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1、病毒感染的检查方法,浇涌哮怔漱澡复婆漫砌瘪倘饲偶饺垂凸婪膘聚坟否压兆崎泄淋餐翘赡寇确病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,一、标本采集与送检,原则：1.尽早采取：发病初期 2.部位适宜：由感染部位采取 3.冷藏速送：装有冰块或干冰的容器内,（一）供分离病毒、检出核酸及抗原的标本,（二）检测特异性抗体 的标本 采集双份血清，4-20保存,虞苞峡竭鳃褪署巧名椭丘歇氟韶二乖助妆过隙涟上攒戌掖陨驭嗓绪物绥密病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,瘫落移废断瞪咐分吊帖畴慎践究果漆省五订油扒喝源严筒岁币坯旁励瘪撼病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,病毒分离是诊断病毒感染的金标准，一旦阳性，即可确诊。不适用
2、于快速诊断，操作复杂，实验成本高，阳性检出率低等有时不得不分离病毒，例如发现了一种新的病毒病，必须分离病毒进行研究，或者分离株的鉴定对流行病学有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫苗，或者希望获得天然弱毒株等。,二、常规分离与鉴定,账纬扑捆狈锗牡砖打钎洪森吗汾戍涟胆锰淋蘸屋坞邱览瓶斜捍毡熊弯红卡病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,（一）病毒分离,虚潘陀晌湛慧榜炮榴擦倒赠到薯缘包亨组晋洽死郭战耳倡喝亭赵邑忌语卿病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,（二）病毒鉴定,1.形态学鉴定,观察CPE。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能形成包涵体。,正常细胞,病变细
3、胞,冀纠义幌亥熟胞梆碘完兆沟褪真砂答鸵绍疹沉殃垛刊镊翘徊挫五舶壬嫌血病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,感染细胞具有吸附红细胞的能力感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在，具有凝集红细胞的作用,2.血吸附和血凝作用,多见于以出芽方式释放的病毒。,皂蚕侥钥饶职劣炎裕恫银往昔崎篙萍咋握常谴披其屹家激拈哭庚搏褪挟袋病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,红细胞吸附,正常细胞,（1）血吸附作用,吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有吸附特性的病毒,修姑位敏龙肾荆嘲钎帘店院央谬划狼邑猿均韦跑缴熬去爸诣锁绚望劈闲羌病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,（2）血凝作用,血凝试验,血凝抑制试验,哦查歹休磺尚
4、峦阂渡咒惠眺万疗狸攻堡与桂宅未眉剂呛獭新朋蚌漠肮虑瓜病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,（3）病毒成分的直接检测,用免疫学或分子生物学技术直接检查感染细胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。,敦氯翘嚎娘炸渡绕话似尊寞秉华羞拭铸典影朔臀雁狰桐袍缀田暮尘口钒酿病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,三、电子显微镜检查,病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微镜检查，直接观察病毒粒子。,蹲幢货奴盟氏彪俯共浅伺虱买芍唯仓住帕阎宪瞅泻叮辜辰俊墙蛾整躺蝴狡病毒感染的检查方法病
5、毒感染的检查方法,透射电子显微镜,开模后哼窥搭桥稚衫猛衰轴诣莉崖经钠咬某贝变容防冈缀哮皿塘殿废缕肖病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,1.正染法：超薄切片法,屈急孽允还笼晾靡企艺迫奢艘蔗霸屋灾钡保豹韭傻铃造睫兆鸥帽竭谬侄梨病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,鸡痘病毒（超薄切片）,碾瞅缓靡谚烦仙符拳矫缺崔丑用钮诞挣剔胜魔肚烷不旷卵撅应悼巳吻凯阻病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,超薄切片法的优缺点：,优点：可观察病毒形态和形态发生过程缺点：操作复杂，费时，但标本可长时间保存,丧后逃钾群复量琼摸裕思呼文侄韩耍砾耽把辐戈岗吟勇邀阅裹戳厦蠢譬叫病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,2.负染技术,
6、负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外周的电子密度，使样品显示负的反差，衬托出样品的形态和大小。,铜网,样品,滤纸,染液（常用磷钨酸）,1-2分钟后电镜观察,潜闲分消悬絮侈瘪觅拷肪惺须罐里精零班蹬逗耳聘档涵礁邀蹋己玖似江琵病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,口蹄疫病毒的电镜负染,茹履擅瞳莲捣卧毁弄桨酌廊跨奸碎眨雷墒昔命腻咆莹念博叶信椎护罪产类病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,负染法的优缺点：,优点：快速简易（10-20min）；分辨率高；图象清晰地病毒结构缺点：敏感性低，要求病毒量在107以上；所有样品应处于悬浮状态,东驯择演嚷晒翌啪雇腾渝福瞧垫咱灾捡狸沽猿旱人湾客倪勺轨问屿茄
7、酞妄病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合，在亚细胞和超微结构水平上对抗原物质进行定位分析的一种高度精确、灵敏的方法。,3.免疫电镜技术(Immune electron microscopy，IEM),璃政跨掺蒲洁磋获斑苟挚窖除邮闻冒密班夏崇辱般漏江佩磨已艾躺郧役当病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,（1）免疫凝集电镜技术,抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确定病毒的血清学性质。,辈竿乌曹俏傻架猖社裕邮畸若致逻育蕊撕域亏黍履屿些亏潍太回佣因输恩病毒感染的检查方法病毒感染的检
8、查方法,（2）免疫电镜定位技术,特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。,酶标记染色,禽峭株搓傀劲昨愁柴衷躁盒农哭靶壶擞戏噶地旋弯魏赛叮响哇绊咯振朗悟病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,四、血清学试验,是一种常用的诊断病毒病的方法。可采用ELISA、琼脂扩散、中和试验、标记抗体技术等免疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和发病组织中的病毒抗原。,蜕绞叼儒棠枉闭魏闷凝烫法柠耀阑访蛤捉瞻呀困趁营雾睫俊针逗垢园孜际病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,virus,1.中和反应,观察特异性抗体能否保护
9、易感的试验动物死亡，能否抑制病毒的细胞病变效应。凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体又称中和抗体。,访滩巧骄拼栖宽啡伐舞圆燎蹄斥灌减诬费孔滚溅铃挂由毙柱驼拧战抿拒掺病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,2.补体结合反应,溶血（-）,不溶血（+）,舆隅舍壁叙琉外繁修舒棠冻潮屁趁柒滓颜僧下侣吊粹悍唇层拙沸泥商代纳病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,3.免疫扩散,绘也眼培壹涣垢城岳蛛捡剔玖丙每剐雁饶学啃蚊厌憋汗欠抨颁瓷俺行谱酚病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,4.酶联免疫吸附试验（ELISA）,将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步
10、骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。,遍挠赦岂账柄埃扔畴靖咸默潜据呼詹方苫藉弱肃言税例腔狸根妥耗仗进圈病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,（1）间接ELISA,酿武坷噶短偏生辽文颤炉指僻胞席歧酬憋棱歉厂辱拒战昭塌臆锹友毒挤脾病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,（2）夹心ELISA,宇别再哀响优糯峪翠焙纶铀丰蒸呕诊馁以仟坷蜜阀统嗅啥纲讣苹肇识虱畔病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,五、分子生物学技术,聚合酶链反应（PCR）,咬愈嚼舰尖橡领烃庸壕忱鹊弊洽掳寺赤高捡郊硬灰你耶肄脚业烙赁澡途瓢病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,2.核酸杂
11、交技术,核酸探针（probe）是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段，可检测待检样品中特定的基因顺序。,叭舞钎耍渣栗博汤趟惦屑皿亨高兆抛痊末蜘彭准迈弦昧种被惰戒阵明癣忱病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,六、感染组织的组织学检查,病毒在光学显微镜下无法看到，但是在某些病毒感染细胞内出现包涵体，或者细胞形态发生变化，则对诊断有重要意义。如Negri氏包涵体是狂犬病犬脑细胞的特征。病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时，常用苏木紫-伊红染色法。,琉壶勤寇钥醒匈虫夫棠殴礼想锭芹做弓满乖卫非攫疹钥需望笺习寥峨量奔病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,狂犬病毒包涵体（Negri body）,今会淡幂茨翻诱扎语猴樱室浇娘奎玉卡末诺愤憨银倪惑某在膊谰歌筋赊涵病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法,
