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1、园艺植物离体培日学的班本含义I.慎物离体培育指通过无苗操作.使植物体的各类结构材料（外一体）接种于人工IE制的培育圣上.在:人工以制的环境条件卜避行离体培育的攵技术。方法,通常称之为植物处织培口式植物的维胞与组除培秆.2 .高体培育技术体系吓脱培H及以胚胎为延础的培育技术器左及;SrrKiM培克组织培育剂胆培仃EM岫培ft以原生境体为盛硼的珞音技术3 .离体培育的应用多种的繁育与般称种喊资过的？：存细眼次生代甜物质的4:产细熨I：程卬恭因工程的生物技术育种ifi1学和生均学基8的探讨园艺楂物离体培褥学的形成与发展（）.植物离体培育的渊源及其早期的实践1902勺、hubcrIIind1.提IHr
2、细胞仝能处的观点.井J次进行精物细胞培育试物.（-.植物离体培门魅本技术体系的形成1934年white背次建*T番茄的无性繁殖系1937年hite发觉b块做生物素和与保乙酸对离休培育的作用19341939年Vhite等人初毋让立起41物离体培育的将本方法1943-White发衣了第IWfi物离体培植物S1Uft育手又玳所提出了细峨全能性，1957年SkaoK建立器官分化的激兴配比模式.1953年nuir报道了细K悬泞培育法，（三）园林植物离体培育学科的建立I、完善喝体培育技术、探完理论基础1964-1.三年该系未成熟花粉形成小位体植株，I960邠分别而茄动根侦生成体茨官川I利.】978尔首先狭
3、得了体缥胸杂种一一-potato.植物空咆今能性为基因转化佻应便利.2、开拓一用探讨生产上应用城广泛，业胜利的领域是点体快速笨殖，植物离体培育学与同名科学的关系.阳体培育与帽2田构育种学（三）、肉体培育与园艺植均基础学科第一章离体培育的某本操作方法通过学习，理杆和与袁离体培育的她本操作方法包括I奴的材粉选取.无的技术.第口格配置和环境条件调控为林植物快繁技术打下基R1.外植体的选择与处理外桁体植物密体培育中的各种接种材料,包括他物体各个捐自、纲织，细电和原4：斯体等.外的体的选择1,选择优良的种质主要的园之植物迭取性优R的种段先特殊的韭因里耍仃明的目的具行肯定的代表性1.选择建壮的植株生长建壮
4、的无病虫苫的植株正常的器官和翊织今年生植物应从成年树上取材1.选择外植体的大小即植体太人奶污染太小多形成急伤组织外植体大小在0.5-1.OEu1.选取对植体的时期-殷依据植物生长的很适时期取材含附哭物特多的植物.质状的类物含此低的李。取材从种苗m推芽苗期，埴明代等因数，确定选取外植体的合适时期.1 .选择细胞培育材料通常依据细胞用白的H的选择细懒格力廿口多一-纳茎类分生组织和胚胎培育的6Ozff1.-作为细胞培丙的起始材料.为r生产次生代耐产物，则选取某次生物Mi含断四的特定器官或殂织.（二）*培育材料的处理1、母株的B1.处理促使母株的生长带身活跣便利取材简洁灭的降铁污柒率2 .外植体休眠阴
5、的处理通常采纳低Si或者赤甯药剂进行处虑.3、外救体的灭菌进行声格的灭世林科家源取材郃位取材季节第二节培育茎的刎备培育茎的种类及加成1 .培育茎外粒体生长的养分制防,通菰有两个水平.一是里木培育茎包括大果元素和费T元*.维生木和翅玳酸,还fiM和水.：足完全珞丙茎,即在茶本培育的基砌上.依粼各种不同试验以求，附加3物质，如各种依物生长调婺剂以及其它的用摩有机附加物,外植体生长的非分物质.恭本培育茎大M元案依械元案，雉生常叙格fiS驰水完全培育茎盛木培育茎植物生长调够剂（有机附加物）2 .固体培育茎和液体培育茎的比较固体培育茎设备简洁运用便利充分利用培行容IS中的养分易选成自我毒有液体培育茎须要
6、竹定的设%H利于外M株的生长避开上述固体珞可茎的缺点3 .常见培育茎配方（参见教材附录2）。配制培育茎的打算工作（.SSn1.和用口的打N主要却一:烧杯、滴泞、试管潺R的打算，清洁烘F（二）、水和药品水除则上用纯水，般用蒸隔水即可化学为丛阳分析.纯或化学纯（三）、IT备液的配剂】.Itifr液的类8!人fit元素扩大IO-SO倍微量元素扩大KIO倍铁衲扩大】00倍（feso4.7h2o+na2-eita）柚物生长调整剂0.,1.2贮各液的配制分别称用：溶解混合依存三、配剂培H茎的方法少W蒸饰水溶解废纵倒入100ftn1.齐城版吸取各种g:备液放入容鼠瓶定容转移到大烧杯与球脂加热溶解PhiHIR
7、分袋灭丽保存苗用无菌技术灭苗常用1热火倒法工作条件为IBo1.CA1.r用意用牛皮纸等包扎好;SUI（其）4.外植体的灭前（1）75%乙醉（2）氯化汞（3）次救峻他（2）无菌掾作涧浸和杀荫作用浓度为0.1%浓度210%30s5Iftnin,无嬉水冲洗35次1.5-3011in,无侑水冲洗3-5次1 .无曲操作前IOmin先使超净工作台处于工作状态.2 .穿板好工作衣帽后，用70%酒精檄拭双手个工作台面。操作期间，也应在擦技数次，3 .拨塞的，要用火焰灼热瓶I,用硫酸纸等做雁击的，应在火焰旁边打开盆子.4 .操作时,试管口附略略向下,避开尘埃杀菌落入管内,又使干操作.第四节环班条件的操作（一）光
8、照1 .光照时间；12-16hr2 .光照强度：1000-5000x3 .光照长短（光源）：日光灯（二）温度也限制在252X?恒温条件下培育（三）湿度瓶内被可达刎100%,避开环境源度过小防改瓶内失水汽体谕开培育室内存在有斌气体及次顼胚胎培仃和离休受相通过学习.了悌胚球和广阳培科离体受精的M哈培有技术,珅丽和寸忒胚培育.胚乳培丙的胚胎培育技术.第一节用体胚培育（）胚培育的意义I.促使发育不良或中途收行的胚发育成熟分别发ff不出的种f或即将败在班的种肝进行培ff.促使胜接的发行至成熟使杂交11抑成如保杂交获得胜利,特殊对货育制进行TJH点体箔H,在遗价和H种上均具有里要念文.2 .打破休眠期促进
9、胚痂发对于有休眠期的种/可通过灰珞行.促使休眠种门出早萌发或苗,缩幅讦种周期或加速繁育R种.3 .品种珠心胚的FttH石W胜发育受见.共珠心M可以侵入胜寞,使台予跖发开受汛影阴朵交有种工作.利用胚胎培育技术,期分别作干胚培育,解除珠心不我,耗行杂种胚.4 .快速繁殖良种胚末5 .诱导胚性愈伤组织肉体胚好育的发育途径：按正常胚胎发Iff途径形成植株合子现形胚心形胚h的ca+相结合的透导融合方法电融合技术杂种彻照.的选抨和体细板杂种的签定第六率细胞欠傥性及我养分代谢 植物细胞全能性 植物细胞全能性：位物细胞具有该掠物有机体的全部遗传信息，并具有形成机物有机体全部细施类型,自然发育成完整植株的实力.
10、 植物细胞全能性的展现和利用外M体在1芽曲发等状况F卜腌发育成而.还克以在界养条件卜脱分化，形成愈伤组想,禽伤编织可以再分化,也可以游隅收牛.Mi体.用以遗传提作.或新离细嵬川以次生物所生产操作的旧生皮体和削胞均可象愈伤饥织样，虫观再分化，再分化可以是胚状体途径，也可是不定器由一径.IW者可以用以制备人工种了.胚状体和不定密它均可以种旗保存,也均可形成试泞窗,用以快速无性繁殖.试管陆方式培育成为进行植物生命树期样的成年植株.开花站果，完成自体培育周期。第二节培育物的养分 碳源碳源物册以镌类物脓M的？J.IR的说.法州是收好的W观.我次是鱼名期.!Kffi.期的浓度-IK为2-4%氯源硝仓总Mf
11、t6有机现合物三.无机养分大软元素和微录元素四.淮生素Vb1.vb五、生K潮整刑生长一类tIaa削胞分裂素类：次级代谢概况及生物转化举例次级代谢的调整1 .初级代谢对此基代谢的调整2 .次级代谢的的促调胫3 .环境因素而次级代谢的调整Ibanaa24d6-baktztZiP第三节培方物的次纵代甜第七章外植体的根分化。生.K第一节外植体脱分化诱导期间的细胞生物质变更1 .气体变换率的增加,2 .rnn随体的合成3 .过飘化物陶的增加4.很白质的活跃合成5.的类物原的增加6.乙懦增加第二节念物母织的生长第三节悬浮培育细胞的生长 成批培育的细胞生长动态1 .生长周期2 .生长周期中指数生长的数字表述
12、3 .生长周期中的不平衡生长二、连续培育下的细熨生长1长动力学蜡述2学恒定与浓度忸定悬浮培育细胞周期第八券培育物内分化再分化：是指寅体培仃物由脱分状态再展分化.町分化可在细胞水平，H1.双水平和得育水平逼进地迸行.仙终再生完警植楂,用斤物的再分化.通过：珀发生和FttJ分化口再形成Ift株这两个途径实现.苏一节Si板分化和组织分化细胞分化1.导管分子的分化及其影响因素(1)生长WiKJ剂生长素细根分裂素其它生长同整剂2)独类物城3)其它理化因子光的效应温度的效应Ph2.细帼分化过程及其机理组织分化1 .拟分组织；是指培育物中出现的类拟分生组织的细胞群，它是脱分化后的培百物发生的一系列细胞分裂而
13、产生的一团小型、薄壁、液泡小、细胞核和细胞垢柒色较深的细胞组成，它具分化上的可熨性.2 .维管组织结节：是一个区域的愈伤加织转化为切皮分子和木旗分子的混令体结构，这样的形成层状的细隐向外延长与拟分生山织连接，形成根原鹤或牙原茶.可以认为如:普结节是试管机株的维管束的曲力.3 .拟分生组织和维管组织是连接细胞分化和器官分化的“桥梁”火次节据百分化和植株形成茎、根器官的分化1.器官分化的调控1 .限制器官分化的激素模式生长素/激烈素，生长尚激烈泰的相对高水平,有利于根的形成，反之，有利于地上部的形成。在运用中留叁：者的种类，浓度及其比例.2 .培育基组分和附加物的作用提岛无机p含磁促进器官分化,糖
14、的平衡可逆转生长蒸，激烈素的比例：不加还原缸利于根的形成.一些生理活性物质下可促进培育物的器它发生.3 .物理环境：一般固态培育基有利于器官变更。光对器官分化有重要影响，100015CIoC1.1.N是很多培育物的合适光照，16hr光照符合器官发生要求，连紫外统和蓝光朝激芽的发生，而红光显著地促进长根，一般日光灯供应光源，一般259左右的培育温度.2.揖甘分化过程中的生物学和细胞学变史植株的形成体发育为B1.株乂根茎两极器官桁株外植体脱分化不定器育MS光茎后根出住先根后苴植株第三节圉体胚胎发生各种培存类型的离体胚发生1 .对植体干脆发生二倍体胚2 .愈伤组织产生胚状体3 .悬浮细胞产生胚I.单
15、倍体胚胎发生影响离体胚胎发生的因素1 .外部因素生K调整剂的作用(2)知源(3)其它因了2 .内部因素(1)如4的隔离2遗传基因型的影响(3外植体法源和年舲(4)共它因素离休胚胎发生的机制第九章培育物的遗传与变异第节培育细跑变异培育细胞高频率变异的起因1 .原来具不同检型的细胞杯诙导分裂2 .培仔条件引起新的异样培育细则变异的遗传机理1 .染色体断裂，染色体数增加2 .染色体断裂，染色体数削M3 .染色体断裂.并引起染色体数变更4 .染色体断裂，但并不引起染色体数目的变更5 .体细胞核内再复制6 .单个核基因的突变7 .转座子的作用&花粉植株的遗传变异 花粉植株的遗传稳定性问SS 花粉植株的变
16、异 单倍体植株的减数分裂分析o体细胞融合体的遗传变异异核体的和鎏色体形成。核分裂同步、核融合，且亲本的桀色体未出现不亲和观象O核分裂同步相同或互影响后同步）核融合,但在不同培育期发生染色体变更（染色体重组或丢失）.o核不融合，且两个核间Hi又产生新膜、两个子细胞的以后各自分裂，。核不融合，形成多核细胞.细胞周期混乱 胞质基因组的分裂与重组第卜率离体培育附体繁殖：也杉微型繁殖或快速无性繁出,是农业生物技术吸妥JH成之,在农业生产上应用录广泛的个领域. 离体繁殖的特点及其应用材料的灭做1.ifiiUK.去掉外机体表面带的酗片及过多的校叶，然后用肥电水冲洗2.采纳水塔材料3:次酒役法印忖料用消#剂处
17、理后,用清水冲洗啊用低浓度次/酸刖冲洗次马上接种4 .添加抗曲剂或吸杀曲剂进行消毒5 .还应出叁防治他变）培育生般it立无他林倏的培育茶%来纳Khit。成ns培开基.并列加低浓收的生长素或剂热分裂素.彷导无茵材料建立繁心系,初步绘代培fi,扩大繁殖材*1二、培育U科的增殖是良种无性快繁的用要环V.增殖的结果安求供应人Jft的透传性检定.整齐效的种苗.因此，须考虑以下几个因索（）塘豫的方式增!的方式有四种途在，即股芽的萌发，产生不定根和胚胎发生以及除母茎增班途桂仁：）增殖的培ff些及附加物1.ttI加的扬本培育茎2,植物生长训整制（三）懵用培育的其它因素1.增班体的大小与酸代培ft的何隔2培科的
18、光照与湖1如湖收为259左右光照为12hr四靖殖培育留意事项I.芽苗的变异2,技玻苗的限制提珏琼腑的浓度降低珈附分我求浓度培育些添加低浓度多效叶三、制芽生根培育Cffc附加物I.添加活性炭有利.2.间笨有利于生根.3.生根培育的温度般要比芽增殖所能界设略版一些.四、小苗格霸化试评笛的移植是从“片养”到“门养”的转变.须要仃个逐步理应的过程.移植之前,试管苗必需提高光强进行圾茴，同时进步将瓶11包扎物打开进行圾制，移物时,首先把见着F根部的球曲冲洗干净.同时宿.徐避开根茎部破伤.移苗的士草要求保水.透气,以利小苗生K.移植的小黄阳造温度和光照的耿化,即Si度渐渐降低.光照亚城理步加强.外四节人工
19、种子的新IW 研制人工种子的意义。概念狭义：格池物离体将fj中产生的胚枳体，包楸在含药推分和具有爱护功能的种质巾在相宜条件下能够发芽出苗的颗粒体.广义：人工和f包括胚状体、分体及小蜗茎,用S1.股包袱成球体或块状或其他形态的种物， 诋义 人工种子制作方法及其程序。研制流程体细和灰胎发生r体细物胚胎同步化体削亚胚分选r体例1也胚包袱人工赃丸一包袱外胺一种贮存一种广播种动发. 体细胞胚的发生系统1.人工种子对胚状体的要求2.胚状体的发生与同步化的箍选 限制培H茎成分及激素：密度梯度禺心法进行大小胚分别筛选；过渔分选或仪器分选法等等.O人工种皮般是指人工种子中胚状体及K奘惶狗以为的部分的统称.以海潼
20、酸钠、明股、WK.gr1.ritc为城隹，包制人种F的方法有：干堞法、离子交换法和冷却法. 人工种子贮存+-育体培育无病毒菌第一Ir培育无京毒菌的:义 园艺植物精阴病的严峻性 脱出病毒的探讨概况1.化学杀菌剂2.种子繁船3.热处理 离体培育脱毒的意义离体培H脱毒是园艺植物生产中的叔要环节.是常规良种Xt相的个有要程序.其次节晟除制毒的方法 茎尖分生组织脱毒原理I.茎尖培育脱毒原理例你在精株上.的分布是不均的,在幼嫩的州织比成熟的组织生命蚊.茎尖分生祖织几手不带诳.K由为I1.分生组织的细胞生长速度快，病毒在植物体内紧殆的速度相时较慢：I.病毒的传播是靠筛管组织进行转移,或通过细胞间连续传递给其
21、他细胞，因此病毒的传递始敢也受到肯定影响.1.茎尖脱毒的方法关过足名尖的大小,即娈考上脱库效果，又餐用毒茎尖离体培百的成活率,殷加取0.2-0.511n.带1-2个叶的茎尖作材料.为了，一效率,可与热处理WiH.脱毒的整定无病毒株原的鉴定1.指示植物鉴定法1.抗血清鉴定法I.电子显微镜检查法脱毒苗农艺性状鉴定1.通过不同途径脱毒处理,可能导致良种种性的变更.1.无粉毒胶定后，必需诳行田间农艺性状鉴定，才能应用，1.脱毒苗的农艺性状鉴定必需在隔离的环境条件下进行.1.脱毒相鉴定图的任务：1.选择与亲本相同的优良经济性状的植株1,淘浓非亲本性状的劣质植株1.发觉不同于亲本的优良性状的突变系。I.对
22、可脱毒苗后代新生系的选择材料，还有必要作进一步的抗性签定等等.无病毒JK种的保存和应用无病毒原种的保存1.隔离种植保存I.臼然环境进行隔齿种抗保存1.采纳隔风网室300目沙网）种植保存.1,肉体保存无病毒原种的应用1 .无病毒原种的繁殖：建立严格的原种繁对制度，防治病毒在感染，1.无病毒原种的推广可以参照新品种反之推广制度.特殊用意实行严密的防止病猱加红网然的有关措施，才能取设预期的效果。“十二育体保存辞及责育体保存种黄的意义种子（种植）保存法的局限性1.种子的生活力1.忙存物的延长渐渐丢失：1.无性繁殖的植物难以用种子保存：1.种子贮存易遭遇自然灾难而丢失：1.种板保存需大量土地，花费巨大的
23、人力、物力进行管理，但易受病虫书而毁坏，也不便于种质交换试管保存的优点1.试管内保存无性系，占用空间小，可贮存大量种质资源；1.可以解除病点，便于国际种质沟通1,生产上须要可T上进行快速大量:繁加1.保存费用低廉， 限制生长保存方法 培育基添加生长抑制剂 提高培育基渗透区 降低培科腌内氧分区 培Ff物干燥保存。中低WiII控生长保存般用cuiK保存外体或结合健文培塞透区.该方法处用保存中如期的种（ft材料. 超低保存科质 超低温保存的基本原理和主要环节激数中几乎全部细熨的代谢活动.生氏过程伤止r,仅保存细胞的活动和形态发生的潜能.Wf的遗传变异， 超低淞保存技术1.保存材料的选取I.冷冻前材料
24、的预处理1.添加冷冻防护剂1.材料冷冻的方法1.材料保存1.保存材料解冰1.保存材料红苏培育第十三家育体培肓在晶片改良上的戌用 培育细胞变异系的利用 自发变异系的利用在离体培育中,交井如鬼可描领率的表现出来.只要加以计定分别选择,就叮以利用变异系进行丛种改良. 培育细胞的人工i秀发突变1,诱变剂类型及其处理I.细咆突变体的分别暗选方法）T.附选择法间接选择法1.有应用潜力的突变系的选择和利用1.涉及优质，高产等性状的突变系I.抗性突变系1 .抗妖基酸及其类似物,嚎哈和嗡咤类似物的突变系2 .遗梅转化物化I波词晚是指一个细他丛系由于汲取了另一个珈曲品系的ndn而发生迪化性状变更的现象.现在一般认
25、为：凡外it1.nda导入涮熨的过程都可指出化,包括用愎生质体1合的方法把斑个核后入细熨.原生质体转移核、质范因祖1.通过原生质体融合培H抗兵新品种或合成新品种。I.通过原生质体融合转移细胞质基因限制的性状.1.原生质体摄取外源细胞器.干脆行化1.日的法因的分别1.基因干脆转化法1.转化基因材料的分析与鉴定载体介导的轿化I.H质粒及其改建I.去除1.dna区的激索基因：1.保留1.dna的左右边界,尤其是左边界：1.在去除的1.dM区,熠加可以在植物体内表达的选择基因：1.在t-dna区加一个可以克隆外源自的蝶因的多聚接口：1.在t-dna区外加一个抗菌素的基因，用以标记这个质粒，这个基因只能
26、在细雨内表达，而不能在植物体内表达.1.农杆曲的转化1.植物细胞的转化及转化体的检测，第十困章育体培育生产次生物Jt蝴胞培育生产次生物质的意义及特点利用细解培育生产次生物旗的意义剂胞培行次生物版优式（1.j栽培出均相比:1.细跑培育在人工限制的环境条件下进行，不受气候等限制，1.削减占用大餐土地以及栽培植物的管理。I.细胞生长可自动化限制，在代谢过程中可进行合理诩整，提高生产率，并可得到稳定的产品质量.1.细恂培Fr的生产系统较规范化，“J依据市场供销状况有安排的调控。植物细胞培Ir工厂化生产技术一般发酵窿的生产程序1 .细胞株系建立1 .扩大培IerI.大罐培HI.产品提取与纯化筛选高产细胞
27、系枭纳商效率的培褥方法1.二步培育法1.培育基中添加前提；1.培育基中生长调整剂的作用1.培育条件的影响1.采纳固相细胞培育系统，务三节毋意，毋必，毋固.毋我.一论语子罕篇君子有九思：视思明，听思聪，色也温，貌思恭，言思忠，犷思敬，疑思问，念思理，见汨思义。4论语季氏第3君子不器.一论语为政篇成事不说，遂事不谏,既往不咎.一论语八侑篇见胡思齐用，见不贤而内自告也，论语里仁篇往者不行谏，来者犹可追”论语微子篇巧笑倩兮.美目盼兮.素以为绚兮.一论i普八僧篇3父母在，不远游,游必有方._於仑语里仁篇*君子泰而不罪，小人骄而不泰。一论语子路篇3我非生而知之者，好古，敏以求之者也，_4论语述而篇3可与吉
28、而不与之吉,失人：不行与吉而与之言.失言.知者不失人亦不失才一论谙卫灵公篇3不如无位，也所以立.不患其己知，求为可知也。一夕改语里.仁输2中人以上，可以语上也；中人以卜，不行以语上也.论语班也篇B错不孤,必有锦.於仑谙里仁篇b君子欲讷于吉而敏于行.一论谱里仁篇9知音乐水，仁者乐山.知者动，仁者静.知者乐，仁者寿.一灯仑语雍也篇存十有五而忐于学，三十而立，四十而不感，五十而知天命，六十而耳顺，七十而从心所欲不途矩.论语为政篇名不正.则有不顺：言不顺,则事不成论语子路篇3未知生，焉知死？论语先进篇K-父母之年，不行不知也.一则以宓，一则以惧._匕论语里仁人而无信，不知其可也。大车无线，小车无辄，其
29、何以行之战？论语为政篇己所不欲,勿施于人.一论语颜源篇3志于道,先于诲,依于仁，游于艺.一论哂述而篇$益者三友，榻者三友。友且、友谅、友多同，益矣；友便辟、友善柔、友便佞，损矣。_M论语季氏篇敬而好学.不耻下何,足以谓之文也.一夕论语公冶长5从心所欲不逾矩.一C论语为政篇A投之亡地然后存，陷之死地然后生。_孙子宾法九地前3今之孝者，是谓能养,至于犬马官能有养；不敢，何以别乎？论语为政篇忠告而善道之,不行则止，毋自辱焉一论语颜渊篇视其所以，观其所由，察其所安，人后险戕！人瑞座战！一论语为政篇欲速则不达。一论语子路篇有期同道，夕死可矣.一论语里仁篇逝者如斯夫！不舍昼夜.一论谱子罕篇科日三省占身：为人读而不出乎？与挚友交而不信乎？传不习乎？一论语学而篇温故而知新，可以为师矣，_论语为政篇？不在其位，不谋其政，C论语秦伯篇b君子和而不同,小人同而不和一论语子路篇3学而不思则罔,思而不学则殆.一论语为政篇3
