α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)测定标准操作规程.docx

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1、。-羟丁酸脱氢酶(Q-HBDH)测定标准操作规程1.检验原理:(酶学速率法)羟丁酸脱氢酶催化酮丁酸还原为羟基丁酸,在此过程中,还原型辅酶I(NADH)被氧化为氧化型辅酶I(NAD+),通过在340nm处监测吸光度下降的速度,即可计算出样本中a-羟丁酸脱氢酶的活力。A-酮丁酸+NADH+H+3建J邀脱和a-羟基丁酸+NAD+2.试剂主要组成成分组成成分浓度Rl三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH6.1)1OOmmo1/L酮丁酸3.5mmolLR2三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.3)1OOmmo1/L还原型辅酶I(NADH)Immo1/L3.样本要求:静脉采血。新鲜无溶血血清。28保48小时,-20C保存

2、7天,样本不可反复冻融!样本中抗坏血酸含量W0.3g/L、胆红素含量0.4gL血红蛋白含量W5.Og/L、乳糜含量W5.Og/L对检测结果基本无影响。4.检验方法;仪器法(详见DF-603Db600标准操作规程)5.参考范围:样本参考范围(U/L)血清72-1826.检验结果的解释:6. 1样本含量超出线性范围时,建议用0.9%(W/V)的氯化钠溶液稀释样本.建议最大稀释不超过10倍。7. 2.单位换算:ukatL=UL16.671037.检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。7. 2若试剂浑浊,或以水空白在340nm处吸光度小于0.800时不能使用。8.

3、 3检验结果仅供参考,不作为临床诊断的唯一依据。8.试剂性能指标8.1 试剂外观:无色透明液体,无悬浮物及沉淀。8. 2装量:不低于标识值。8. 3试剂空白8.3. 1试剂空白吸光度:在37、34Onm处,光径ICm时,空白吸光度A21.0008. 3.2试剂空白吸光度变化率:在370C340nm处,光径Icm时,AULmin0.002.8 .4分析灵敏度:在340nm处,光径ICm时,测量1U/L的-羟丁酸脱氢酶时,吸光度变化4AlVminL26XIO-9 .5线性区间:试剂的线性区间为25-750UL,在此线性区间内:a)线性相关系数r应不小于0.9900;b)25TOOUL区间内,线性绝

4、对偏差不超过土10ULo10L750UL区间内,线性相对偏差不超过10%。8. 6精密度8. 6.1重复性:CV5%9. 6.2批间差:R10%8. 7准确度:8. 7.1使用比对试验,测定结果的相关系数r0.9759. 7.272UL范围内,每个浓度点的绝对偏差不超过7.2U/L;72UL范围内,每个浓度点的相对偏差不超过10%。10. 床意义:-羟丁酸脱氢酶(-HBDH)与乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK)天门冬氨酸氨基转移酶(AST)一起构成了心肌酶谱,对于诊断心肌梗死有重要意义。血清a-羟丁酸脱氢酶增高主要见于:心肌梗死、活动性风湿性心肌炎、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血等。尽管肝脏和心脏疾病均可引起aTBDH活性增高,但aTBDH活性在肝脏疾病时变化不是很大,而在心脏疾病时有明显增高,故aTBDH可用于肝病和心肌梗死的鉴别诊断。活动性风湿性心肌炎、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血等因可引起血清中LDHl和LDH2活性增高,故a-HBDH活性亦增高。

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