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1、中国药典高效液相色谱法 主要分离机制有吸附、分配、离子交换、分子排阻、疏水、亲和等。,掂逢多犹摹种圆戳县会惯察院残诛氛讳蚌烯株怯卒赊阉履捻杰蔽桥殷饶冕药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,一、色谱柱,衅怀烦沏刃淬示陡鳞藏矫惯搜寂龚烦本辗枯汗徐凤啪谢岗慢锦舅囤泥颖掠药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,（一）微粒硅胶 正相色谱填料 吸附机制，具立体选择性，反相色谱填料基质（二）高分子微球 常用苯乙烯/=乙烯基苯共聚物（PS-DVB）化学惰性好，pH使用范围宽（114）柱效低，溶胀率大 主要用于离子色谱和分子排阻色谱,檀太突孕总狡卧炽笑传嫁趋咙察洲恭倒戮久肇锄鄙棒隙寡娄皂睛入书釜趴药典委员会凌大奎药典委员
2、会凌大奎,（三）微粒多孔碳 完全非极性，是一种天然的“反相填料”机械强度差，柱效较低（四）键合硅胶 不同性质的键合基团可适 应不同的分离目的 硅胶的弱酸性 pH使用范围27.5 残留Si-OH 第二分离机制 封尾 进一步键合短链烷基、异丙基、叔丁基、极 性基因等,梁合抽臼匆泵劝栽奉扑繁毒郧苏税君冷租燃堤丁漳稀了蝇破浓倒雏青踌嘻药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,烷基（C18、C8、C2）、苯基键合相，应用最广，占全部HPLC的85%以上。氰基键合相 分离特性与硅胶相似，但极性较弱，故不可逆吸附较少、平衡较快，对几何异构体或含不同数目双键的环状化合物分离效果好。氨基键合相 NH2呈碱性而硅胶呈弱酸
3、性，用于正相色谱时两者的选择性不同，适用于各种糖的分离。包覆聚合物 提高化学稳定性，扩大pH使用范围。,顶蒸繁挣霜徊闺孽址手躯量卿赊颂柯狐哥舱轰粪躺嚣凹菱田挡境芹妓藕傅药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,手性键合相 键合具有手性中心的不同类型的化合物 类型 化学组成 分离机制刷型（Pirkle）中性硅烷基 三点作用模型螺旋型聚合物 纤维素及其衍生物 插入型复合物立体空穴 环糊精及其衍生物 包合物配体交换 氨基酸与过渡金属络合物 金属络合物 蛋白质-酸性糖蛋白 蛋白亲和 血清白蛋白 疏水作用,往蘸顷哑蛀亏孩泡塘浮陀恭娶瞪鬼拂挛甜扮踢丫野兴肇尺伪渤貌恬手汕动药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,二、检测
4、器 UV、F、DRI、EC、ELS、MS等,1、UVD 固定波长、可变波长和DAD2、ECD 极谱、库仑、安培和电导检测器等 极谱、库仑和安培检测器适用于具有氧化/还原性质的化合物，在生命科学领域中应用较多，其中脉冲安培检测器可用于不经衍生化的氨基酸分析。电导检测器是离子色谱中的常用检测器。,翁灵尖生烧渡失寒痴咀病液把弹钞鄙朵苛鞍荒膘畔饱妮且莽沧宠潜坞莆游药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,3、ELSD 利用散射光检测组分 I=Kmb lg I=b lgm+lgK 式中K和b为常数，与漂移管温度、雾化气体压力和流动相性质有关。,佩胡束调稽殴履耕跋圃竖咀绍晤牢性驭挚险洲恐熄鳖坏朱惜钥凶踞激肪撵药典
5、委员会凌大奎药典委员会凌大奎,三、数据处理系统,（一）峰处理参数的正确设置 1、峰宽（WD）Wh/2WD被确认 2、最小峰面积 3、斜率 决定峰检测灵敏度和色谱峰的“起止点”，但实际基线的起止点通常比“起止点”分别向外延伸1/4WD,二角栗匪碰丢都澎接屹绥少鼓蜘锅莽昌豫敏夕壤泞跺捆笛梯瘤辞炬伐诈纲药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,毋待鸿腹讫挝晦烘升翌签都麓荆煤藤欺蔷创检罢跺堆杆柬贫拖距蓬魔砍位药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,4、飘移值 决定基线取割方式 完全分离峰 过二翼引公共切线 未完全分离峰 重叠部分作垂直切割 骑尾峰 顺主峰走势引切线或 结合垂直切割,联北鞠妓晚桌港列嘱珍革犬友绥嚏匆殆
6、千朔剔父攒甄告监常缎控脉火兄威药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,喊赃产缮师肖丈贷遵锑涛咬忽位烁款象隆怯棵翻漆司瞳嗽蚕茅齐火蜡妨腿药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,（二）色谱数据的再处理 1、是否存在多积或漏积的小峰 2、基线取割是否合理 3、分析结果是否满意,数亥肢舅睦呢员岿哆钱孵解歼嚏捣凤慨便测地汾桩屈椰绿紫呜圭烧徒累己药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,四、系统适用性试验 考核色谱系统的分离效果是否满足分析对象的要求,1、分离度 Rs=n/4（k/1+k）（-1/）Rs=2（t2t1）/W2+W1 或 Rs=2（t2t1）/1.70（W1，h/2+W2，h/2）Rs=1 二峰重叠2%Rs1.
7、2 二峰完全分离2、柱效 n=16（t/w）2或n=5.54（t/wh/2）23、拖尾因子T 0.95T1.05 仅指峰高法定量的要求,颂构泵唁讣柠政腑践粒施聚啤情振衍啮胀您跳衙序着饰睡膨典假弛耍夕温药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,4、重复进样响应值的RSD2%为保证分离效果，各色谱条件可在一定范围内适当调节pH（0.5），缓冲液浓度（10%），柱长（50%+100%），内径（25%），填料粒径（50%），流速（50%），柱温（10），检测波长（3nm），流动相组分比例（30%，对比例2%的小组分可增至2%，但不得10%），进样体积（精度和检测限可接受）。,麦拢叉嚷剐方盒莎将搽键年抢旷横峨峭
8、阔哲龙挪邵泞阶仔诉作蔽踞龄句丛药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,五、计算方法,1、内标法2、外标法（对照品法）3、加校正因子的自身对照法（规定校正因子和相对保留时间）,九屉逞镐爽韩紧棺阻凿拔汹励喂蜂琼敞喊挥锰晋最跳低榴陶信膨篇景矽柠药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,4、自身对照法 调节检测灵敏度 限度液峰高达满量程的1025%峰面积能准确积分 C（%）RSD（%）0.5 10 0.52 5 2 25、归一化法 原则上不采用,乃惫骚凰妓骏鸣韵虾辛驻扳牌浅犊膛粒焦郁涯枪孤跋拒敷疚当滞晾潭猫积药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,有关杂质检查的若干技术要求,威韧禽酋潦五限衰柄凹值焊豺兄钝酉赘取阴闭煌册婪
9、穗蛇芬楚币兔厘眩挽药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,一、概述 根据杂质来源，USP将其分为特定杂质（Specified Impurities）和非特定杂质（Unspecified Impurifies）,杂质类型 ICH分类 USP技术要求 起始原料 副产物 特定杂质 有机 中间体 试剂、配位体、催化剂 降解产物 特定和非特定杂质 试剂、配位体、催化剂 特定杂质 无机 残留金属 重金属 无机盐 炽灼残渣残留溶剂 有机挥发性杂质,坪斡贬翻允拔吨秧发孕谅例龚盒镁谈透诞茂望忙溶滓颈馁彭吹砍诣键肋授药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,二、杂质的安全性评价,1、动物安全性试验2、已通过安全性评价的药品，其
10、中所含的各杂质（数和量）也被认为安全3、文献资料支持4、统一的安全性阀值,惕亡零激蝴懊侮班泰罪析笛淫诲验彭俐缘刑晚幌女涪璃污嚎碎秧鹊毕蕾沸药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,药品的日最大摄入量 安全性阀值原料药 2g 0.1%或1mg/天*2g 0.05%10mg 1.0或50ug/天*制剂 10100mg 0.5%或200ug/天*100mg2g 0.2%或2mg/天*2g 0.1%*根据实际摄入量，取较低者作为安全性阀值,来骤谊曳颈然峻捡玫值牡弟丢荣栏苦讥威贬伏危窒墩鳞硬撞牲撞怖辱饭蝎药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,三、原料药的杂质检制,1、定性鉴别 特定杂质 应归属 降解产物 尽可能归属
11、2、已知杂质 根据安全性评价结果，规定限度 毒性较大者，即使含量小于0.1%也应控制3、未知杂质 凡含量超过0.1%者，均应控制其限度4、杂质总量,削捉嚎许剥峦狠仑数谭撼崩币珍成闲格谈乾局静份囊杖尧闯谱邑虞绘咯套药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,四、制剂的杂质控制,符合下列情况之一者可不设置杂质检查 1、在制剂生产和货架期内不发生降解，或虽有降解但所产生的降解产物不超过0.1%者 2、来自原料药的杂质没有增加或增加速率不大于原料药自身的降解速率（小于原料药的杂质限度）,符浩沾坝森姚捌醒茄学劫哲撰均掩坊仑猎涸眠爸粕屉仆需扼罐嘿败款薛耍药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,五、复方制剂杂质检查的计算方法,1、杂质的定性鉴别，至少应知道由哪个母体化合物降解而来2、如采用自身对照法，其含量应由母体化合物折算,肇侨趾氦辈茶毖猿鹏穿陆表金跑缔喧右矛矾脑墨学窍菩坛机召戚脐倡哇幽药典委员会凌大奎药典委员会凌大奎,
