），含2%氢氧化四（羟乙基）铉。15-30C保存。1号液：MUP：四甲基磷酸伞型泄，四瓶装（22Om1.每瓶），含1.2mM四甲基磷酸伞型酮。防腐剂为桎氮钠。2-8C保存，在雅培仪器上运用累计时间不行超过14天。3号液：Matrixce1.1.wash：纤维杯洗液，四瓶装Cooom每瓶），为含0.3MNaC1.的TRIS缓冲液。防腐剂为橙氮钠和抗生素。15-30C保存。4号液：Di1.uent：稀释液，1瓶（IO1.）稀释液含0
9、IM磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗生素。15-30C保存。其它必需：Matrixce1.1.s：纤维杯ReactionVesse1.s：RV杯（反应杯）试剂打算（reagentpreparation）：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温：不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可运用。Putreagentfromrefrigeratorytoroomtemperatureforpropertime：Newreagent1.otsmustbetestedinpara1.Ie1.witho1.d1.otsbeforeorconcurrent1.
10、ywithbeingp1.acedinservicetoensurethattheca1.ibrationofthenew1.otofreagenthasmaintainedconsistentresu1.tsforpatientspecimens.Recodtheresu1.ts.4仪器(Instrument)：美国AXSYMABBOTTo4 .1仪器打算(Prepareapparatus)：运用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的1号液、3号液、4号液、纤维杯、RV杯。然后运行仪器操作软件。将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。5 .平安防范(SafetyPrecautions)A.日常的平
11、安防范全部试验室的工作人员必需穿戴手套和工作服；当离开试验室和进入办公室前必需脱掉手套：全部接触过样品的手套，枪头和其它物件须丢弃在标有生物危害的垃圾箱中；生物危害的垃圾须每天适时的处理以保持清洁：尽量避开运用尖锐的物品和器具；宜用不易裂开的材料制品；工作台在每天工作结束后用次氯酸钠溶液清洗。工作完毕，应脱去手套后洗手，再脱去工作服，然后用消毒液洗手。B.血样的处理来自病人可能带有肝炎，HIV病毒的血样假如不正确的处理在吸取，处理，分析和存储标本时会传染到工作人员。在处理血样时工作人员须娴熟学会防护，戴不易渗透的手套，禁止用嘴吸取样品；避开接触血清；不要用戴手套的手触摸暴露的皮肤，口，眼。运用
12、过的枪头必需先丢弃在有消毒液的容器中：全部的血样须存在密封的容器中：为了避开形成气溶胶，全部样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间。C.溢出处理被污染的区域应马上用次氯酸钠溶液清洗，先在污染区外四周倒入消毒液，再向中心消毒处；擦试用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中6校准(CaIibrationifApp1.icab1.e)：6.1校准品储存和运用(Ca1.ibrationmateria1.storageandusage)当运用新批号试剂之前，都须要对试剂盒进行校准。将试剂盒放入试剂转盘后，在ORDER1.IST内申请校准，采纳专用条码样本杯座，将校标液(每杯8滴)按指定位依次放入样本架，起先
13、校准。(非新试剂盒不做此步)。要求在有效期内运用，过期的校准液应停止运用，保存于2-8C可稳定到有效期。Stopusingoverdueca1.ibrationmateria1.,useitwithinexpirationdate,storagein2-8校准品成分的稳定性：保存于1525eC,可稳定8小时保存于28C,可稳定2天保存于(T5)(-25),可稔定1个月(不行反复冻融)。6 .2当下列任何一种状况出现时，请重新校准：(Ifoneofthetwohappens,reca1.ibration)(1)试剂批号变更(Reagent1.otchanges)(2)依据质控须要进行校准(Rec
14、a1.ibrationbasedonqua1.itycontro1.prob1.em)(3)校准周期(Frequencyofca1.ibration)：两周(Twoweeks)。6. 3步骤：每个样品杯至少加入样品200u1.o将样本杯按仪器指定位置放好后，按RUN键起先。仪器闩动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必需跟做全部浓度的质控，如质控在控则校准通过。7操作过程：(Procedura1.Steps)7.1将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的已经按试验号编好号样本管本项目编号为3xxx(一个X代表一个阿拉伯数字)。7. 2取出空样木架，将含有血清的样本管加
15、入样品架中，在ORDER1.IST中的PATIENT中申请试验项目或质控项目，然后点FI进入确认菜单，确认申请无误后，按RUN键运行。7 .3结果出来后，在RESU1.TS中查询。选定结果后，按PRINT健打印，再按13键把结果传入系统。(Senddatato1.IS)7.4数据审核(Datacheckup)：数据审核：联机是否正确？比照申请表格与仪器1.IST中的试验号和加样杯号是否一一正确对应，原始导出结果与系统结果是否对应。8 质量限制(QUaIitycontro1.)：运用雅培HBeAg质控物做室内质控。每工作日至少做两个浓度的值。质控结果推断、拒绝标准与处理参照HBeAg质控物说明书
16、。9 计算(CaICUIatiOnSifApp1.icab1.e)：N10参考范围：(Referenceinterva1.)阳性：S/C01.00阴性：S/C01.00S/CO：样本检测值与临界值的比值H结果说明：(InterpretationofRCSU1.tS)HBeAg并不能检测出全部具有HBV传染性的个体，HBeAg检测结果阴性并不能解除无传染性，也不能解除感梁HBV的可能性。HBeAg检测并不能用来区分急性和慢性乙肝病毒感染。若需区分急性和慢性乙肝，需结合病人症状及其它血清学标记物。本参考值不适用于尸体样本和其它体液(如尿、唾液、精液、羊水不行运用加热灭活样本。冰冻标本检测前需离心。
17、12方法的局限性(Method1.imitations)：HBeAg并不能检测出全部具有HBV传染性的个体，HBeAg检测结果阴性并不能解除无传染性，也不能解除感梁HBV的可能性。HBeAg检测并不能用来区分急性和慢性乙肝病毒感染。若需区分急性和慢性乙肝，需结合病人症状及其它血清学标记物。本参考值不适用于尸体样本和其它体液(如尿、唾液、精液、羊水)。不行运用加热灭活样本。冰冻标本检测前需离心。12.1干扰物质(InterferingSubstances)：胆红素影响(Bi1.irubin)：样本中胆红素的浓度直至20mgd1.,在试验允许的精密度范围内对结果没有影响。溶血影响(Hemo1.ys
18、is)：样本中压积红细胞的浓度宜至500mgd1.,在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。脂血影响(1.iPOPrOtein)：样本中甘油三酯的浓度直至3000mgd1.,在检测允许的精密度范围内对结果没有影响12.7留意事项(Notices)e仅供体外诊断运用。(Useon1.yforinvitrodiagnosis)12.8其他(Others)：方法学比较或项目的特别要求等。13临床意义：(C1.inica1.Significance)HBeAg在乙型肝炎潜藏期的后期出现，略晚于HBsAg的出现，而消逝较早，与HBV-DNA亲密相关。其临床意义为：(1)可作为急性乙肝协助诊断和预后指标，
19、急性乙肝进入熨原期常随HBsAg的消逝而消逝。假如急性乙肝发病后3-4个月，HBeAg由阳转阴，抗-HBE出现，表示预后良好.起病3-6个月，仍HBeAg(+),可能是急性肝炎转为慢性的最早证据。(2)有助于推断乙肝患者或HBV携带者的传染性强弱。HBeAg存在于HBsAg阳性者血清中，说明血液中有Dane额粒，多数HBV-DNA阳性，三者消长基本呈平行关系。所以HBcAgG)者具有很强的传染性：(3)HBCAg阳性提示HBV在体内复制：(4)母婴传播中，孕妇分娩时HBeAg(+)可能扩大母婴之间的传播率。14参考文献：(References)临床生物化学和生物化学检验.美国AXSYM乙肝E抗原试剂说明书中华医学检验全书美国AXSYM操作说明书
